中性粒細胞堿性磷酸酶活性在骨髓增殖性腫瘤中的診斷價值

劉倩 張興利(通信作者) 徐靜

215300 江蘇省昆山市第三人民醫院血液科，江蘇昆山

骨髓增殖性腫瘤(MPN)常由各種因素導致患者骨髓血細胞過度增殖而發病，其病因復雜，在各系統疾病中可引起血細胞繼發性增多的疾病種類繁多，故增加了MPN 的診斷難度。血栓為MPN 常見并發癥之一，嚴重者可導致患者癱瘓甚至死亡，故MPN 的早期診斷對治療、預后均有很大的幫助。骨髓檢查結果雖然為確診MPN 的主要診斷標準，但該檢查結果耗時長，因此需探討更為便捷、快速的鑒別診斷方法[1]。中性粒細胞中的堿性磷酸酶(NAP)為成熟粒細胞S 顆粒釋放的一種酶，其活性高低與成熟粒細胞成熟程度及功能相關，因此經常被用于作為細胞功能的衡量手段。隨著對NAP 的深入研究，發現在許多疾病的發生發展過程中，都可能檢測到NAP 活性的升高或降低，而其活性是否在MPN 中具有特異性改變，值得深入研究，本研究分析NAP 陽性率和NAP 積分在MPN 中的診斷價值，現報告如下。

資料與方法

我院自2020年11月11日-2021年4月11日收治的MPN患者23例作為試驗組，年齡18～78歲，年齡中位數為48歲；其中慢性粒細胞性白血病(CML)患者5例，占21.74%，骨髓纖維化(MF)患者5例，占21.74%，原發性血小板增多癥(ET)患者8例，占34.78%，真性紅細胞增多癥(PV)患者5例，占21.74%。繼發性紅細胞增多患者10例和繼發性血小板增多患者14 例，總計24 例作為對照組1，年齡22～76 歲，年齡中位數為39 歲；其中繼發性紅細胞增多患者占41.67%，繼發性血小板增多患者占58.33%。同期健康體檢者26 例作為對照組2，年齡21～72 歲，統計年齡中位數為43 歲。三組受檢者一般資料比較，差異無統計學意義(P＞0.05)。本研究通過昆山市第三人民醫院倫理委員會批準，入組者知情同意。

試劑與方法：①試劑：臺灣貝索公司NAP 免疫組化檢測試劑。②測定方法：用清潔玻片推制新鮮血膜，晾干，用臺灣貝索公司NAP 免疫組化檢測試劑進行染色處理，嚴格按照該試劑說明書操作，成片后在油鏡下進行鏡檢，選擇分布均勻的細胞部位，進行NAP 陽性率測定，并計算NAP 積分。③NAP 陽性率及積分計算方法：在油鏡下進行中性分葉核粒細胞觀察，計數100 個，將其作為判斷其陽性率的依據，具體為：(-)：細胞漿內未發現黑色的物質；(+)：細胞漿內發現有棕黑色或是黑色的顆粒，占細胞漿內的1/4 以內面積；(++)：細胞漿內發現有灰黑色的顆粒，占細胞漿內的1/2 以內面積；(+++)：細胞漿內發現有致密的黑色沉淀物，占細胞漿內的3/4 以內面積；(++++)：細胞漿內發現有致密的黑色的顆粒，幾乎將胞核完全覆蓋；積分計算：(+)細胞數×1+(++)細胞數×2+(+++)細胞數×3+(++++)細胞數×4。

觀察指標：觀察三組NAP 陽性率和積分檢測結果，并對比試驗組內CML、MF、ET、PV 患者的NAP 檢測結果，包括NAP 陽性率及NAP 積分。

統計學方法：數據采用SPSS 21.0 進行統計學分析。計數資料以n(%)表示，組間χ2檢驗，計量以(±s)表示，組間t檢驗，P＜0.05表示差異有統計學意義。

結 果

試驗組MF、ET、PV患者NAP陽性率和積分均顯著高于對照組1和對照組2，差異均有統計學意義(P＜0.05)。試驗組CML患者NAP陽性率和積分均低于對照組1和對照組2，差異均有統計學意義(P＜0.05)。試驗組CML、ET、MF患者NAP陽性率和積分均顯著低于PV患者，差異均有統計學意義(P＜0.05)。試驗組MF患者NAP陽性率和積分均顯著高于ET患者，差異均有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 三組NAP檢測結果對比(±s)

表1 三組NAP檢測結果對比(±s)

