膿毒癥患者血清NAMPT、SIRT1 表達與急性肺損傷的相關性研究

徐盼盼 鄭 誠 張楚明 王昌明 張細江

膿毒癥是嚴重感染、創傷、休克、大手術后常見并發癥及死亡原因之一，是人體對感染反應失調導致的多器官功能障礙，其中肺是最易發生感染的器官[1-3]。急性肺損傷是膿毒癥主要并發癥之一，救治困難，病死率高[4-5]。目前，臨床缺乏早期診斷膿毒癥急性肺損傷的有效指標，常用的微生物學檢測耗時較長且陽性率低。煙酰胺磷酸核糖轉移酶（NAMPT）是哺乳動物細胞尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸補救合成途徑的限速酶，是一種多功能分子，具有促炎作用[6-7]。研究發現，NAMPT 表達水平與呼吸機相關性肺炎患者預后關系密切[8]。沉默信息調節因子1（SIRT1）是第3 類組蛋白去乙酰化酶Sirtuin 家族成員之一，主要通過翻譯后修飾調節肺部免疫炎癥系統及老化進程，從而參與各種肺部疾病的發生發展。白華等[9]研究發現，血清SIRT1 表達水平與慢性阻塞性肺疾病急性加重期病情嚴重程度及患者的死亡風險有關。目前有關血清NAMPT、SIRT1 在膿毒癥急性肺損傷患者中的研究鮮有報道，因此本研究探討膿毒癥患者血清NAMPT、SIRT1 表達水平，并分析二者與急性肺損傷關系，為臨床探尋簡單易測、可靠的生物學指標以評估膿毒癥急性肺損傷病情，提高診斷準確性提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017 年3 月至2021 年2 月浙江省臺州市立醫院收治的膿毒癥患者238 例為研究對象，男127 例，女111 例，年齡40～84（62.83±10.58）歲。根據患者是否并發急性肺損傷，將患者分為無急性肺損傷組120 例（膿毒癥未并發急性肺損傷患者）和急性肺損傷組118 例（膿毒癥并發急性肺損傷患者）。本研究獲得醫院倫理委員會批準后實施，批準編號：LS2017-07 號。所有患者或其家屬均簽署知情同意書。

1.2納入及排除標準 納入標準：（1）所有患者均符合膿毒癥診斷標準[10]；（2）急性肺損傷患者符合《急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合征診斷和治療指南（2006）》中的相關診斷標準[11]，（3）臨床資料完整者。排除標準：（1）嚴重肝腎功能不全或衰竭者；（2）近期使用免疫抑制劑治療的患者；（3）不愿意參加或不配合的患者。

1.3主要試劑與儀器 NAMPT、SIRT1 酶聯免疫吸附（ELISA）檢測試劑盒（上海恒斐生物科技有限公司，批號SEA480H、SEA509H）；肺功能測定儀（上海涵飛醫療器械有限公司，型號：S-980A Ⅲ）；全自動血氣分析儀（美國Nova Biomedical 公司，型號：GEM4008）。

1.4方 法

1.4.1臨床資料收集 收集患者臨床資料，包括性別、年齡、感染部位、氣管插管機械通氣、氧療、白細胞計數（WBC）、C 反應蛋白（CRP）、降鈣素原（PCT）。

1.4.2肺損傷評分 參照Murray 肺損傷評分標準[12]：0 分，即無肺損傷；＞0～2.5 分，即輕、中度肺損傷，＞2.5分，即重度肺損傷。

1.4.3急性生理學與慢性健康狀況評分系統Ⅱ（APACHEⅡ）評分 患者入院24h 內進行APACHEⅡ評分[13]以評價病情嚴重程度，包含：年齡、急性生理學、慢性健康狀況評分三個部分，取總分，最高71分，得分越高對應病情越嚴重。

1.4.4肺功能及血氣指標檢測 患者入院24h 內采用肺功能測定儀檢測患者肺功能指標：第1 秒用力呼氣容積占預計值百分比（FEV1%）、第1 秒用力呼氣容積占用力肺活量百分比（FEV1/FVC）、計算呼吸指數（RI）、氧合指數（OI）。采用血氣分析儀進行持續性動脈血氧分壓（PaO2）、動脈血二氧化碳分壓（PaCO2）檢測，直到血氣分析儀器數據顯示穩定后，收集PaCO2、PaO2。

