免疫組化標記物鑒別診斷子宮內膜樣腺癌與宮頸腺癌的臨床意義

盛仲楠，袁博，沈俏麗

聊城市中醫醫院病理科，山東聊城 252000

子宮內膜樣腺癌為子宮內膜上皮性惡性腫瘤，好發生于圍絕經期、絕經后女性，目前該病發病原因尚不清晰，一般認為可能與雌激素水平變化有關[1]。宮頸腺癌為宮頸癌中常見亞型，多在宮頸管內生長，病因尚不清晰，但一般認為與性生活紊亂、年早性交、內分泌紊亂等因素相關[2]。兩種疾病主要臨床表現相似，均為陰道流血、白帶異常，且宮頸腺癌多向內生長，臨床診斷存在一定困難。目前在對上述兩種疾病診斷中，免疫組化法標記物鑒別診斷為近年來研究熱點。波形蛋白（Vimentin）為維持細胞骨架重要蛋白，發生子宮內膜腺癌時會出現組織中Vimentin 表達增加情況；癌胚抗原（CEA）為臨床診斷中常見腫瘤標記物，其水平升高，提示腫瘤惡性程度高；雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）在激素依賴性腫瘤中期水平隨之增加；P16 基因為人染色體9P21 區，其發生突變后會引發細胞增生，多用于惡性腫瘤鑒別診斷[3]。為此，選取2019年2月—2021 年8 月聊城市中醫醫院的子宮內膜樣腺癌與宮頸腺癌患者82 份病理組織樣本，分析上述免疫組化標記物對子宮內膜樣腺癌、宮頸腺癌診斷鑒別能力。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院收治的子宮內膜樣腺癌與宮頸腺癌患者病理組織樣本共計82 份納入研究，其中包括子宮內膜樣腺癌54 份、宮頸腺癌28 份。其中子宮內膜樣癌患者年齡為47～63 歲，平均（56.26±2.36）歲；臨床分期中Ⅰ期12 例，年齡48～61 歲，平均（56.33±3.04）歲，Ⅱ期25 例，年齡47～62 歲，平均（55.79±3.59）歲，Ⅲ期17 例，年齡47～63 歲，平均（56.81±2.70）歲。宮頸腺癌患者年齡38～69 歲，平均（57.11±3.27）；臨床分期中Ⅰ期7 例，年齡38～60 歲，平均（57.45±4.10）歲，Ⅱ期12 例，年齡39～65 歲，平均（56.59±3.39）歲，Ⅲ期9 例，年齡41～69 歲，平均（57.06±4.13）歲。兩組患者基礎資料及同種疾病不同分期之間資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)。研究經醫學倫理委員會審核通過。

1.2 納入與排除標準

納入標準：病理組織取樣完整，可有效檢驗；患者、家屬對研究知情同意。排除標準：合并宮頸、子宮內膜疾病（炎癥感染、息肉等）患者；存在精神性疾病，無法配合完成病理組織檢驗患者。

1.3 儀器與試劑

Vimentin、CEA、ER、PR、P16 鼠抗人單克隆抗體購自上海太陽生物，PV-9000 免疫組化學染色試劑盒購自上海太陽生物；磷酸鹽緩沖液（phosphate buffer solution,PBS）緩沖液購自zymed 公司。

1.4 方法

所有樣本均以PBS 沖洗，共沖洗3 次，以10%甲醛液固定，酒精梯度脫水，石蠟包埋，切片；以3%H2O2去離子水孵育（10 min），阻斷內源性過氧化物酶；檸檬酸緩沖液高壓修復，滴加一抗（4℃，過夜），PBS 沖洗（2 min/次，共3 次）；滴加試劑1，孵育（37℃，20 min），PBS 沖洗（2 min/次，共3 次）；滴加試劑2，孵育（37℃，20～30 min），PBS 沖洗（2 min/次，共3 次）；以二甲苯染色，后應用自來水沖洗、蘇木素復染。取PBS 代替一抗作為陰性對照，以已知子宮內膜樣腺癌、宮頸腺癌免疫組化染色陽性切片為陽性對照。

1.5 染色判斷標準

采用雙盲法，將切片置于400 倍鏡視野下觀察，隨機選5 個區域，每個區域內細胞數量為200 個，共計1 000 個細胞。細胞內出現細胞漿、細胞膜、細胞核染成棕黃色即為陽性。綜合考慮陽性細胞所占百分比、著色強度判定染色結果[4]。①著色強度：0分為無染色，1 分為淡黃色，2 分為棕黃色，3 分為棕褐色。②陽性細胞：0 分為陽性細胞≤5%，1 分為陽性細胞占比6%～25%，2 分為陽性細胞占比為26%～50%，3 分為陽性細胞>50%；以兩項指標乘積作為評價標準：0～1 分為陰性（-），2～4 分為陽性（+），5～7分為陽性（++），>8 分為陽性（+++），最終積分評價中，將（-）記為0 分，（+）記為1 分，（++）記為2 分，（+++）記為3 分。

