28%三環唑·嘧菌酯懸浮劑的高效液相色譜分析

孫鈺潔，顏 明

(江蘇省農產品質量檢驗測試中心，江蘇南京 210036)

三環唑是美國陶氏益農公司開發生產的一種三唑類殺菌劑，有高效、低毒、內吸性強等特點，廣泛應用于水稻稻瘟病的防治。它的作用機制是抑制病原菌菌絲和附著胞黑色素的生物合成，阻止病原菌侵入和減少孢子的產生。嘧菌酯是甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，具有高效、廣譜、殺菌活性高等特點，幾乎對所有真菌病害有效[1]。它能夠有效地防治白粉病、霜霉病、稻瘟病等，被廣泛用于谷物、果蔬等作物的病害防治與儲藏保鮮[2]。三環唑和嘧菌酯復配產品常用于水稻稻瘟病的防控，且效果顯著[3]。

目前三環唑和嘧菌酯的檢測方法有液相色譜法[4-7]、氣相色譜法[8,9]，同時檢測這 2個組份的方法國內文獻未見報道。本文開發了一種高效液相色譜法同時檢測三環唑和嘧菌酯混劑產品中有效成分含量的方法，以期為該類產品生產和質量控制提供技術保障。

1 試驗部分

1.1 試劑和溶液

甲醇，色譜純(德國默克公司)；超純水(Millipore超純水制備系統自制)；三環唑標準品和嘧菌酯標準品(質量百分數含量都為 98.9%，上海市農藥研究所)；28%三環唑·嘧菌酯懸浮劑(江蘇省揚州市蘇靈農藥化工有限公司)。

1.2 儀器

1100型高效液相色譜儀配G1315B二極管陣列檢測器和色譜工作站(美國安捷倫科技公司)；Zorbax SB-C18色譜柱(150 mm×4.6 mm，5μm)；Millipore超純水制備系統(Millipore公司)；KQ-50B超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司) 。

1.3 色譜操作條件

流動相：甲醇和水；流速：1.0 mL/min，梯度洗脫過程：0 ～10.0 min，甲醇體積比從40%增加到85%，10.1 ～15.0 min，甲醇體積比從85%降到40%。

柱溫：30 ℃；檢測波長：250 nm；進樣體積：5 μL；保留時間：三環唑約5.671 min，嘧菌酯約9.478 min(圖1)。

圖1 28%三環唑·嘧菌酯懸浮劑的高效液相色譜圖

1.4 樣品溶液的配制

標樣溶液：準確稱取三環唑標準品0.05 g (精確至0.000 1 g)和嘧菌酯標準品0.02 g (精確至0.000 1 g)，置于同一50 mL容量瓶，加入20 mL甲醇，置于超聲波清洗器中超聲溶解，冷卻至室溫后用甲醇稀釋至刻度，搖勻備用。

試樣溶液：稱取28%三環唑·嘧菌酯懸浮劑試樣0.25 g (精確至0.000 1 g)到50 mL容量瓶，加入20 mL甲醇，置于超聲波清洗器中超聲溶解，冷卻至室溫后用甲醇稀釋至刻度，搖勻，以0.45 μm濾膜過濾備用。

進樣測定：在上述操作條件下，待儀器基線穩定后，連續注入數針標樣溶液，直至相鄰2針的峰面積變化小于1.5%后，再按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進樣分析。

1.5 計算

將測得的2針試樣溶液及試樣前后2針標樣溶液的峰面積分別進行平均，按下式計算三環唑和嘧菌酯的質量分數(X)。

式中：A1為標樣溶液中三環唑(或嘧菌酯)峰面積平均值；A2為試樣溶液中三環唑(或嘧菌酯)峰面積平均值；m1為三環唑(或嘧菌酯)標樣的質量，g；m2為試樣的質量，g；P為標樣中三環唑(或嘧菌酯)質量分數，%。