1.4.5血清NAMPT、SIRT1 水平檢測 收集患者在入院后24h 內清晨空腹靜脈血5mL，靜置30min，室溫條件下以4000r/min 離心10min，取上清液，采用ELISA 法測定患者血清NAMPT、SIRT1 水平，所有操作均嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.5統計學方法 應用SPSS 25.0 統計軟件對數據進行分析，符合正態分布的計量資料以均數±標準差（）表示，兩組間比較采用獨立樣本t 檢驗；計數資料用例數表示，采用χ2檢驗；采用Pearson 法分析血清NAMPT、SIRT1 水平與APACHEⅡ評分、RI、OI、PaCO2、PaO2的相關性；采用二元logistic 回歸分析膿毒癥患者發生急性肺損傷的影響因素；利用受試者工作特征（ROC）曲線評估血清NAMPT、SIRT1 對膿毒癥患者發生急性肺損傷的診斷效能，以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1臨床資料比較 無急性肺損傷組和急性肺損傷組患者性別、年齡、感染部位、氣管插管機械通氣、氧療、PCT、WBC、CRP、FEV1%、FEV1/FVC 比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；與無急性肺損傷組比較，急性肺損傷組患者APACHEⅡ評分、PaCO2、RI 水平較高（P＜0.05），PaO2、OI 水平較低（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組膿毒癥患者臨床資料比較

2.2血清NAMPT、SIRT1 水平比較 與無急性肺損傷組比較，急性肺損傷組患者血清NAMPT 水平顯著升高（P＜0.05），SIRT1 水平顯著降低（P＜0.05）。見表2。2.3 血清NAMPT、SIRT1 水平與APACHEⅡ評分、RI、OI、PaCO2、PaO2的相關性分析 Pearson 法分析顯示，膿毒癥患者血清NAMPT 水平與APACHEⅡ評分、RI、PaCO2水平均呈正相關（P＜0.05），與OI、PaO2呈負相關（P＜0.05）；血清SIRT1 水平與APACHEⅡ評分、RI、PaCO2水平均呈負相關（P＜0.05），與OI、PaO2呈正相關（P＜0.05）。見表3。

表2 兩組膿毒癥患者血清NAMPT、SIRT1 水平比較（ng/mL，）

表2 兩組膿毒癥患者血清NAMPT、SIRT1 水平比較（ng/mL，）

注：NAMPT 為煙酰胺磷酸核糖轉移酶；SIRT1 為沉默信息調節因子1

表3 膿毒癥患者血清NAMPT、SIRT1 水平與APACHEⅡ評分、RI、OI、PaCO2、PaO2 的相關性

2.4二元logistic 回歸分析膿毒癥患者發生急性肺損傷的影響因素 以膿毒癥患者是否發生急性肺損傷為因變量，以APACHEⅡ評分、PaO2、PaCO2、OI、RI、NAMPT、SIRT1 為自變量，進行二元logistic 回歸分析。結果顯示，血清NAMPT、SIRT1、APACHEⅡ評分是膿毒癥患者發生急性肺損傷的獨立危險因素（P＜0.05）。見表4。

表4 膿毒癥患者發生急性肺損傷的影響因素分析

2.5血清NAMPT、SIRT1 對膿毒癥患者發生急性肺損傷診斷價值分析 血清NAMPT 對膿毒癥患者發生急性肺損傷診斷的曲線下面積（AUC）為0.771（95%CI：0.710～0.831），截斷值為32.77ng/mL，靈敏度、特異度分別為77.20%、64.90%；血清SIRT1 對膿毒癥患者發生急性肺損傷診斷的AUC 為0.835（95%CI：0.779～0.890），截斷值為6.82ng/mL，靈敏度、特異度分別為78.50%、68.30%；二者聯合檢測對膿毒癥患者發生急性肺損傷診斷的AUC 為0.908（95%CI：0.869～0.947），靈敏度、特異度分別為89.80%、62.70%。見圖1。

