承德地區(qū)亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性與妊高征相關(guān)性的研究

王玲玲 郭志國 陳向華

妊娠期高血壓疾病(妊高征)是妊娠期所特有的疾病，嚴(yán)重地威脅著母嬰的健康，其發(fā)病機制至今尚未闡明。近年來隨著各種分子生物學(xué)技術(shù)的日漸成熟，人類基因組研究也在不斷發(fā)展與進步，遺傳學(xué)因素在妊高征病因?qū)W及發(fā)病機制中發(fā)揮的作用已成為研究的熱點問題。亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)是機體葉酸轉(zhuǎn)運及代謝的關(guān)鍵酶，大量的研究表明，MTHFR基因的多態(tài)性與婦幼保健類疾病有關(guān)，例如：妊娠期高血壓疾病、胎盤早剝、習(xí)慣性流產(chǎn)、胎兒宮內(nèi)生長受限、胎兒出生缺陷、新生兒自閉癥、產(chǎn)后抑郁及其他妊娠并發(fā)癥等[1，2]。目前，關(guān)于承德地區(qū)該基因多態(tài)性與妊高征的報道筆者所見尚無；因此，本研究旨在探討承德地區(qū)兩者之間的相關(guān)性，為尋找妊高征的發(fā)病機制及早期干預(yù)防治提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2016年12月至2018年12月在我院定期產(chǎn)前檢查并住院分娩的孕婦358例，排除有高血壓病史、糖尿病史、腎病史、肝病史、內(nèi)分泌病史、心腦血管疾病史、先天性疾病史、遺傳性疾病史、結(jié)締組織疾病史、免疫系統(tǒng)疾病史、惡性腫瘤和既往血脂、凝血功能異常者，并隨訪至產(chǎn)后12周。發(fā)生妊娠期高血壓疾病的孕婦32例(妊高征組)，其中妊娠高血壓14例(妊娠期高血壓組)，輕度子癇前期10例(輕度子癇前期組)，重度子癇前期8例(重度子癇前期組)；未發(fā)生妊娠期高血壓疾病的孕婦326例(正常對照組)；診斷及分類標(biāo)準(zhǔn)以《婦產(chǎn)科學(xué)》為準(zhǔn)[3]。妊高征組：年齡22～38歲，平均年齡(26.7±4.1)歲；孕周11～32周，平均(24.6±5.42)周；正常對照組：年齡20～37歲，平均年齡(25.9±5.89)歲；孕周12～33周，平均孕周(25.4±4.32)周。2組孕婦的年齡及孕周差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 外周血標(biāo)本采集 孕婦于孕檢時抽取空腹12 h靜脈血5 ml，分別用乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na2)抗凝(2 ml)和肝素抗凝(3 ml)。

1.3 基因組DNA提取及MTHFR基因多態(tài)性檢測 采用深圳奧薩醫(yī)藥有限公司的MTHFR基因677C/T檢測試劑盒提取基因組DNA，嚴(yán)格按照試劑說明書操作，采用熒光PCR技術(shù)進行基因多態(tài)性的檢測，所用儀器是羅氏480熒光定量PCR儀。采用天津中成佳益生物科技有限公司的同型半胱氨酸(Hcy)試劑盒(酶循環(huán)法)檢測血漿Hcy水平，所用儀器是貝克曼庫爾特AU5800全自動生化分析儀。

2 結(jié)果

2.1 妊高征組與對照組的MTHFR基因型比較 妊高征組中C677/T677、C677/C677基因型與正常對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.783，χ2=9.243，P<0.05);妊高征組中T677/T677基因型與正常對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=1.576，P>0.05)；妊娠期高血壓組、輕度子癇前期組和重度子癇前期組與正常對照組比較，它們的T677/T677基因型、C677/T677基因型、C677/C677基因型差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 2組孕婦MTHFR基因型比較 例(%)

2.2 妊高征組與對照組等位基因頻率比較 妊高征組中T677等位基因頻率(51.6%)顯著高于正常對照組(33.1%)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=8.731，P<0.05)；妊娠期高血壓組、輕度子癇前期組和重度子癇前期組與正常對照組比較，T677等位基因頻率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=2.126，4.150，3.737，P>0.05)。見表2。

表2 2組孕婦MTHFR等位基因頻率比較 例(%)

2.3 MTHFR不同基因型血漿Hcy水平比較 妊高征組和正常對照組中，MTHFR基因存在突變者較無突變者的血漿Hcy水平更高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。見表3。

