全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀在梅毒螺旋體抗體檢測中的應(yīng)用

陳秀英

龍海市第一醫(yī)院 （福建龍海 363199）

梅毒屬于一種傳染性較強(qiáng)的慢性性傳播疾病，該病的發(fā)生與梅毒螺旋體入侵機(jī)體所致一系列感染有關(guān)；一期梅毒以生殖器官或乳房、唇、舌部硬下疳為主要病理表現(xiàn)，隨著病情的不斷惡化，患者會出現(xiàn)穿鑿性潰瘍、組織壞死等不同程度的皮膚黏膜損傷。基于此，給予梅毒患者早期準(zhǔn)確診斷，可及時(shí)阻止其病情惡化。梅毒感染者血液中含有大量梅毒螺旋體，此類厭氧微生物侵入人體后，機(jī)體免疫系統(tǒng)會產(chǎn)生大量針對梅毒螺旋體的抗體；若梅毒螺旋體抗體呈現(xiàn)明顯活性，則表示機(jī)體梅毒病情較活躍。暗視野顯微鏡法、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）等檢測方式雖在梅毒螺旋體抗體檢測中有一定應(yīng)用價(jià)值，但暗視野顯微鏡法在明確物體細(xì)微結(jié)構(gòu)方面未顯示出突出優(yōu)勢，ELISA的檢測結(jié)果則較易受到血清樣本交叉反應(yīng)的影響。研究顯示，全自動化學(xué)發(fā)光免疫測定法（chemiluminescence analysis，CLIA）在免疫分析方面具有較高的敏感性[1]，為研究此檢測方法在梅毒螺旋體抗體檢測中的應(yīng)用價(jià)值，本研究對260例疑似梅毒患者進(jìn)行CLIA、ELISA及梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)（treponema pallidum particle agglutination assay，TPPA）檢測，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2019年2月至2021年2月于我院接受治療的260例疑似梅毒患者作為研究對象，其中男199例，女61例；年齡21～71歲，平均（49.79±8.33）歲。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，患者家屬均自愿簽署知情同意書。

納入標(biāo)準(zhǔn)：出現(xiàn)淋巴結(jié)增大、硬下疳等疑似梅毒癥狀。排除標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)重高血壓、心臟病未經(jīng)控制者。

1.2 方法

囑患者檢測前一晚禁食，采集患者的晨起空腹靜脈血3 ml，在室溫狀態(tài)下靜置60 min 后離心（5000轉(zhuǎn)/min，10 min）并提取血清樣本待檢，每位患者的血清樣本均分為3份，分別進(jìn)行CLIA、ELISA 及TPPA 檢測。本研究使用美國西門子醫(yī)學(xué)診斷股份有限公司所生產(chǎn)的ADVIA Centaur XP 全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（國食藥監(jiān)械進(jìn)字2014第3404170號）及配套試劑盒（國械注進(jìn)20173406311）進(jìn)行CLIA 檢測，采用科華生物工程股份有限公司 ST-360型酶標(biāo)儀及配套試劑盒，以雙抗夾心法進(jìn)行ELISA 檢測，采用北京中檢安泰診斷科技有限公司提供的TPPA 試劑盒（國械注準(zhǔn)20153401572，型號為20T）進(jìn)行TPPA 檢測，檢測過程中嚴(yán)格按照檢測儀器及試劑盒要求合理設(shè)置檢測參數(shù)。

1.3 觀察指標(biāo)

以TPPA 檢測結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，比較CLIA、ELISA 的診斷準(zhǔn)確度、靈敏度、特異度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

以TPPA 檢測結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，CLIA 的診斷準(zhǔn)確度、靈敏度、特異度均高于ELISA，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1～2。

表1 兩種方法的檢測結(jié)果比較（例）

表2 兩種方法的診斷效能比較（%）

3 討論

梅毒螺旋體感染可分為胎傳梅毒和獲得性梅毒，其中胎傳梅毒會影響胎兒身體狀況或?qū)е绿撼霈F(xiàn)全身感染甚至死亡，而獲得性梅毒以性傳播為主[2]。梅毒螺旋體的持續(xù)擴(kuò)散，會導(dǎo)致機(jī)體心血管系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)均受到侵犯，誘發(fā)主動脈炎、腦膜血管病等病癥。為有效阻止以上病癥的發(fā)生、最大限度保障母嬰安全，需盡早對個(gè)體梅毒感染程度進(jìn)行評估以便開展針對性抗感染治療。梅毒螺旋體抗體是機(jī)體免疫系統(tǒng)應(yīng)對梅毒感染的重要手段，檢測該抗體水平可為臨床診斷提供有效參考依據(jù)，而合理選擇檢測方法能夠進(jìn)一步提升診治效率。

