孕早期B超影像異常與胎兒絨毛染色體異常核型及多態(tài)變異關(guān)系

鄧國(guó)生

(廣西壯族自治區(qū)玉林市婦幼保健院 檢驗(yàn)科，廣西 玉林537000)

B超影像診斷是胎兒形態(tài)結(jié)構(gòu)畸形常用檢測(cè)方法，胎兒染色體檢查是發(fā)現(xiàn)胎兒染色體異常核型胎兒缺陷檢測(cè)方法[1-3]，胎兒形態(tài)結(jié)構(gòu)畸形和胎兒染色體異常核型及多態(tài)變異均為胎兒缺陷不同表達(dá)方式，為了解孕早期B超影像異常胎兒與胎兒絨毛染色體異常核型及多態(tài)變異關(guān)系，對(duì)孕早期B超影像診斷胎兒異常采用胎兒絨毛染色體檢查82例孕早期孕婦進(jìn)行回顧性分析如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象選取2016年11月至2018年5月到玉林市婦幼保健院優(yōu)生遺傳科就診，B超影像診斷胎兒異常(包括鼻骨顯示不清、胎兒頸項(xiàng)透明層增厚、后顱窩池增寬、頸部水囊狀淋巴瘤、露腦畸形、全前腦、心內(nèi)結(jié)構(gòu)異常、臍膨出、腹裂畸形、水腫綜合癥等)、自愿行絨毛產(chǎn)前診斷的孕婦82例。孕婦年齡(15-45)歲，孕周(10～13+6)周。

1.2 儀器與試劑蔡司全自動(dòng)染色體掃描分析系統(tǒng)(Imager.Z2))1臺(tái)、變焦體視顯微鏡(SZ2-ILST)1臺(tái)、倒置顯微鏡(OLYMPUS IX51)1臺(tái)、美國(guó)CO2培養(yǎng)箱(Forma3111)2臺(tái)，江蘇恒溫水浴箱(HH-W600)1臺(tái)，美國(guó)CHANG MEDIUMD?培養(yǎng)基和廣州一生駿?培養(yǎng)基。

1.3 方法在絨毛穿刺前均告知孕婦及其家屬進(jìn)行絨毛染色體分析的產(chǎn)前診斷范圍與風(fēng)險(xiǎn)，并簽署知情同意書(shū)。在無(wú)菌條件下，經(jīng)B超引導(dǎo)下經(jīng)腹采取絨毛(10-20)mg，立即置于1支15 ml裝有肝素和無(wú)菌生理鹽水的離心管中，立即送檢。在超凈工作臺(tái)中，將絨毛組織置于無(wú)菌的培養(yǎng)皿中，加入無(wú)菌生理鹽水漂洗。除去血細(xì)胞和蛻膜，在變焦體視顯微鏡鏡下挑取絨毛組織于另一無(wú)菌的培養(yǎng)皿中，剪成粥樣，吸入15 ml離心管內(nèi)，再用無(wú)菌生理鹽水洗滌(2-3)次，加入1 ml 0.25%胰蛋白酶，無(wú)菌吸管吹打均勻，37℃消化6 min，加入2 ml羊水培養(yǎng)基終止消化，于1 500 rpm離心10 min，棄上清后分別加入5 ml兩種不同廠家培養(yǎng)基，用無(wú)菌吸管吹打混勻，并分別放入兩個(gè)不同廠家進(jìn)口培養(yǎng)瓶于兩個(gè)獨(dú)立的37℃5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)7-8天，在倒置顯微鏡下觀察貼壁細(xì)胞克隆大小并進(jìn)行換液，繼續(xù)培養(yǎng)1-2天后觀察發(fā)現(xiàn)有(6-8)個(gè)集落均為圓形透亮的細(xì)胞時(shí)加入秋水仙素阻斷，收獲、制片和G顯帶，并進(jìn)行核型分析。每例標(biāo)本常規(guī)計(jì)數(shù)20個(gè)細(xì)胞，記錄任何觀察到的染色體數(shù)目或結(jié)構(gòu)異常。如有可能有性染色體異常病例的標(biāo)本，則應(yīng)至少計(jì)數(shù)30個(gè)細(xì)胞，如疑嵌合體，計(jì)數(shù)50個(gè)以上細(xì)胞。并在蔡司染色體分析系統(tǒng)下分析5個(gè)核型，所有分析的細(xì)胞的染色體分辨率應(yīng)達(dá)到320條帶水平。根據(jù)人類(lèi)細(xì)胞遺傳學(xué)國(guó)際命名體制(ISCN2016)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行描述染色體核型，并出具染色體核型分析報(bào)告。對(duì)于染色體多態(tài)性，均進(jìn)行C帶或N帶驗(yàn)證。對(duì)于倒位、易位和缺失等結(jié)構(gòu)異常者，應(yīng)通知臨床并建議胎兒父母行外周血染色體檢查，以查明胎兒染色體異常是否來(lái)源于父母；對(duì)于嵌合體則建議抽取胎兒臍血進(jìn)一步確診。