1.6 觀察指標

①比較子宮內膜樣腺癌、宮頸腺癌樣本波形蛋白（Vimentin）、癌胚抗原（carcinoembryonic antigen,CEA）、雌激素受體（estrogen receptor,ER）、孕激素受體（progesterone receptor,PR）、P16 陽性檢出率；②比較子宮內膜樣腺癌、宮頸腺癌樣本不同臨床分期中Vimentin、CEA、ER、PR、P16 陽性檢出率；③比較子宮內膜樣腺癌、宮頸腺癌樣本不同臨床分期中陽性分值。

1.7 統計方法

采用SPSS 24.0 統計學軟件對數據進行分析，計量資料經檢驗符合正態分布，采用（）表示，差異比較進行t檢驗，計數資料采用[n(%)]表示，差異比較進行χ2檢驗，P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 子宮內膜樣腺癌、宮頸腺癌免疫組化標記物陽性檢出率比較

子宮內膜樣腺癌Vimentin、ER、PR 陽性檢出率均高于宮頸腺癌，CEA、P16 陽性檢出率均低于宮頸腺癌，差異有統計學意義（P<0.05），見表1。

表1 子宮內膜樣腺癌、宮頸腺癌免疫組化標記物陽性檢出率對比[n(%)]

2.2 子宮內膜樣腺癌不同分期免疫組化標記物陽性檢出率比較

Vimentin、ER、PR 在Ⅲ期中陽性檢出率高于Ⅰ期，差異有統計學意義（P<0.05）；Vimentin、CEA、PR與Ⅱ期比較，差異有統計學意義（P<0.05），見表2。

表2 子宮內膜樣腺癌不同分期免疫組化標記物陽性檢出對比[n(%)]

2.3 子宮內膜樣腺癌不同分期陽性積分情況比較

Vimentin、CEA、ER、PR 積分在子宮內膜樣腺癌診斷中，均隨臨床分期增加而逐漸升高，差異有統計學意義（P<0.05），見表3。

表3 子宮內膜樣腺癌不同分期陽性積分情況對比[()，分]

表3 子宮內膜樣腺癌不同分期陽性積分情況對比[()，分]

注：與Ⅰ期比較，aP<0.05；與Ⅱ期比較，bP<0.05

2.4 宮頸腺癌不同分期免疫組化標記物陽性檢出率比較

P16 在Ⅲ期中陽性檢出率為100.00%較Ⅰ期（57.14%）、Ⅱ期（41.67%）高，差異有統計學意義（P<0.05），見表4。

表4 宮頸腺癌不同分期免疫組化標記物陽性檢出率對比[n(%)]

2.5 宮頸腺癌不同分期免疫組化標記物陽性積分情況比較

CEA、P16 積分在宮頸腺癌診斷中，均隨臨床分期增加而逐漸升高，差異有統計學意義（P<0.05），見表5。

表5 宮頸腺癌不同分期免疫組化標記物陽性積分情況對比[()，分]

表5 宮頸腺癌不同分期免疫組化標記物陽性積分情況對比[()，分]

注：與Ⅰ期比較，aP<0.05；與Ⅱ期比較，bP<0.05

3 討論

子宮內膜樣腺癌、宮頸腺癌均為臨床常見惡性腫瘤。前者發病率較高，為導致患者死亡的第3 位常見婦科惡性腫瘤，主要臨床表現為腹部包塊、陰道出血、陰道排液、疼痛等，屬雌激素依賴型惡性腫瘤[5]。后者在臨床較為少見，隨著近年來宮頸癌篩查的增加，該病診斷檢出率逐漸增加，但因該病具向內生長特征，因此，單純婦科檢查難以有效檢出，易出現漏診情況，且該病與子宮內膜樣腺癌臨床表現相近，在臨床診斷中，易出現誤診情況，如何對兩者有效鑒別為目前臨床研究熱點[6-7]。

免疫組化法為惡性腫瘤常見診斷方案，通過免疫組化法標記物對婦科惡性腫瘤進行鑒別診斷，具操作簡單、診斷結果準確等特點。本研究中主要應用免疫組化標記物為Vimentin、CEA、ER、PR、P16。其中Vimentin 為細胞中間絲的一種蛋白質，主要存在于間充質來源的細胞，與微管蛋白、肌動蛋白等蛋白共同組成細胞骨架，Vimentin 主要負責維持細胞骨架穩定性，主要分布于間葉細胞，在出現大量腫瘤細胞增生時，細胞分裂速度增加，細胞數量快速增加，Vimentin 需求量增加，因此，在惡性腫瘤患者病理組織切片中，會見Vimentin 陽性檢出率增加。本研究結果顯示，子宮內膜樣腺癌Vimentin 陽性檢出率較宮頸腺癌高（79.63% vs 7.14%）（P<0.05），考慮原因為在胚胎發育時，中胚層間質分化形成間葉組織，子宮為重要間葉組織，常會出現間葉標記物雙向表達，而Vimentin 主要存在于間葉細胞中，因此，在出現子宮內膜樣腺癌時，免疫表型上會出現Vimentin 陽性表達量增加，可將其用于子宮內膜樣腺癌、宮頸腺癌鑒別診斷[8]。同時在本研究中發現，隨著子宮內膜樣腺癌臨床分期的增加，Vi‐mentin 陽性檢出率及陽性積分隨之增加，可將其用于評估子宮內膜樣腺癌預后。

