夏芳
(蕪湖市畜牧獸醫管理服務中心,安徽蕪湖 241000)
當機體代謝功能紊亂,或近期采食大量高蛋白時,會導致體內產生較多的尿酸鹽,這是鵝發生痛風的一個重要原因。近期有研究表明,鵝感染星狀病毒也是痛風發生的一個主要原因,并不是單純的營養代謝性疾病所引起[1-2]。
星狀病毒(astroviruses,AstV)是一種單股無囊膜的RNA病毒,根據宿主類型不同,可分為哺乳動物星狀病毒和禽星狀病毒,其中鵝星狀病毒(goose astrovirus,GAstV)屬于禽星狀病毒[3]。 近幾年,GAstV 嚴重危害我國鵝養殖業,造成了嚴重的經濟損失。該病毒主要侵染21 d內的小鵝,發病高峰在10 d前后,可致雛鵝精神沉郁、采食量減少或食欲廢絕、關節腫大,甚至死亡,嚴重時其死亡率達30%甚至更高[4-7]。因此,亟須加強對鵝痛風病的診斷與防控。
2020年7月,安徽省蕪湖市繁昌區一家養鵝場發生了一起關節腫脹、喙部尿酸鹽沉積的疾病,懷疑是鵝痛風。筆者通過臨床診斷結合實驗室PCR診斷的方法,對疾病做出診斷,確認該疾病是鵝感染星狀病毒以及飼料營養過剩所引起鵝痛風。筆者總結了診斷與防控過程,以期為基層獸醫工作者在疾病診斷方面提供參考,從而更好地預防該疾病,減少鵝痛風疾病所帶來的經濟損失。
養鵝場位于蕪湖市繁昌區內,目前鵝存欄量約1 000只。從4月底開始陸續發病,發病的大多數是雛鵝。詢問訴主可知,小鵝瘟疫苗、免疫過鵝副黏病毒和禽流感滅活疫苗均已注射過,給雛鵝喂養肉雞飼料。病鵝臨床癥狀主要表現為神情低迷,采食量減退或食欲廢絕,不喜走動,病情嚴重的會不自覺排白色糞便,嚴重的還出現死亡,場里發病較為嚴重。
剖檢時在病死鵝的心臟、肝臟等地方可見清晰的尿酸鹽沉積,在腎臟、肝臟表面可見白色斑點,是尿酸鹽沉積所致,輸尿管腫脹并向外擴張,有石灰樣內容物,病鵝多處關節腔可見白色斑點。
結合訴主交代的發病經過,根據臨床癥狀以及解剖情況,可初步診斷為鵝痛風。為進一步確診,在無菌條件下采集發病雛鵝的腎臟、肝臟等器官進行實驗室PCR檢測。
鑷子無菌采集病死鵝的腎臟、肝臟,用生理鹽水(NaCl)反復沖洗3次后,放入高壓滅菌過的試管中,隨后在-80℃冰箱下存放,送往實驗室檢測。
將采集的適量病料放入含有青霉素和鏈霉素的磷酸鹽緩沖生理鹽水(PBS)中進行研磨,將研磨好的病料放入1.5 mL離心管中,反復凍融3次。之后使用離心機,在4℃條件下,設置轉速為12 000 r/min,離心3 min。取300 μL上清液后,置于干凈的1.5 mL EP管中,使用病毒核酸DNA/RNA試劑盒提取病毒RNA,試劑盒購于天根生化科技(北京)有限公司。之后使用反轉錄試劑盒進行反轉錄以獲取病毒cDNA作為PCR模板。
查閱文獻可知該病毒的ORF2序列能夠作為PCR檢測的靶基因[8],對病毒進行PCR擴增,引物序列如下:上游引物F為5'-AGATAGACAGCAGGATT T-3';下游引物R為5'-CCTTGTCCAGTTGTATTC-3'。產物大小115 bp,引物由上海生工公司合成。PCR反應體系見表1。

表1 鵝星狀病毒PCR反應體系
擴增程序如下:95℃預變性5 min,95℃變性30 s,60℃退火 30 s,72℃延伸 10 s,共計 35個循環,72℃延伸5 min。擴增產物用1.5%瓊脂糖凝膠,電泳條件為恒定電壓110 V,時間30 min,之后使用凝膠成像儀進行觀察。