2 結(jié)果

孕早期B超影像異常82例行絨毛染色體培養(yǎng)，培養(yǎng)成功79例，培養(yǎng)成功率96.34%。培養(yǎng)成功79例絨毛染色體核型中，胎兒絨毛染色體異常核型及多態(tài)變異檢出率，21-三體為11.39%，18-三體為10.13%，特納綜合癥為8.86%，嵌合體為3.80%，13-三體為3.80%，易位為2.53%，缺失為1.27%，多倍體為1.27%，多態(tài)變異(歸正常染色體類(lèi))為2.53%；總計(jì)，異常核型34例,異常核型檢出率43.04%(34/79)，正常核型(包含染色體多態(tài)變異2例)45例,正常核型檢出率56.96%，見(jiàn)表1。

表1 孕早期B超影像異常與胎兒絨毛染色體異常核型及多態(tài)變異表[例(%)]

3 結(jié)論

本研究表明，孕早期B超影像異常與胎兒絨毛染色體異常核型檢出率最高三位為21-三體、18-三體和特納綜合癥。其中，染色體數(shù)目異常28例，染色體結(jié)構(gòu)異常3例，嵌合體3例。孕早期B超影像異常與胎兒絨毛染色體異常核型檢出率43.04%(34/79)。孕早期B超影像異常類(lèi)別數(shù)量最多首位為胎兒頸項(xiàng)透明層(NT)增厚達(dá)35例,依次是后顱窩池增寬、露腦畸、頸部水囊狀淋巴瘤、水腫綜合癥和鼻骨顯示不清等檢測(cè)成功例數(shù)較多，染色體異常核型(不包染色體多態(tài)變異)檢出率較高。居首位的胎兒頸項(xiàng)透明層增厚染色體異常核型檢出率40.00%(14/35)高于王挺等[4]B超影像檢測(cè)頸項(xiàng)透明層增厚畸形胎兒絨毛染色體核型異常率為29.5%(41/139)，胎兒絨毛染色體核型主要為21-三體綜合征、18-三體綜合征、13-三體綜合征，與本研究一致，作者檢測(cè)結(jié)果還認(rèn)為胎兒頸項(xiàng)透明層厚度高胎兒胎兒絨毛染色體核型異常率會(huì)增高。根據(jù)郭莉等[5]報(bào)道，B超影像檢測(cè)畸形胎兒染色體異常率為41.8%(23/55)，染色體核型主要為21-三體比例最高，18-三體；根據(jù)饒騰子等[6]報(bào)道，B超影像檢測(cè)淋巴水囊瘤畸形胎兒絨毛染色體異常率為72%(21/29)；根據(jù)李慧林[7]報(bào)道，B超影像檢測(cè)畸形胎兒絨毛染色體異常率為75%(3/4)；根據(jù)寶日湖[8]報(bào)道，非B超影像檢測(cè)畸形胎兒的產(chǎn)前診斷指征的孕婦，胎兒染色體異常率為11.11%(8/72)；上述文獻(xiàn)表明,B超影像檢測(cè)畸形胎兒染色體異常率遠(yuǎn)地遠(yuǎn)高于產(chǎn)前診斷指征胎兒染色體異常率。

