血清膽紅素水平變化與動脈粥樣硬化斑塊氧化損傷的關(guān)系

吳麗君，金孟浩，黃建芳，陳雪萊，陳紅麗，林 群

(溫州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 1.檢驗科；2.神經(jīng)外科，浙江 溫州 325000；3.溫州市中心醫(yī)院 神經(jīng)外科，浙江 溫州 325000)

大量證據(jù)表明，氧化介導(dǎo)的血管損傷和低密度脂蛋白(LDL)氧化參與動脈粥樣硬化的發(fā)病，而氧化修飾LDL較單獨的LDL 具有更強的致動脈粥樣硬化作用。LDL中的多不飽和脂肪酸易發(fā)生脂質(zhì)過氧化，產(chǎn)生脂氫過氧化物(LOOH)，故LOOH較常規(guī)的血脂指標(biāo)的檢測，在反應(yīng)動脈粥樣硬化病理狀態(tài)方面優(yōu)越性更為顯著。因此，內(nèi)源性抗氧化化合物有望抑制LDL氧化和動脈粥樣硬化過程。膽紅素屬于一種內(nèi)源性相關(guān)的抗氧化劑，由血紅素代謝生成，具有抗氧化特性，在心血管相關(guān)疾病發(fā)生發(fā)展中具有一定的保護作用，且有研究發(fā)現(xiàn)血清膽紅素水平與頸動脈粥樣狹窄程度呈負(fù)相關(guān)。本研究檢測計劃行頸內(nèi)動脈剝脫術(shù)患者的血脂、氧化損傷因子水平，并分析氧化損傷因子與血清中膽紅素水平的關(guān)系，以期為尋求從病因上更早地預(yù)防動脈粥樣斑塊的發(fā)生提供一定的參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對象選取 選擇2019年1月—12月在溫州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院計劃行頸內(nèi)動脈剝脫術(shù)的患者，納入標(biāo)準(zhǔn)：①通過超聲、CTA、MRI及DSA等檢查手段，符合頸動脈粥樣硬化斑塊相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；②符合頸內(nèi)動脈剝脫術(shù)相關(guān)指征；③動脈內(nèi)膜切除術(shù)標(biāo)本、斑塊均為纖維脂質(zhì)病變，無顯著血栓形成和/或鈣化；④抽血前3天無高脂飲食。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患炎癥、腫瘤、血液系疾?。虎诖嬖趥魅静?、肝病和/或腎臟疾病等病史；③酒精濫用或存在服用抗氧化劑補充劑病史。

1.2 一般資料 共入組40例，根據(jù)狹窄程度不同分為A組(狹窄程度<90%)26例和B組(狹窄程度≥90%)14例。A組中男17例，女9例；年齡54～81歲，平均(67.51±8.12)歲；BMI 22～26 kg/m，平均(23.47±1.92)kg/m；既往病史為冠心病8例，高血壓14例，糖尿病5例，腦梗死6例；有吸煙史15例。B組中男9例，女5例；年齡56～83歲，平均(68.17±7.26)歲；BMI 21～24 kg/m，平均(23.08±1.76)kg/m；既往病史為冠心病6例，高血壓10例，糖尿病4例，腦梗死4例；有吸煙史8例。另選取40名健康體檢者作為C組，其中男25例，女15例；年齡54～80歲，平均(67.52±8.13)歲；BMI 22～23 kg/m，平均(22.86±1.96)kg/m。3組患者的性別、年齡、BMI差異無統(tǒng)計學(xué)意義(>0.05)。所有研究對象知情同意，本研究通過溫州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院倫理委員會審核。

1.3 觀察指標(biāo) 在入院后第2 d采集全部患者10 mL空腹靜脈血，全自動生化分析儀測定總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)水平；ELISA法(試劑盒購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司)檢測血清髓過氧化物酶(MPO)水平；礬酸氧化法檢測總膽紅素(STB)、間接膽紅素(SIB)、直接膽紅素(SDB)水平。

脂質(zhì)氫過氧化物(LOOH)測定：在全部患者行頸內(nèi)動脈剝脫術(shù)過程中，收集內(nèi)膜斑塊，為了提取油脂及其氧化形態(tài)，將斑塊均勻溶于含有丁基羥基甲苯的氯仿/甲醇(體積比為2∶1)中，然后加入50 m mol/L NaCl溶液，離心后，取氯仿相液90 μL，在含10 μL TPP (10 mmol/L)或甲醇中混勻，37℃反應(yīng)30 min；加入FOX 反應(yīng)液900 μL，混勻，室溫反應(yīng)30 min，12 000 r/min 離心5 min。取上清液測D值，以加與不加TPP 兩管的D值之差計算LOOH含量。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0軟件包處理數(shù)據(jù)，計數(shù)資料用%描述，組間用卡方檢驗；計量資料2組間比較用檢驗，多組間比較用單因素方差分析；膽紅素水平與氧化損傷因子之間的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)性分析。<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血脂水平 各組的TG、TC、LDL-C、HDL-C水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義(<0.001)，見表1。A組、B組的TG、TC、LDL-C水平均高于C組，HDL-C低于C組；B組的TG、TC、LDL-C水平均高于A組，HDL-C低于A組；差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(<0.05)。