CEA 為臨床常見腫瘤標記物，最早為在胚胎組織、結腸癌中提取的腫瘤相關抗原，以往多將其用于結直腸癌鑒別診斷，隨著近年來對CEA 臨床研究的不斷深入，發現CEA 屬廣譜腫瘤標志物。本研究結果顯示，宮頸腺癌CEA 陽性檢出率高于子宮內膜樣腺癌（89.29% vs 33.33%）（P<0.05），考慮原因可能與腫瘤惡性程度及腫瘤細胞對正常組織損傷程度有關[9-10]。本研究結果顯示，子宮內膜樣腺癌不同分期及陽性積分中，均呈現隨臨床分期增加而增加的特點，但在宮頸腺癌中，其不同臨床分期中CEA 陽性檢出率差異無統計學意義(P>0.05)，但在陽性積分中表現為隨臨床分期增加而上升情況，考慮原因可能與宮頸腺癌樣本量較少有關[11]。提示在對子宮內膜樣腺癌、宮頸腺癌鑒別診斷中，CEA陽性更傾向于宮頸腺癌，但仍需聯合其它指標共同檢驗。

ER、PR 為子宮內膜病變常見診斷指標，因子宮內膜為垂體-性腺軸重要靶組織，特別在出現雌激素依賴性子宮內膜病變后，其組織中陽性檢出率隨之提升。本研究結果顯示，子宮內膜樣腺癌樣本中ER、PR 陽性檢出率顯著高于宮頸腺癌（74.07% vs 14.29%）、（66.67% vs 42.86%）（P<0.05）；而因宮頸內膜病變一般無雌激素依賴作用，因此，宮頸腺癌中ER、PR 陽性檢出率相對較低，且不同宮頸腺癌臨床分期中ER、PR 陽性檢出率及陽性積分比較差異無統計學意義(P>0.05)，因此，可將ER、PR 作為子宮內膜樣腺癌及宮頸腺癌鑒別診斷指標。而在子宮內膜樣腺癌不同臨床分期中可見，隨腫瘤分期增加，ER、PR 陽性檢出率及陽性積分隨之增加，因此，可將其用于子宮內膜樣腺癌的預后評估[12-13]。

P16 蛋白屬于細胞周期蛋白依賴性激酶的抑癌基因，能夠調節pRB 基因去磷酸化，可抑制細胞周期處于G1～S 期，P16 基因突變、轉錄、缺失等變化，均會引起細胞增殖失控。近年來相關研究發現，P16 蛋白在女性生殖道上皮中呈現彌漫性陽性表達，而此種強陽性表達可能與人乳頭瘤病毒（hu‐man papillomavirus,HPV）感染有關，HPV 中HPV E7蛋白會使Rb 因子失活，進而影響P16 轉錄抑制作用，使P16 蛋白在組織中蓄積[14]。本研究結果顯示，宮頸腺癌樣本中P16 陽性檢出率顯著高于子宮內膜樣腺癌（64.29% vs 27.78%）（P<0.05），且其陽性檢出率及陽性積分中均表現出隨臨床分期增加而上升的趨勢，但在子宮內膜樣腺癌中，P16 在不同臨床分期中的檢出率比較，差異無統計學意義(P>0.05)，可進一步提示P16 水平的上升更傾向于確診為宮頸腺癌。潘小秀[15]在研究中對宮頸腺癌、子宮內膜樣腺癌進行鑒別診斷，結果顯示，宮頸腺癌p16 蛋白陽性率更高（68.57% vs 14.29%），而子宮內膜腺樣癌ER、Vimentin 陽性檢出率更高（74.29% vs 34.29%、71.43% vs 31.43%）（P<0.05），與本研究結果一致，但本研究結合臨床分期進行上述指標陽性檢出率比較，可進一步顯示不同指標與疾病進展之間關系，可為臨床提供更可靠參考依據。

綜上所述，應用免疫組化法檢驗中，子宮內膜樣腺癌Vimentin、ER、PR 陽性檢出率較高，CEA、P16 陽性檢出率較低，可用于子宮內膜樣腺癌、宮頸腺癌鑒別診斷，且可利用其陽性積分水平變化進行上述兩種疾病臨床分期評估。