喜炎平注射液霧化吸入對小鼠祛痰抗炎作用研究

劉秀麗，王安娜，劉 博，陳世超，韓 冬

（吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，長春 130021）

喜炎平注射液是一種廣譜抗病毒中成藥，主要成分為穿心蓮內(nèi)酯、穿心蓮新苷、脫水穿心蓮內(nèi)酯等。近來研究發(fā)現(xiàn)，其對一些病毒和細(xì)菌具有抑制作用，還可對抗內(nèi)毒素，用于治療急性上呼吸道感染、流感、手足口病、毛細(xì)支氣管炎、皰疹性咽峽炎、流行性腮腺炎、傳染性單核細(xì)胞增多癥、病毒性腦炎等[1-11]。目前臨床喜炎平霧化吸入給藥能夠有效改善臨床癥狀，降低不良反應(yīng)發(fā)生率。本研究通過小鼠祛痰實驗、抗炎實驗明確喜炎平注射液霧化吸入給藥有效性。

1 材料與方法

1.1 材料 YLS-8B小動物霧化給藥儀由濟南益延科技發(fā)展有限公司提供，722可見分光光度計由上海精密科學(xué)儀器有限公司制造，EX-100A 由沈陽天平電子儀器廠制造。喜炎平注射液(江西青峰藥業(yè)有限公司，批號20210130003)，吸入用乙酰半胱氨酸溶液（ZAMBON S.p.A，批號 28005190），地塞米松磷酸鈉注射液（遂成藥業(yè)股份有限公司，批號 22101031），苯酚紅（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號20180110），二甲苯（北京化工廠，批號20150111），0.9%氯化鈉注射液（四川科倫藥業(yè)股份有限公司）。SPF級昆明種小鼠，體質(zhì)量（20±2）g；由遼寧長生生物技術(shù)有限公司提供，合格證號SCXK（遼）2020-0001。

1.2 方法

1.2.1 小鼠氣管酚紅排泌試驗 取小鼠50只，雌雄各半，隨機均分為5組，分別為對照組（生理鹽水組）、陽性藥組吸入用乙酰半胱氨酸溶液0.39 mL/kg、喜炎平高劑量組5.2 mL/kg、喜炎平中劑量組2.6 mL/kg、喜炎平低劑量組1.3 mL/kg，每組每次霧化給藥5 min，每日霧化1次，各組連續(xù)霧化給藥5 d。末次給藥30 min后，腹腔注射2.5 g/dL酚紅生理鹽水0.1 mL/10 g，0.5 h后脫頸處死，剝離氣管周圍組織，剪下自甲狀軟骨下至氣管分叉處的一段氣管，放入盛有2 mL生理鹽水的試管中浸洗0.5 h，再加1 mol/L NaOH 0.1 mL，用722型分光光度計在波長546 nm處測光密度（OD）值，A越大表示酚紅排泌量越多，提示藥物的祛痰作用越強。

1.2.2 小鼠二甲苯抗炎試驗 昆明種雄鼠50只，隨機均分成5組，即對照組（生理鹽水組），陽性藥組地塞米松磷酸鈉注射液組0.26 mL/kg，喜炎平高劑量組5.2 mL/kg、喜炎平中劑量組2.6 mL/kg、喜炎平低劑量組1.3 mL/kg，每組每次霧化給藥5 min，每日霧化1次，各組連續(xù)霧化給藥5 d。末次給藥后30 min，于每鼠左耳涂100%二甲苯40 μL致炎，右耳作對照，致炎15 min后，處死動物，用打孔器打下雙耳同一部位，電子天平稱重，腫脹值=左耳片重-右耳片重。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 數(shù)據(jù)統(tǒng)計及分析運用SPSS 26.0進(jìn)行處理，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，各組之間運用單因素方差分析（onewayANOVA）的方法進(jìn)行檢驗。

2 結(jié)果

2.1 祛痰實驗小鼠氣管酚紅排泌試驗 見表1。喜炎平注射液低劑量組與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），與陽性藥組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），結(jié)果表明，喜炎平注射液低劑量組顯著增加小鼠酚紅排泌量，其效果優(yōu)于吸入用乙酰半胱氨酸溶液。

表1 喜炎平注射液對小鼠氣管酚紅排泌量的影響（x±s）

2.2 小鼠二甲苯抗炎試驗 見表2。陽性藥組地塞米松磷酸鈉注射液對抗二甲苯所引起的小鼠耳腫脹，腫脹值顯著低于對照組（P＜0.05），喜炎平注射液各劑量組與對照組比較無明顯差異。結(jié)果表明，喜炎平注射液霧化吸入給藥對小鼠抗炎作用效果不明顯。

表2 喜炎平注射液對小鼠二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響（x±s）

3 結(jié)論

喜炎平注射液的主要活性成分17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯、17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯-19-硫酸酯鈉，體外實驗結(jié)果17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯、17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯-19-硫酸酯鈉具有抗炎、抗病毒、抗菌活性[12]。試驗表明喜炎平注射液霧化吸入給藥有明確的祛痰作用，低劑量祛痰作用顯著，效果明顯優(yōu)于臨床中使用較多的吸入用乙酰半胱氨酸溶液，但抗炎作用效果不明顯，與其他研究結(jié)果不同，考慮與動物對霧化氣體耐受程度、吸入肺部的藥物量、靶器官不同引起了拮抗作用所致。

喜炎平注射液霧化藥物粒徑分布顯著影響藥物沉積效率和藥物在呼吸道的沉積位置，霧化吸入給藥時最佳顆粒物粒徑空氣動力學(xué)直徑應(yīng)控制在1～5 μm[13]。其中4～5 μm的顆粒物主要沉積在主支氣管和前端分支支氣管[14]，而＜3 μm的顆粒物能夠到達(dá)細(xì)末支氣管和肺腺泡[15]，試驗所用YLS-8B小動物霧化給藥儀，儀器霧化粒子細(xì)度1～5 μm（占80%），能夠確保喜炎平注射液有效到達(dá)小鼠肺部，保證試驗可靠性。喜炎平注射液可以通過霧化吸入給藥方式到達(dá)肺部（支氣管、細(xì)支氣管），并有部分在肺部沉降存留，吸入刺激性研究顯示，試驗期間無動物死亡、咳嗆等異常表現(xiàn)；羅佳等研究表明喜炎平注射液各劑量組肺部組織病理學(xué)、主要組織檢查、小鼠血液學(xué)指標(biāo)、血清生化、臟器系數(shù)均無顯著改變，初步認(rèn)為其霧化吸入給藥是安全可行的[16]。另有研究表明，喜炎平注射液系純中藥制劑，純度高，對呼吸系統(tǒng)的刺激性較復(fù)方注射劑小。當(dāng)吸入藥物達(dá)到高濃度時，LDH活力系數(shù)大，細(xì)胞損傷加重，內(nèi)容物大量釋放所致。臨床使用時，要注意給藥劑量，避免肺損傷[17]。

目前喜炎平注射液霧化吸入雖屬于超說明書用藥，但臨床應(yīng)用較廣，兒科呼吸系統(tǒng)疾病使用比例最大[18-21]，試驗對喜炎平注射液的藥效學(xué)進(jìn)行了初步評價，后期將繼續(xù)針對喜炎平注射液進(jìn)行藥效學(xué)評價，結(jié)合藥代動力學(xué)對其組織分布特點及代謝產(chǎn)物進(jìn)行分析，同時借助分子生物學(xué)手段，從分子、器官和整體動物水平對藥理機制進(jìn)行系統(tǒng)研究。