以提取的病毒DNA為模板,利用合成的引物成功擴增出明亮的115 bp大小的目的片段,與預期相符(圖1)。PCR產物送公司測序,證實有鵝星狀病毒感染。結合臨床癥狀以及實驗室PCR診斷可確認該養殖場患有鵝痛風。
飼料中鵝能食用的蛋白質含量為16%~18%,有些養殖場為了加快雛鵝生長,會投喂雞飼料,但雞飼料中的蛋白質含量與鵝所需要的蛋白質含量不同,其蛋白質量一般在21%以上,會造成雛鵝攝入過多的蛋白質,機體無法代謝,在鵝體內大量堆積,尿酸鹽沉積在內臟及骨骼上,從而出現痛風。
當飼養管理不當、通風不良、飼養密度過大時會造成舍內有害氣體濃度升高,導致雛鵝抵抗力下降、環境中病原菌大量繁殖,嚴重影響雛鵝健康發展,加重了痛風的發病率。
目前,市面上尚未研究出預防GAstV的疫苗以及藥物,主要采取以預防為主的措施防控GAstV。采取封閉式的飼養環境,與此同時完善防疫流程,實施全進全出制度。根據GAstV的傳播方式,定期消毒,及時對糞便進行清理,確保有一個良好的衛生環境。養鵝場要保持良好的通風環境,需要定期換氣,防止氨氣、硫化氫等有害氣體累積,以免降低雛鵝抵抗力。對進出養鵝場的外來車輛、外來人員嚴格消毒,消毒隔離后方可進入養殖場。對于引進的雛鵝應隔離觀察2周后,若無異常,方可合欄,避免外界的病原體進入養殖場,切斷傳染源。若發現疑似病例,及時進行消毒隔離,防止該病傳播,并限制人員進出鵝舍,對養鵝場的地面、水線等進行消毒,對患病鵝接觸過的垃圾、糞便做到無害化處理,從根源上切斷傳播途徑,并對發病鵝采取相應的治療方案。
鵝的每個生長階段對營養的需求均有差異,飼養者需合理調整飼料搭配,確保飼料營養全面,禁止喂養雞飼料,不隨意提高飼料中蛋白質和鈣的含量。蛋白質含量應控制在16%~18%,雛鵝才能排出尿酸等代謝產物,避免其在體內積累,防止痛風發生。同時應保障飲水充足,發現霉變飼料盡早丟棄,增加青綠飼料在飼喂料中的百分比。飼養密度不能太大,使雛鵝有充足的活動空間,加強雛鵝運動,以此提高雛鵝對疾病的抵抗力。這些措施可以降低營養代謝型痛風的發病率。
2017年以來,隨著鵝飼養量的增加,我國部分地區陸續大范圍出現鵝痛風病例,各品種鵝(如長樂灰鵝、揚州白鵝、皖西白鵝等)均有發生[2,9]。患有鵝痛風的雛鵝多表現為運動遲緩、食欲減退、腹瀉,部分雛鵝腿、翅關節腫脹明顯。剖檢病死鵝的肝臟、心臟、腎臟及輸尿管等,可見白色斑點,為尿酸鹽沉積[10]。近年來,有試驗表明鵝痛風病例中均存在星狀病毒[11],然而由鵝星狀病毒引起的雛鵝痛風,其發病機制尚未了解,故一旦發現該病毒應盡快采取隔離、控制、消毒等措施。
根據訴主描述,該養殖場中一直喂養的是雞飼料,其蛋白質含量遠遠高于雛鵝所需要的量,導致蛋白質在體內聚積,這是雛鵝患鵝痛風的一大重要因素。此外,通過實驗室PCR診斷檢測到了GAstV,這與之前的鵝痛風也可能是由GAstV引起的相關報道一致。
對于營養代謝失衡所導致的痛風,可以減少飼料中蛋白質含量,增加一定量的青綠飼料。同時在水中添加含有中藥成分的腎肝解毒液、0.5%碳酸氫鈉、維生素等,增強機體代謝能力。目前,尚無針對GAstV的藥物和疫苗,故若感染了GAstV,應盡早將其進行隔離治療,對病鵝接觸過的環境進行消毒,避免該病毒傳播。痛風發病后沒有特效藥,多種致病因素相互作用,導致其發病機制復雜,病雛鵝治愈率低,給全國養殖場造成了巨大的經濟損失。因此,鵝痛風要以預防為主、綜合防控,減少該病的發生,促進我國養鵝業健康綠色發展。