表3 MTHFR不同基因型血漿Hcy水平比較

3 討論

MTHFR參與Hcy的代謝，是Hcy再甲基化過程的關(guān)鍵酶[4]。MTHFR酶活性下降，使機體內(nèi)葉酸和蛋氨酸循環(huán)發(fā)生障礙，體內(nèi)DNA、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)甲基化不足，Hcy在體內(nèi)積聚，形成高Hcy血癥[5，6]。高濃度的Hcy能加速氧自由基的生成，損傷血管內(nèi)皮細胞，使血管內(nèi)皮功能受損；同時高Hcy還可以促進低密度脂蛋白的氧化，激活血小板的聚集和黏附功能，刺激血管平滑肌細胞的增生，血管舒縮平衡發(fā)生紊亂，造成機體凝血和纖溶系統(tǒng)的破壞，形成血栓前狀態(tài)，參與機體的病理過程，從而導(dǎo)致妊娠期高血壓疾病。

MTHFR基因的多態(tài)性是存在地域和種族差異性的[7，8]。我國MTHFR基因677C→T的突變率則處于一個較高水平，T等位基因頻率是37.5%左右[9]。目前，多數(shù)研究表明，MTHFR基因多態(tài)性與妊高征的發(fā)病密切相關(guān)[10]。Kosmas等[11]通過分析關(guān)于MTHFR基因多態(tài)性與子癇前期的23篇研究論文顯示，基因突變的孕婦發(fā)生子癇前期的風(fēng)險較對照組要增加1.21倍，攜帶T等位基因的孕婦孕期舒張壓升高的風(fēng)險增加1.41倍。Perales等發(fā)現(xiàn)MTHFR基因677C→T的突變與子癇前期有顯著相關(guān)性，其研究結(jié)果顯示，試驗組與對照組比較MTHFR C677T純合型(T/T)、雜合型(C/T)、野生型(C/C)分別為38.46%和20%、38.46%和26.6%、23%和53%。

國內(nèi)也有研究發(fā)現(xiàn)，妊高征組中的MTHFR C/T基因型與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.21,P<0.05)；T等位基因頻率妊高征組(48.8%)高于正常對照組(32.5%)，二者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.08,P<0.05)；結(jié)果表明MTHFRT677等位基因可能是妊高征的發(fā)病誘因之一[12-14]。但是也有研究證實MTHFR基因的多態(tài)性與子癇前期沒有明顯的相關(guān)性[15]。

因此，為了了解承德地區(qū)MTHFRC677T基因多態(tài)性與妊高征的關(guān)系，本研究共選取358例妊娠期女性，其中妊高征患者32例(妊娠期高血壓組14例，輕度子癇前期組10例，重度子癇前期組8例)，正常對照組326例。妊高征組中C677/T677基因型與正常對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);妊高征組中C677/C677基因型與正常對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；妊高征組中T677等位基因頻率(51.6%)高于正常對照組(33.1%)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；妊高征組和正常對照組中，MTHFR基因存在突變者較無突變者的血漿Hcy水平更高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；結(jié)果表明，承德地區(qū)孕婦MTHFR基因C677T多態(tài)性和高水平的血漿Hcy可能與妊高征的發(fā)病有關(guān)，T677等位基因可能是妊高征的易感基因。

本研究通過分析承德地區(qū)MTHFR基因的多態(tài)性變化，探討妊高征發(fā)病的遺傳學(xué)機制，發(fā)現(xiàn)基因多態(tài)性與妊高征發(fā)病率密切相關(guān)，這對于妊高征的早期診斷、及時預(yù)防及個體化基因治療提供了重要的病理生理學(xué)線索。但是本研究未能證明MTHFR C→T突變與病情嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，可能是由于本研究的病例較少，可能會對結(jié)果造成偏移,同時，基因多態(tài)性分布存在地域、種族、人群等差異，并且病例對照研究是具有多因素復(fù)雜性的，得到的研究結(jié)果常常受到許多不穩(wěn)定因素影響。因此，今后應(yīng)加強大樣本、多種族、跨地域的多中心深入研究。

目前，妊高征的遺傳學(xué)研究尚存在諸多問題，以后的研究重點可以放在分析不同基因型頻率和T等位基因頻率與環(huán)境因素間的相關(guān)性，以及MTHFR基因與其他易感基因間的協(xié)同關(guān)系，從轉(zhuǎn)錄和翻譯等分子水平了解其內(nèi)在機制，為妊高征的早期診斷和早期預(yù)防提供一定的遺傳學(xué)信息依據(jù)。大量研究結(jié)果提示，MTHFR基因多態(tài)性可能是妊高征的一個遺傳危險因素。

本研究也顯示，承德地區(qū)該基因多態(tài)性與妊高征密切相關(guān)；從優(yōu)生優(yōu)育的角度出發(fā)，我們應(yīng)該普及和推廣MTHFR 基因 677C/T 多態(tài)性在孕前、孕中的檢測，根據(jù)檢測結(jié)果制定個體化治療與預(yù)防方案，降低妊高征的發(fā)病風(fēng)險，確保孕婦和胎兒的安全。