銀白魚人工繁殖受精卵附著介質篩選

范姝云 肖勇 田敏 曲品 楊劍虹 安莉

(昆明市水產科學研究所，云南昆明 650021)

銀白魚(Anabariliusalburnops)隸屬于鯉科、鲌亞科、白魚屬，是白魚屬中個體較大的種類，其營養豐富、肉質鮮嫩肥美，是滇池特有的土著魚種，一直以來深受廣大昆明市民的青睞，二十世紀七十年代以前是滇池主要的經濟魚類[1]。后隨著昆明城市化、工業化的發展以及大規模圍湖造田，破壞了水生生物繁殖棲息場所，加之外來物種侵入、酷漁濫捕等因素，導致滇池水生態環境遭到破壞，水質逐漸惡化至Ⅳ類[2-3]，銀白魚在滇池中的生存空間遭到擠占，產卵場面積縮小，種群幾近消失，現已被《中國瀕危動物紅皮書——魚類》《中國紅色名錄》《IUCN紅色名錄》列為瀕危種類，同時也被列入云南省特有珍稀保護動物名錄[3]。

銀白魚體長而側扁，頭后背部隆起，背包平直，腹緣呈弧形，體高略小于頭長。吻端尖，吻長大于眼徑而微微小于眼間距，口端位或次上位，下頜略突出，其前端的小突起嵌入上頜的凹陷處，口裂斜向上，后端伸達鼻孔前緣的正下方，無須。腹棱自腹鰭基后延伸至肛門。銀白魚生活于水體的中上層，常在水草叢中覓食。該魚食性雜，在不同生長階段所攝取的食物組成不同：體長110～170 mm時，以枝角類為主，其次是絲狀藻、小魚和蝦等；體長171～335 mm時，以小魚和蝦為主[1-2]。銀白魚為小型魚類，生長較慢，1冬齡魚可達到性成熟，產卵盛期為2月至3月中旬，卵為黏性。據觀察，銀白魚多選擇滇池邊礫石較多的湖灣產卵。

開展銀白魚人工繁殖及孵化研究是銀白魚種群恢復的關鍵技術手段。目前，對銀白魚人工繁殖及孵化的研究極少，幾乎沒有可供查證的學術資料，故亟須系統地開展人工繁殖和孵化各基本參數的研究。本試驗為銀白魚人工繁殖探索性試驗，旨在篩選出最利于受精卵孵化的附著介質，提高孵化效率，保障孵化質量，為今后開展銀白魚人工增養殖提供基礎數據。

1 材料和方法

1.1 試驗場地

試驗在昆明市尋甸縣境內水產科學研究所土著魚繁育實驗室的鋼架大棚內進行，大棚面積為667 m2，水源采用地下井水，棚內設有工廠化循環水養殖設施1套，包含生物凈化、紫外線殺菌、增氧等設施設備。另準備足量的授精攪拌器皿、注射器、塑料方形箱、塑料漏水方框、充氧泵、10 mL量杯、鐵絲、白瓷盤等。

1.2 親魚來源

親魚是由2017—2019年在滇池收集到的銀白魚馴化后人工繁殖得到的子一代養成而來。

1.3 試驗方法

試驗選用4種受精卵附著介質，分別為尼龍紗窗網、棕片、礫石(工業用)、瓦片。尼龍紗窗網和棕片為魚類人工繁殖中常用的介質。采用礫石和板瓦是為了模擬銀白魚自然產卵場的沙礫和岸邊巖石環境。礫石平均粒徑約2 cm，均勻置于底面積為20 cm×30 cm的矩形塑料漏水筐中。瓦片大小為16 cm×16 cm，鉆孔，以方便用鐵絲固定。紗窗網的網目大小為1 mm×1 mm，剪裁為50 cm×50 cm的網片。棕片除去硬質部分，用手撕拉至松軟。另外單獨準備1塊30 cm×30 cm的紗窗網片，用于計算受精率。

使用前，所有介質經高錳酸鉀溶液浸泡消毒。使用時，將介質分別置于80 cm×60 cm×50 cm(長×寬×高)的長方形塑料箱中。對銀白魚人工授精完成后，用量筒分別裝10 mL受精卵布設到面積基本相同的4種介質上，靜置20 min，待受精卵產生黏性附著牢固后，再將箱中的介質取出分別移入4口培育缸中，使其處于培育缸的中上部以方便觀察。

1.3.1 人工授精及受精率計算

銀白魚授精采用干法授精。授精前用干毛巾擦拭親魚泄殖孔周圍，確保精液與卵子在獲取過程中不沾水。人工授精的雌雄比為1∶2，精子與卵子接觸后，加入適量0.85%的生理鹽水，用羽毛充分攪拌1～3 min。隨后用少量水沖洗多次，均勻攪拌，直至受精卵開始出現輕微的黏附現象時，用量杯分別取10 mL受精卵布設在放有不同介質的長方形箱中。

與此同時，另取2個10 mL量筒(分別編號為1號、2號)。1號量筒取2 mL受精卵，倒入白瓷盤中統計受精卵的數量，以便計算各介質附著魚卵的平均數。2號量筒取5 mL受精卵均勻布在30 cm×30 cm的紗窗網上，用作統計受精率，并觀察受精卵的孵化和發育情況。在不同發育時段，隨機取出一定量受精卵置于顯微鏡下觀察，當觀察到發育至原腸期的卵子后，取50粒受精卵進行鏡檢，當超過60%的受精卵發育到原腸期后，開始計算受精率(%)。