表1 各組的血脂水平比較Table 1 Comparison of lipid levels in each group

2.2 氧化損傷因子水平 各組的LOOH、MPO水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義(<0.001)，B組最高，C組最低，見表2。

表2 各組氧化損傷因子水平比較Table 2 Comparison of oxidative damage factor levels in each

2.3 血清膽紅素水平 各組的STB、SIB、SDB水平差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(<0.001)，B組最低，C組最高，見表3。

表3 各組血清膽紅素水平比較

2.4 相關(guān)性分析 Spearman相關(guān)分析顯示，頸內(nèi)動脈剝脫術(shù)患者血清膽紅素水平與氧化損傷因子水平呈顯著負(fù)相關(guān)(=-0.6092、=-0.6972、=-0.5429、=-0.6844，均<0.001；=-0.3870，=0.0136)。見圖1。

圖1 行頸內(nèi)動脈剝脫術(shù)患者的血清膽紅素 水平與LOOH(A)、MPO(B)水平的相關(guān)性Figure 1 Correlation between serum bilirubin levels and LOOH (A) and MPO (B) levels in patients undergoing internal carotid artery dissection

3 討論

高血壓、糖尿病、冠心病、腦梗死等心腦血管疾病可促進患者動脈粥樣硬化，形成斑塊，若病情得不到有效控制，可出現(xiàn)斑塊破裂甚至脫落，嚴(yán)重危及患者的生命安全。了解動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展機制對降低心腦血管不良事件的發(fā)生具有積極意義。內(nèi)-中膜作為最早病變的部位，起源于內(nèi)皮細(xì)胞受損，線粒體產(chǎn)生大量的活性氧，引起LDL-C蓄積于血管內(nèi)皮下，促進內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，誘導(dǎo)單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等炎性細(xì)胞進入血管壁吞噬LDL-C，產(chǎn)生大量的泡沫細(xì)胞累積于此，形成局部的慢性炎癥反應(yīng)促進斑塊的發(fā)生發(fā)展。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，B組血脂水平較A組變化更為顯著。提示隨著患者頸動脈狹窄程度的加劇，其血脂代謝更紊亂，進一步證實脂質(zhì)代謝參與了動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。

研究發(fā)現(xiàn)，在脂質(zhì)被組織代謝后，其產(chǎn)生的氧自由基促進內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞分泌MPO，參與氧化修飾作用，致使HDL功能失調(diào)及氧化LDL形成氧化型LDL，引發(fā)脂質(zhì)過氧化，促進氧化損傷因子LOOH的產(chǎn)生，將進一步加劇動脈粥樣硬化斑塊的形成發(fā)展。故為了進一步了解上述氧化損傷因子與頸動脈狹窄程度的關(guān)系，本研究檢測患者血清中MPO水平及內(nèi)膜中的LOOH水平，結(jié)果顯示，與C組相比，B組LOOH、MPO水平較A組增加更為顯著。提示隨著頸動脈狹窄程度的加劇，患者頸動脈粥樣硬化斑塊氧化損傷愈發(fā)嚴(yán)重，也說明了氧化損傷和脂質(zhì)過氧化是影響頸內(nèi)動脈粥樣硬化斑塊致狹窄的重要指標(biāo)。

現(xiàn)階段臨床研究報道，血清膽紅素屬于一種內(nèi)源性的抗氧化劑，頸動脈粥樣硬化患者的頸動脈狹窄程度與血清膽紅素水平呈負(fù)相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，與C組相比，B組STB、SIB、SDB水平較A組降低更為明顯，提示患者頸動脈狹窄程度越嚴(yán)重，其血清膽紅素水平越低，說明血清膽紅素水平的增高可抑制動脈粥樣硬化的發(fā)展。分析原因可能為：1)膽紅素屬于機體中鐵卟啉化合物的一種代謝產(chǎn)物，本身作為一種脂溶性抗氧化劑，可清除氧自由基，提升膽固醇的溶解性，促進膽固醇從膽汁中排出，抑制LDL-C的氧化修飾反應(yīng)，進而起到保護血管內(nèi)皮功能的作用；2)膽紅素通過對補體的抑制作用來降低機體的炎癥反應(yīng)，進而緩解病灶處的慢性炎癥反應(yīng)，抵抗動脈粥樣硬化的進展。

本研究進一步分析了血清膽紅素對動脈粥樣硬化斑塊氧化損傷因子的影響，結(jié)果顯示，患者STB、SIB與LOOH、MPO之間呈顯著負(fù)相關(guān)。這一結(jié)果證明了血清膽紅素在動脈粥樣硬化斑塊形成過程中具有較好的脂質(zhì)氧化調(diào)控作用，對斑塊氧化損傷具有抑制作用。而SDB對脂質(zhì)氧化作用不顯著的原因可能是SDB屬于共軛膽紅素，其親水特性導(dǎo)致與生物脂類的疏水相互作用，故在動脈粥樣硬化斑塊中發(fā)揮較低的抗氧化抗脂溶作用。

綜上所述，血脂水平紊亂及脂質(zhì)氧化損傷機制參與動脈粥樣硬化斑塊的形成進展，而血清膽紅素水平的升高對該病具有保護作用，其作用原因可能與膽紅素對氧化損傷因子的負(fù)調(diào)控作用有關(guān)。