梅花鹿感染產氣莢膜梭菌的診斷及中西醫結合治療

羅 柳 湯德元 曾智勇 黃 濤 張 森 楊志剛 晏仁潭 韓超逸

(貴州大學動物科學學院，貴陽，550025)

1 臨床癥狀

2020年5月下旬，貴州省某動物園存欄的20頭梅花鹿(Cervusnippon)部分出現食欲減退、精神沉郁等癥狀，病程2～3 d，隨后腹瀉、胃部脹大、食欲廢絕，有6頭梅花鹿接連發病死亡(圖1)。經詢問飼養管理人員發現，梅花鹿沒有出現明顯的發熱，現場測量3頭發病梅花鹿的體溫分別為38.7、39.6、41.5 ℃，其臨床癥狀表現為精神沉郁，不食，皮溫不穩，耳、鼻、四肢末端發涼，口腔黏膜暗紅，腹部有疼痛反應，有仰頭蹬腿的表現，且呼吸急促，排出惡臭糞便。

圖1 患病與病死梅花鹿臨床癥狀

2 剖檢結果

將發病死亡梅花鹿進行剖檢(圖2)，可見其腹膜充血嚴重并帶有出血點，腸黏膜充血出血脹氣，胃膜充血出血且胃內有大量未消化草料，腹膜與腹壁多處粘黏，脾臟充血，肺部充血，腎臟腫大，肝臟腫大且有多處梗死灶。

圖2 病死梅花鹿剖檢結果

3 實驗室診斷

3.1 細菌分離培養

無菌制作肺部觸片及腸道觸片，進行革蘭氏染色(圖3A、B)。無菌采集發病梅花鹿的病料，接種在涂布10%胎牛血清的LB固體培養基上，37 ℃恒溫箱中厭氧培養12 h，可見白濁環狀菌落。挑取部分該菌落涂于載玻片進行革蘭氏染色，在光學顯微鏡下可見兩端鈍圓的藍紫色革蘭陽性、短粗的桿菌(圖3C)。

圖3 病死梅花鹿鏡檢結果

3.2 生化特性鑒定

按照細菌微量生化鑒定管說明書進行操作，從培養基中挑選部分菌落，接種于細菌微量生化鑒定管中進行生化特性鑒定。結果表明：該細菌對葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖和果糖呈陽性，且產酸產氣；對木糖、甘露醇和山梨醇呈陰性；在含鐵牛乳試驗中出現“洶涌發酵”現象；硫化氫試驗、明膠液化試驗呈陽性；靛基質試驗呈陰性。結合細菌培養特性及生化特性鑒定結果，判斷分離菌為產氣莢膜梭菌(Clostridiumperfringens)。

3.3 支原體PCR檢測結果

將送檢的梅花鹿病料無菌采取病變及周邊部位，混合研磨，液氮反復凍融3次，勻漿器磨20 min后收集勻漿，12 000 r/min 離心10 min，取上清液，用TaKaRa MinBEST Viral DNARNA Extraction Kit Ver.5.0 試劑盒分別提取核酸。

進行支原體PCR擴增。反應結束后取5 μL PCR產物于1%的瓊脂糖凝膠中電泳檢測(90 V，35 min)，用凝膠成像系統拍照記錄。結果未檢測出支原體的特異性條帶(圖4)。

圖4 病死梅花鹿病變組織核酸PCR擴增結果

4 治療方案

西獸醫治療：青霉素鈉80萬IU×6支/頭，用10 mL生理鹽水稀釋后，配合慶大霉素8萬IU×6支/頭，用麻醉槍肌內注射，2次/d，連用6 d。

外部清理消毒：水槽及料槽清洗消毒，在料槽中添加新的潔凈草料。水槽中添加葡萄糖、維生素C，按6 g/頭口服飼喂6 d。12 h后更換水槽飲用水重新投藥，投藥2 d后未有新發病梅花鹿，已發病梅花鹿逐漸恢復飲食，投藥3 d后停止投放葡萄糖，維生素C投藥6 d。

中獸醫治療：中獸醫辯證該病屬里證，因疫癘所致。疫癘，是一種外感致病因素，一般具有較強傳染性，發病急驟，蔓延迅速[1]。疫癘流行主要受氣候反常變化、環境衛生不良等因素的影響。由于貴州地區的氣溫變化較大，降雨較多，本次梅花鹿發病應屬外邪入里。治療方劑采用《傷寒論》的“白頭翁湯”加減，組方為白頭翁15 g、黃柏15 g、黃連15 g、郁金10 g、豬苓15 g、茯苓15 g，候溫飼喂，每頭每天1劑，連用6 d后梅花鹿群基本恢復正常。

5 討論

通過對發病梅花鹿的臨床癥狀、病理變化及革蘭氏染色觀察，判斷其患有產氣莢膜梭菌感染。采取了中藥內服、外部清理消毒及抗生素投喂的綜合治療方法，經過1 d的治療，沒有新增死亡病例。經過6 d的治療后，發病梅花鹿全部被治愈。

產氣莢膜梭菌病是由產氣莢膜梭菌(也稱魏氏梭菌)感染引起的病畜多種器官出血、急性病變和突然死亡為主要特征的疾病。該病病程短，致死率極高，應以預防為主，并加強管理[2]。第一，建議梅花鹿園區及周邊使用0.1% KMnO4水溶液進行徹底消毒，對發病死亡的梅花鹿進行無害化處理，如鋪墊及覆蓋生石灰深埋、焚燒等[3]；第二，對發病梅花鹿進行隔離，防止產氣莢膜梭菌感染擴散及交叉感染園內其他動物；第三，保證食物干凈新鮮衛生，營養均衡，提高機體抵抗力，嚴禁飼喂發霉變質飼料，保證梅花鹿體內腸道正常菌群平衡[4]。為防止應激情況，應提前在飲水中添加電解多維，同時對圈舍、水槽、料槽及飼養工具進行清潔和消毒，保持潔凈和干燥，提高動物的生活環境質量，從而預防疫病發生。建議該動物園采用鹿猝死病三聯菌苗，或將本地分離菌株經甲醛滅活后，使用氫氧化鋁作為佐劑制成滅活苗接種，可有效防止產氣莢膜梭菌病的發生。