梅毒螺旋體感染人體局部組織后，機(jī)體血清中會產(chǎn)生針對梅毒螺旋體的特異性及非特異性抗體。其中特異性梅毒螺旋體的抗體產(chǎn)生早于非特異性抗體，且滯留于體內(nèi)的時(shí)間較長，部分患者在梅毒感染癥狀完全緩解后仍能夠檢測出特異性抗體；此外，特異性抗體會受到妊娠、腫瘤、吸毒、結(jié)締組織病變等多種因素影響，主要體液免疫表現(xiàn)為IgM 水平升高，而非特異性抗體主要表現(xiàn)為IgG水平升高。TPPA 檢測較適用于普遍性篩查，全自動化TPPA 檢測操作加快了篩查效率，且檢測結(jié)果較穩(wěn)定、直觀；需要注意的是，即使患者在接受抗梅毒治療后仍可能出現(xiàn)TPPA 陽性，故此檢測結(jié)果不適合作為區(qū)分既往感染、現(xiàn)癥感染的唯一標(biāo)準(zhǔn)。ELISA 主要對梅毒螺旋體的IgM、IgG 混合抗體進(jìn)行檢測，該方法難以清晰地顯示梅毒螺旋體的實(shí)際活動情況，將其作為主要的療效監(jiān)測措施可能會導(dǎo)致病情波動情況的診斷結(jié)果出現(xiàn)一定誤差，早期診斷中易檢出假陰性，且在一期、三期梅毒感染檢測中存在盲區(qū)。隨著檢測技術(shù)的不斷發(fā)展，全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀應(yīng)運(yùn)而生。CLIA 克服了ELISA 干擾因素較多的缺點(diǎn)，其具有較長的發(fā)光信號時(shí)間和較高的光信號穩(wěn)定性[3]，主要對特異性梅毒螺旋體抗體進(jìn)行檢測，能夠檢測到TpN15、TpN17及TpN47等混合重組梅毒螺旋體抗體活性，而TpN15是活動期梅毒的標(biāo)志性抗體，以上抗體所具有的炎癥活性與梅毒感染所引發(fā)的免疫反應(yīng)關(guān)聯(lián)密切[4]，混合重組梅毒螺旋體抗體不僅會影響E-選擇素、單核細(xì)胞趨化蛋白-1等因子的表達(dá)，還會對人體血管內(nèi)皮細(xì)胞合成及血管黏附因子在梅毒擴(kuò)散過程中的相互作用產(chǎn)生影響，因此，對以上抗體活性進(jìn)行監(jiān)測，可進(jìn)一步明確梅毒螺旋體的擴(kuò)散、增殖情況，從而為臨床提供診斷參考依據(jù)；同時(shí)，與ELISA 相比，CLIA 檢測的線性范圍較寬，其能夠采用酶促發(fā)光底物來替代原有底物，通過測定微粒子表面非特異性抗體所結(jié)合的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)物相對光單位來得出待測物含量，其結(jié)果不易受人為操作、樣本數(shù)量的影響，且可進(jìn)行重復(fù)操作，有效彌補(bǔ)了ELISA 在重復(fù)性上的不足，可應(yīng)用于臨床大批量血清標(biāo)本的篩查[5]；此外，CLIA 檢測時(shí)間較短，可隨時(shí)進(jìn)行單個(gè)標(biāo)本檢測，全自動化的操作能夠減少手工操作誤差并降低生物安全事件的發(fā)生概率，故全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀已成為多數(shù)醫(yī)院檢測特異性梅毒螺旋體抗體的重要儀器。本研究結(jié)果顯顯示，以TPPA 檢測結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，CLIA 的診斷準(zhǔn)確度、靈敏度、特異度均高于ELISA（P＜0.05），提示采用全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀進(jìn)行梅毒螺旋體抗體檢測可取得較為準(zhǔn)確的診斷結(jié)果，且診斷靈敏度、特異度均較高。

綜上所述，在梅毒螺旋體抗體檢測中應(yīng)用全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀可取得較為理想的檢測結(jié)果，該檢測方式具有較高的準(zhǔn)確度、靈敏度、特異度。