注：與對照組比較，①P＜0.05；與PV比較，②P＜0.05；與ET比較，③P＜0.05；與MF比較，④P＜0.05

組別 項目 NAP陽性率(%) NAP積分試驗組 CML(n=5) 8.20±2.79①②③④ 11.50±3.41①②③④(n=23) MF(n=5) 76.40±7.89① 206.90±31.98①③ET(n=8) 69.88±9.37①② 87.56±18.91①②PV(n=5) 86.74±5.98① 211.10±39.56①對照組1(n=24) 36.29±8.76 58.44±13.75對照組2(n=26) 30.77±5.07 45.61±14.52

討 論

MPN是腫瘤樣增殖癥，屬于多功能干細胞克隆性疾病，可能由粒細胞、紅細胞以及巨核細胞增殖而成，也可能由骨細胞和原纖維細胞增生導致[2]。該類疾病主要包括CML、PV、ET、PMF 等，各種疾病在臨床表現上存在相當程度的重疊，如都可能出現乏力、盜汗、腹脹、體重減輕，外周血一系或者多系細胞計數的增高，同時可伴有肝臟腫大、脾臟腫大、血栓形成等。

不同的細胞導致了疾病增生速度不同，同時臨床癥狀也有差異，從而導致診斷及鑒別存在困難[3]。同時，因為沒有特異性臨床癥狀，明確診斷均需要依靠活檢、骨髓細胞以及免疫遺傳檢查。其中骨髓穿刺、活檢意義重大，但為有創操作且耗時較長，尋求更為快捷、簡便、準確的檢查方法顯得十分有意義[4]。

NAP是中性粒細胞成熟顆粒釋放的一種酶，根據目前的研究，該酶的活性可與多種因素相關，其中免疫、感染、創傷或者中毒均可能影響該酶活性，而內分泌功能和激素也可能產生影響[5-9]。同時其在堿性環境下可具有殺菌作用，其活性也與機體所感染的病毒種類、嚴重程度相關[10]。

有研究顯示，NAP 可能隨著病情的變化增加或者降低活性[11]，患者如果是粒細胞白血病、單核細胞性白血病、紅白血病或陣發性睡眠性血紅蛋白尿癥，其NAP 均可能檢測到活性降低，而在出血類疾病、細菌感染、手術感染、急性淋巴細胞白血病以及再生障礙性貧血等疾病中，可檢測到其活性增高。

王錦等[12]收集了200 例腫瘤化療后合并感染患者臨床資料，將患者分為真菌組、細菌組和病毒組。對所有患者進行NAP 檢測，并對各組患者體內NAP 水平進行比較，結果發現細菌組患者NAP 水平最高，真菌組和病毒組患者體內NAP 水平較低，差異有統計學意義。

梁崇等[13]將150 例兒童根據病情分為正常對照組、單純手足口病(HFMD)組及HFMD 合并感染組，對其分別進行白細胞形態學分類及NAP 檢測，結果發現HFMD 合并感染組NAP 陽性率及積分均顯著高于正常對照組、單純HFMD 組，HFMD 合并感染組患兒經治療后該組患兒的NAP 陽性率及積分顯著下降，與治療前比較差異具有統計學意義。這提示通過對HFMD 合并感染患兒的NAP 陽性率及積分監測有助于臨床醫生對疾病的診斷、預后進行判斷。

NAP 的含量以活性直接標志中性粒細胞的成熟度，因此經常被作為衡量細胞功能的一種手段，并且該實驗也相對快速、簡便，應用前景廣闊[14]。在本研究結果中，試驗組MF、ET、PV 患者NAP 陽性率和積分均顯著高于對照組1 和對照組2，試驗組CML患者NAP陽性率和積分均顯著低于對照組1和對照組2，說明了相較于繼發性紅細胞增多或者繼發性血小板增多的患者，以及健康體檢者，MF、ET、PV 患者NAP 陽性率普遍更高，NAP 積分也表現出了差異，而CML 患者的NAP 陽性率和積分普遍降低，說明了NAP 陽性率和NAP 積分在鑒別MPN 中有一定的意義，但目前仍然不具有明確診斷的能力，期待后續研究深入觀察NAP在種類不同的MPN中的表現。

而試驗組CML、ET、MF患者的NAP陽性率和積分均低于PV患者。試驗組CML患者NAP陽性率和積分低于ET、MF患者，MF患者NAP積分和陽性率高于ET患者。由于CML的NAP陽性率和積分相較于正常對照組1 和對照組2 更低，且與MF、ET、PV 也表現出了顯著統計學差異，可以認為，NAP 可以作為診斷CML的優秀診斷指標。

綜上所述，NAP 染色簡便、快速，且其陽性率與積分在MPN 患者中可出現變化，與其他因素引起繼發性血細胞增多的患者及正常體檢者不同。同時，在不同種類的MPN 中也有不同的表現，是診斷與鑒別MPN的重要指標。