本研究采用絨毛染色體培養(yǎng)檢查胎兒染色體，胎兒絨毛染色體檢查目前被認(rèn)為是孕早期產(chǎn)前診斷安全可靠，為胎兒提供可靠的染色體異常核型證據(jù)，絨毛取材是早期妊娠胎兒染色體檢查異常核型“金標(biāo)準(zhǔn)”[9-12]，結(jié)合B超影像及其他醫(yī)學(xué)檢查綜評(píng)價(jià)，對(duì)孕早期胎兒能不能成為未來(lái)合格的打工仔、打工妹，農(nóng)民工，可向孕婦提出終止妊娠，延遲中國(guó)老齡化社會(huì)年限，繼續(xù)成為世界工廠，為不能先富起來(lái)的世界人民提供更多質(zhì)好價(jià)低中國(guó)制造產(chǎn)品。

胎兒絨毛染色體培養(yǎng)檢查技術(shù)要求較高，現(xiàn)在還不能做到低智商檢查要求[13-15]，所用標(biāo)本是人工創(chuàng)傷取來(lái)的，標(biāo)本絨毛與母體蛻膜結(jié)合緊密，絨毛細(xì)胞培養(yǎng)要選用絨毛多分支且有活性強(qiáng)部分培養(yǎng)成功率會(huì)高，絨毛細(xì)胞培養(yǎng)容易受到母體蛻膜組織的影響，不能錯(cuò)取母體部分培養(yǎng)，絨毛組織還有多種細(xì)胞成分，要排除間質(zhì)細(xì)胞等其他細(xì)胞，否則，絨毛細(xì)胞培養(yǎng)不成功，因此，操作工作人員不能是低智商者，本研究操作者按嚴(yán)格程序操作，還是有3例絨毛細(xì)胞培養(yǎng)未成功。其中1例標(biāo)本在挑選、剪取絨毛過(guò)程污染，無(wú)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)；另2例標(biāo)本為絨毛采集量少，細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，收獲細(xì)胞計(jì)數(shù)少，不達(dá)標(biāo)。為了更好的提高培養(yǎng)成功率，絨毛染色體培養(yǎng)應(yīng)注意：①絨毛采集量至少達(dá)10 mg以上；②在變焦體視顯微鏡下鑒定絨毛枝，除去血細(xì)胞和蛻膜以及嚴(yán)格無(wú)菌操作；③絨毛生長(zhǎng)最適宜的PH值為7.4，高于8.0和低于7.0均不適于絨毛細(xì)胞生長(zhǎng)。

人類(lèi)醫(yī)學(xué)胎兒染色體檢查在中國(guó)大陸開(kāi)展檢查醫(yī)院慢慢增多，對(duì)檢測(cè)染色體異常核型數(shù)據(jù)在增加，但檢測(cè)標(biāo)本中國(guó)大陸文獻(xiàn)表達(dá)還是少，不能說(shuō)服一種B超影像異常胎兒染色體異常核型檢出率接近真實(shí)檢出率，但檢出率高是不可爭(zhēng)議的事實(shí)。本研究表明，孕早期B超影像異常胎兒絨毛染色體異常核型檢出率高，絨毛染色體異常核型依次為21-三體、18-三體、特納綜合癥、嵌合體和13-三體，對(duì)孕早期B超影像異常胎兒絨毛染色體檢查，為優(yōu)生優(yōu)育提供可靠依據(jù)。

作者簡(jiǎn)介：鄧國(guó)生，本科，副主任技師，主要從事人類(lèi)醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)檢驗(yàn)工作。