2 結果分析

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 檢測波長的選擇

通過Agilent 1100高效液相色譜儀的二極管陣列檢測器進行紫外光譜掃描，得到三環唑和嘧菌酯的紫外吸收光譜圖(圖2和圖3)。由圖2和圖3可見，嘧菌酯在250 nm左右有一個較平穩段吸收峰，三環唑在220 nm和280 nm左右有吸收峰，再根據化合物對紫外波長反應靈敏度的大小比較，本方法選擇250 nm為檢測波長。

圖2 三環唑紫外吸收光譜圖

圖3 嘧菌酯紫外吸收光譜圖

2.1.2 流動相的選擇

比較了甲醇、乙腈和水為流動相分離三環唑和嘧菌酯的效果，結果發現以甲醇和乙腈為流動相，其分離效果無明顯差異，但考慮到乙腈相對價格高和實際生產中成本控制需要，選擇更經濟的甲醇和水做流動相。三環唑和嘧菌酯極性相差較大，用一定比例的甲醇和水作流動相，2組分出峰時間相差很大。因此采用梯度洗脫方法，10 min內流動相甲醇比例從40%升高到85%，三環唑在5.6 min左右出峰，嘧菌酯在9.5 min左右出峰，2組分能很好地分離，節約了分析時間，獲得滿意結果。從10 min到15 min流動相甲醇比例從85%降到40%平衡柱子，以便下一針分析。

圖4 三環唑標準溶液高效液相色譜圖

圖5 嘧菌酯標準溶液高效液相色譜圖

圖6 三環唑、嘧菌酯混合標準溶液高效液相色譜圖

2.2 方法線性關系的測定

稱取三環唑標樣0.02、0.04、0.06、0.08、0.10 g和嘧菌酯標樣 0.01、0.02、0.04、0.06、0.08 g (精確至0.000 1 g)分別置于50 mL容量瓶，用甲醇溶劑定容到刻度，搖勻。按上述操作條件進行測定。三環唑為0.000 40～0.002 00 g/mL、嘧菌酯為0.000 22～0.001 60 g/mL時有良好線性關系，以三環唑或嘧菌酯的濃度為橫坐標，相應的峰面積為縱坐標作圖，得到三環唑線性方程為y=3 626 064.690 2x-17.415 8，R2為0.999 5；嘧菌酯線性方程為y=6 142 686.771 2x-103.599 6，R2為0.999 6 (圖7)。可見，在該方法條件下，三環唑或嘧菌酯濃度與其響應值之間表現出良好的線性關系。

圖7 三環唑、嘧菌酯標準溶液濃度與其響應值線性關系圖

2.3 方法精密度測定

稱取同一批次28%三環唑·嘧菌酯懸浮劑6個樣品，用1.4節方法處理樣品，在1.3節色譜操作條件下進行分析，結果見表1。可見，三環唑和嘧菌酯的標準偏差分別為0.065 9和0.056 2，變異系數分別為0.33%和0.69%，說明該方法精密度高，重現性很好。

表1 方法的精密度試驗

2.4 方法準確度測定

稱取同一批次已知含量的 28%三環唑·嘧菌酯懸浮劑(三環唑含量 20.13%，嘧菌酯含量 8.11%)樣品5份，并在樣品中添加一定數量標準品。在上述操作條件下進行測定，結果見表2。可見，三環唑的加標回收率為98.29%～101.16%，平均加標回收率為 100.29%；嘧菌酯的加標回收率為 98.37%～101.23%，平均加標回收率為 99.77%，說明該方法回收率好，準確度高。

表2 方法的準確度試驗

續表2

3 結 論

本文采用高效液相色譜儀建立了同時測定 28%三環唑·嘧菌酯懸浮劑產品中2種有效成分的方法。該方法具有精密度好、準確度高、分離效果好、操作簡便、經濟環保等特點，是28%三環唑·嘧菌酯懸浮劑產品質量控制、檢驗的理想分析方法，同時也為同類農藥品種不同劑型產品的檢測提供技術參考。