用不同的免疫檢驗方法檢測乙肝病毒感染血清標志物的效果分析

田仁鳳

（貴州省思南縣民族中醫院，貴州 思南 565100）

乙型肝炎病毒（乙肝病毒）屬于嗜肝DNA病毒科。乙型肝炎（乙肝）是我國乃至全世界最主要的傳染病之一。乙肝病毒主要存在于乙肝患者的血液及體液中。據估計，全球范圍內目前約有3億多乙肝病毒攜帶者。感染乙肝病毒可引起急、慢性乙肝。流行病學研究表明，肝細胞癌的發生與患者存在乙肝病毒感染密切相關。在感染乙肝病毒后，人體會產生各種不同模式的血清學免疫應答反應[1]。通過檢測相關的血清標志物，可診斷乙肝病毒感染，并可判斷患者病情的進展和預后。在本文中，筆者主要是比較用磁微?；瘜W發光法和酶聯免疫法檢測乙肝病毒感染血清標志物的效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2020年2月至8月思南縣民族中醫院接診的162例乙肝患者作為本次研究的對象。這些患者的年齡為12歲至70歲，平均年齡（40.27±2.17）歲。其中排除合并有血液疾病的患者。

1.2 儀器和試劑

本研究中所用的檢測儀器包括：Autolumo全自動化學發光測定儀；上?？迫AST-360酶標儀。本研究中所用的檢測試劑包括：鄭州安圖生物工程有限公司生產的乙肝病毒檢測試劑盒(磁微粒化學發光法）；上?？迫A生物工程股份有限公司生產的乙肝病毒檢測試劑盒(酶聯免疫法）。

1.3 檢測方法

對這162例乙肝患者均進行乙肝病毒感染血清標志物檢測，方法是：采集患者的血液樣本。使用普通管采集的血液樣本，離心前在37℃下孵育1 h。使用促凝管采集的血液樣本，離心前在37℃下孵育0.5 h。樣本中的沉淀物和懸浮物可能會影響檢測結果，因此應對樣本進行充分的離心處理。在完成樣本采集后，若不能及時進行檢測，應將其置于2～8℃的冰箱中保存。若需保存48 h以上，應先提取出血清標本，并將其凍存于-20℃以下的環境中。應注意避免反復凍融。使用前應使標本恢復至室溫，并輕輕搖動混勻[2]。分別采用磁微?；瘜W發光法、酶聯免疫法檢測血清標本中 HBsAg、HBsAb、HBeAb、HBeAg、HBcAb 的含量。嚴格按照試劑操作說明書進行檢測，并使用質控物進行室內質控[3]。兩種檢測結果的判定標準見表1。

表1 兩種檢測結果的判定標準

1.4 統計學方法

采用SPSS 21.0統計學軟件對本研究中的數據進行分析。計量資料用均數±標準差（±s）表示，采用t檢驗，計數資料用百分比（%）表示，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

進行磁微?；瘜W發光檢測所得HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb的陽性檢出率分 別 為 74.07%（120/162）、32.10%（52/162）、17.90%（29/162）、30.86%（50/162）、69.75%（113/162）,進行酶聯免疫檢測所得HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb的陽性檢出率分 別 為 62.96%（102/162）、17.90%（29/162）、19.75%（32/162）、14.81%（24/162）、77.16%（125/162）。與進行酶聯免疫檢測相比，進行磁微?；瘜W發光檢測所得HBsAg、HBsAb、HBeAb的陽性檢出率均較高，差異有統計學意義（P＜0.05）。進行酶聯免疫檢測與磁微?；瘜W發光檢測所得HBeAg、HBcAb的陽性檢出率相比，差異無統計學意義（P＞0.05）。詳見表2。

表2 進行兩種檢測所得各項乙肝病毒感染血清標志物陽性檢出率的對比[%(例)]