受精率=原腸期卵數/總卵數×100

(1)

1.3.2 銀白魚魚卵孵化管理

試驗前對提水、增氧、紫外線殺菌、凈水等設施設備進行檢查調試，保證試驗期間設備運行正常。試驗期間水溫保持在11～16 ℃，每天定時觀察受精卵的孵化情況，及時將發白、發霉的魚卵取出并記錄數量，記錄銀白魚受精卵的孵化時間，計算其孵化率(%)。

孵化率=出膜仔魚數/受精卵數×100

(2)

2 試驗結果

2.1 人工繁殖受精率

統計1號量筒中的受精卵數量可知，2 mL約有1 000粒受精卵，平均為500粒/mL。通過分時段觀測30 cm×30 cm紗窗網上布設的5 mL受精卵，達到原腸期的受精卵約有2 270粒。經計算，本次試驗的受精率約為90%。鏡檢觀察，受精卵卵徑為1 973.67～2 787.15 μm，卵黃直徑為1 218.93～1 843.89 μm。

2.2 不同介質受精卵的孵化情況

定期觀測各培育缸中受精卵的孵化情況，直到全部孵化，統計出膜仔魚數量，記錄出膜時間，計算孵化率和孵化時長(見表1)。結果表明，4種介質試驗組的孵化率由高到低依次為：棕片組、紗窗網組、礫石組、瓦片組。棕片組孵化率最高，為80%，比紗窗網組高10%左右，比最低的瓦片組高了50%以上，且孵化時長也相較其他介質要短。

表1 不同受精卵附著介質孵化情況

3 討論

3.1 銀白魚受精卵的孵化時長

與同屬的其他種類相比，銀白魚孵化過程較長[4-6]，在水溫11～16 ℃條件下，仔魚出膜時長為282～300 h。究其原因，一方面可能是受到銀白魚產卵季節氣候條件的限制，此時水溫較低；另一方面可能是由銀白魚自身的生物特性決定的。此外，采用不同附著介質受精卵的孵化時間也有差異。試驗顯示，棕片組和紗窗網組仔魚的出膜時長相對于礫石組和瓦片組要短。結合銀白魚自然產卵場的產卵環境及條件分析，可能是棕片和紗窗網材質柔韌度較高，在培育缸中可隨著水流擺動，對受精卵產生較強的流水刺激，從而能加快受精卵的發育。此外，有研究發現，魚卵孵化所需的氧氣主要是通過擴散得到的[7]，礫石和瓦片上的受精卵受流水擾動較弱，溶解氧擴散不充分，因而會導致發育較慢。

3.2 不同產卵介質條件下的孵化率比較分析

本試驗結果顯示，銀白魚卵在4種介質上均能很好地附著，但其孵化率有較大差異。孵化率由高到低的順序為棕片、紗窗網、礫石、瓦片，這很可能是由于介質材質不同造成的。棕片經過撕拉后，具有張力強、立體性好、摩擦力大的特點，使得受精卵黏附程度高，在水下具有良好的透水性，能使受精卵在流水中擺動，接觸更多的清潔水，溶解氧更充足。此外，柔韌的棕絲及其松散的結構使人工剔除病變受精卵更加方便，有效地避免了交叉感染水霉的危險，故孵化率較其他3種介質高。紗窗網具有均勻統一的網狀結構，材質細軟，但容易受水的張力和流水沖擊的影響，且網片容易粘在一起導致通透性變差。此外，如果受精卵感染水霉后較難將之從網片上剔除，因此孵化率低于棕片。與瓦片相比，礫石表面更為粗糙，且紋理不規則，能提供比瓦片更多的水體接觸面積，但因二者與受精卵表面接觸面積過大，受精卵布設在礫石及瓦片上時分布都不均勻，容易附著成團，透水、透氣性很低。礫石、瓦片的物理輪廓還會影響水流方向，產生水流沖擊死角，水體溶解氧分布不均勻，導致受精卵水霉病發生的概率增加，從而降低孵化率。綜合分析比較，棕片透水、透氣性好，具有立體結構，采購成本低，便于運輸及操作，適用于銀白魚規模化人工繁殖。

3.3 人工繁殖的必要性

經過多年的實地調查，銀白魚產卵場受滇池湖岸環境變化影響較大，目前僅分布于滇池西部一小塊狹長的區域。雖然目前偶爾還可在滇池中捕獲銀白魚個體，但是數量極其有限。由于在自然界中銀白魚產卵季節水溫偏低，受精卵孵化時間較長，以及滇池水質污染、外來魚類擠占其生存空間等因素，導致銀白魚在自然環境條件下繁殖越來越困難，成功孵化并成活的數量非常少，很難通過自然繁殖來擴大種群數量。采用人工繁殖技術可以調控繁育環境條件，快速擴大銀白魚的種群數量，為增殖放流恢復銀白魚種群數量提供基礎，是促進滇池魚類生物多樣性及水生態系統穩定的有效途徑。