圖1 血清NAMPT、SIRT1 診斷膿毒癥患者發生急性肺損傷的ROC 曲線

3 討論

膿毒癥作為一種全身炎癥反應綜合征，由感染引起，是ICU 常見危重癥，極易引發多功能器官衰竭，其中急性肺損傷是其常見并發癥之一，若不及早診斷、及時治療，其病死率可高達80%左右[14]。因此，早期診斷膿毒癥急性肺損傷并及時采取相應措施進行干預，對降低其死亡風險、改善預后有較大意義。

NAMPT 是一種多功能蛋白質，又稱為前B 細胞克隆增強因子或內臟脂肪素，是哺乳動物尼克酰胺腺嘌呤合成通路的限速酶，在機體多種組織及器官（如肝臟、骨髓、肺等）均廣泛表達，且可作為炎癥因子參與急、慢性炎癥性疾病的發生與發展[15-17]。Chen等[18]研究發現，NAMPT 高表達與新生兒敗血癥發生有關，微小RNA-96-5p 可通過靶向NAMPT 和抑制新生兒敗血癥中的核因子-κB（NF-κB）通路減輕炎癥反應。本研究結果顯示，與無急性肺損傷組比較，急性肺損傷組患者血清NAMPT 水平顯著升高，提示血清NAMPT 水平異常高表達與膿毒癥急性肺損傷發生發展有關。

SIRT1 編碼基因位于染色體10q22.1，包含9 個外顯子、8 個內含子，具有煙堿腺嘌呤二核苷酸依賴性的蛋白脫乙酰化酶活性，廣泛表達于成熟組織（如早期胚胎），通過對相關因子去乙酰化增加細胞能量供應、減少細胞凋亡、減輕炎癥反應、抵抗氧化應激、改善血管內皮細胞功能等[19-20]。Fu 等人[21]研究發現，SIRT1 可通過降低內皮緊密連接通透性改善脂多糖誘導的小鼠肺損傷。本研究結果顯示，與無急性肺損傷組比較，急性肺損傷組患者血清SIRT1 水平顯著降低，提示血清SIRT1 水平異常低表達與膿毒癥急性肺損傷發生發展有關。

APACHEⅡ評分是根據患者年齡、既往健康狀況對生命體征進行的評分，操作簡單，能夠反映疾病嚴重程度[22]。本研究Pearson 分析顯示，血清NAMPT水平與APACHEⅡ評分、RI、PaCO2水平均呈正相關，與OI、PaO2呈負相關。而血清SIRT1 水平與APACHEⅡ評分、RI、PaCO2水平均呈負相關，與OI、PaO2呈正相關。提示血清NAMPT、SIRT1 異常表達與膿毒癥急性肺損傷患者病情嚴重程度、呼吸功能下降有關。進一步研究發現，血清NAMPT、SIRT1、APACHEⅡ評分是膿毒癥患者發生急性肺損傷的獨立危險因素。再次提示血清NAMPT、SIRT1 異常表達與膿毒癥急性肺損傷發生發展及病情嚴重程度關系密切。目前臨床尋求簡單易測、可靠的生物學指標以早期診斷膿毒癥急性肺損傷，并采取積極措施進行干預對改善患者預后有較大意義。本研究ROC 曲線分析結果顯示，血清NAMPT、SIRT1 對膿毒癥患者發生急性肺損傷診斷的AUC 分別為0.771、0.835，靈敏度分別為77.20%、78.50%，特異度分別為64.90%、68.30%。二者聯合檢測對膿毒癥患者發生急性肺損傷診斷的AUC 為0.908，靈敏度、特異度分別為89.80%、62.70%。提示二者聯合診斷對膿毒癥急性肺損傷具有較高診斷價值。

綜上所述，膿毒癥急性肺損傷患者血清NAMPT異常高表達、SIRT1 異常低表達，且是膿毒癥患者發生急性肺損傷的獨立危險因素，二者聯合檢測對膿毒癥患者發生急性肺損傷有較高診斷價值，可為膿毒癥患者臨床評估急性肺損傷提供一定參考。但本研究納入樣本量較少，后期應加大樣本量對血清NAMPT、SIRT1 在膿毒癥急性肺損傷相關機制進行深入研究。