3 討論

有研究顯示，部分乙肝病毒攜帶者血清HBsAg的水平較低，采用酶聯免疫法對其血清HBsAg的水平進行檢測易出現檢測結果呈假陰性的情況[4]。相關的研究指出，采用磁微粒化學發光法檢測乙肝病毒感染血清標志物的敏感度高于采用酶聯免疫法，這與上述兩種檢測方法的檢測原理不同有關。在采用磁微?；瘜W發光法檢測乙肝病毒感染血清標志物時，主要是利用雙抗體夾心原理檢測HBsAg、HBsAb、HBeAg，即用已知的抗體或抗原包被磁微粒，用辣根過氧化物酶標記相應的抗體或抗原，然后制備酶結合物，并通過免疫反應形成抗體-抗原-酶復合物或抗原-抗體-酶標抗原復合物。上述復合物可催化發光底物發出光子，其發光強度與相應抗原或抗體的水平成正比[5]。在采用磁微?；瘜W發光法檢測乙肝病毒感染血清標志物時，主要是利用競爭原理檢測HBeAb、HBcAb，即用已知的抗原包被磁微粒，用辣根過氧化物酶標記相應的抗體，然后制備酶結合物，并通過免疫反應形成抗體-抗原酶標抗體復合物。該復合物可催化發光底物發出光子，其發光強度與相應抗原或抗體的水平成反比[6]。有研究指出，采用酶聯免疫法檢測乙肝病毒感染血清標志物具有操作簡單、檢測時間短、檢測成本低等優點。但有研究發現，在采用酶聯免疫法檢測乙肝病毒感染血清標志物時，若抗原或抗體酶結合物的濃度、吸光度較低，易出現檢測結果呈假陰性的情況。若酶結合物的濃度過高、吸光度過大，超出敏感范圍，檢測結果同樣會受到影響。在采用酶聯免疫法檢測乙肝病毒感染血清標志物時，檢測相關操作通常以手工操作為主，這使得檢測結果易受實驗室條件和人為因素的影響。標本采集、實驗室人員操作、試劑、儀器設備等多種因素都會影響檢測結果。在對HBsAg濃度較小的標本進行檢測時，不易準確判斷其檢測值[7]。而采用磁微?；瘜W發光法檢測乙肝病毒感染血清標志物通?？杀苊饧訇幮詸z測結果的出現。這主要是由于，采用磁微粒化學發光法檢測乙肝病毒感染血清標志物時主要是使用全自動檢測儀進行檢測操作。這樣可以提高檢測的敏感度、精密度和準確度，避免人為因素引起的誤差，使檢測結果穩定可靠[8]。有研究指出，與采用酶聯免疫法相比，用磁微?；瘜W發光法檢測乙肝病毒感染血清標志物的效果較好[9]。但需要注意的是，用磁微?；瘜W發光法檢測乙肝病毒感染血清標志物的檢測成本較高[10]。筆者認為，若想提高用磁微?；瘜W發光法與酶聯免疫法檢測乙肝病毒感染血清標志物的準確性，需要注意以下幾點：1）采集和處理標本時應盡量避免相關干擾因素的影響；2）應選擇質量有保證的試劑；3）應做好檢測儀器設備的日常保養和定期校準；4）應加強對檢測人員的培訓；5）應制定嚴格的實驗室操作規程；6）應選擇合適的質控物進行室內質控，減少外在影響因素，使檢測結果更準確[11]。本研究的結果顯示，與進行酶聯免疫檢測相比，進行磁微?；瘜W發光檢測所得HBsAg、HBsAb、HBeAb的陽性檢出率均較高，差異有統計學意義（P＜0.05）。進行酶聯免疫檢測與磁微?；瘜W發光檢測所得HBeAg、HBcAb的陽性檢出率相比，差異無統計學意義（P＞0.05）。

綜上所述，與采用酶聯免疫法相比，用磁微?；瘜W發光法檢測乙肝病毒感染血清標志物的效果較好。此法值得在臨床上推廣應用。