Sestrin1、2在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達(dá)及臨床意義

梁 源 劉 鈞

川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，四川省南充市 637100

子宮內(nèi)膜癌(Endometrial cancer, EC)又稱宮體癌，發(fā)生于子宮內(nèi)膜上皮，是婦科常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，僅次于宮頸癌。子宮內(nèi)膜癌中最常見(jiàn)的組織學(xué)類型是子宮內(nèi)膜樣腺癌(Endometrioid adenocarcinoma，EA) 。全球每年約有38萬(wàn)子宮內(nèi)膜癌新發(fā)病例，且每年約有89 000例患者死于該病[1]。早期子宮內(nèi)膜癌患者手術(shù)治療預(yù)后良好，5年生存率可高達(dá)91% ，但仍有15%～20% 的患者復(fù)發(fā)；晚期患者預(yù)后較差，其中發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者5年生存率低于50%，發(fā)生腹膜或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者5年生存率低于20%[2]。目前對(duì)于子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制仍存在很多爭(zhēng)議，因此進(jìn)一步探討子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的分子機(jī)制以求對(duì)子宮內(nèi)膜癌的治療、預(yù)后及延長(zhǎng)生存期提供新的思路。Sestrins已被鑒定為一個(gè)高度保守的應(yīng)力誘導(dǎo)蛋白家族，當(dāng)細(xì)胞在氧化應(yīng)激或DNA損傷等環(huán)境刺激下，此類蛋白能夠發(fā)揮保護(hù)細(xì)胞的作用，并參與腫瘤的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移以及化學(xué)藥物耐藥等生物學(xué)行為，與腫瘤發(fā)生發(fā)展具有密切關(guān)系。早期研究發(fā)現(xiàn)，Sestrin1、2的表達(dá)受抑癌基因p53的調(diào)節(jié)；隨著研究的進(jìn)展，調(diào)控Sestrins表達(dá)的其他因子包括核呼吸因子(NRF2)，JNK/c-Jun信號(hào)通路和低氧誘導(dǎo)因子-1(HIF-1)信號(hào)也被相繼發(fā)現(xiàn)；此外，內(nèi)外環(huán)境應(yīng)激能反饋使Sestrins表達(dá)上調(diào)。Sestrins的下游調(diào)控通路包括amp活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶點(diǎn)(mTOR)信號(hào)、Nrf2信號(hào)和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β (TGF-β)信號(hào)等[3-4]，本文主要在于探討子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中Sestrin1、2的表達(dá)與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，以對(duì)Sestrin1、2在子宮內(nèi)膜樣腺癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用作一初步探討。

1 資料與方法

1.1 病例資料 收集2011年1月—2016 年12月期間我院經(jīng)病理確診為EA的101例石蠟蠟塊及患者臨床資料，同時(shí)收集增殖期子宮內(nèi)膜(Proliferative phase of endometrium，PE)30例、子宮內(nèi)膜增生不伴非典型性(Endomertrial hyperplasia without atypia,EH)40例及子宮內(nèi)膜增生伴非典型性(Atypical endometrial hyperplasia,AEH)40例的石蠟蠟塊作為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)病理明確為子宮內(nèi)膜樣腺癌標(biāo)本; (2) 子宮內(nèi)膜樣腺癌病例均為原發(fā)，術(shù)前均未經(jīng)放化療或激素治療;(3)增殖期子宮內(nèi)膜組織來(lái)源于因子宮肌瘤切除子宮的患者。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并其他部位惡性腫瘤;(2)正在參與其他研究；(3)患有與預(yù)后相關(guān)的慢性疾病史；(4)患者臨床資料不完整。子宮內(nèi)膜樣腺癌患者共101例，年齡35～79歲，中位年齡55歲，其中≤55歲52例，>55歲49例;根據(jù)2014版世界衛(wèi)生組織 (WHO) 分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，組織學(xué)分級(jí)1級(jí)69例，2級(jí)23例，3級(jí)9例; 國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(International federation of gynecology and obstetrics，F(xiàn)IGO)分期Ⅰ期87例，Ⅱ期10例，Ⅲ期4例; 浸潤(rùn)深度≤1/2 肌層88例，>1/2肌層13例; 有69例進(jìn)行淋巴結(jié)清掃手術(shù)，術(shù)后證實(shí)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者3例。所有標(biāo)本均為10%中性福爾馬林固定。

1.2 方法 所有蠟塊均切4μm厚切片4張，采用SP法分別進(jìn)行Sestrin1(美國(guó)Santa Cruz Biotechnology)、Sestrin2(美國(guó) Proteintech Group)、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照的染色。以試劑盒提供的陽(yáng)性標(biāo)本作為陽(yáng)性對(duì)照，以 PBS 替代Sestrin1、2作為陰性對(duì)照。免疫組化判讀標(biāo)準(zhǔn):Sestrin1及Sestrin2的表達(dá)均主要位于細(xì)胞質(zhì)，部分于細(xì)胞核著色，呈棕褐色或棕黃色顆粒。依據(jù)染色強(qiáng)度(0分:不著色，1分:黃色，2分:棕黃色，3分:黃褐色)及陽(yáng)性細(xì)胞比例(0分:無(wú)細(xì)胞染色，1分:<25%，2分:26%～50%，3分:51%～75%，4分:>76%)評(píng)分。將上述兩項(xiàng)評(píng)分相乘，≥2分記為陽(yáng)性，<2分記為陰性[5]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS26.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料數(shù)據(jù)以[n(%)]表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn); 采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，組間比較采用Log-rank檢驗(yàn)。以P≤0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Sestrin1、2在不同子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)情況 Sestrin1、2蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核，陽(yáng)性顆粒為棕褐色或棕黃色。見(jiàn)表1。

表1 Sestrin1、2在不同子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)情況[n(%)]

2.2 Sestrin1、2在子宮內(nèi)膜樣腺癌中表達(dá)的相關(guān)性 子宮內(nèi)膜樣腺癌中Sestrin1、2的陽(yáng)性表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(r=15.132，P=0.000)。見(jiàn)表 2。

表2 Sestrin1、Sestrin2在子宮內(nèi)膜樣腺癌中表達(dá)的相關(guān)性(n)

2.3 Sestrin1、2在子宮內(nèi)膜樣腺癌中表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系 Sestrin1在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達(dá)與年齡、組織學(xué)分級(jí)有關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表3。Sestrin2在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、浸潤(rùn)深度有關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表3 Sestrin1的表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系[n(%)]

表4 Sestrin2的表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系

2.4 Sestrin1、2的表達(dá)與患者生存率的關(guān)系 根據(jù)患者入院登記的聯(lián)系方式對(duì)子宮內(nèi)膜樣腺癌患者進(jìn)行術(shù)后隨訪，由于各方面原因，隨訪到完整信息病例僅有62例。生存統(tǒng)計(jì)時(shí)限由手術(shù)之日至60個(gè)月或至患者死亡月份，計(jì)算單位為月。62例患者總生存率91.94%，其中Sestrin1陽(yáng)性患者生存率100.00%，陰性患者生存率87.18%。Kaplan-Meier生存分析顯示，Sestrin1的表達(dá)情況與子宮內(nèi)膜癌患者的生存率無(wú)相關(guān)性(P>0.05)，見(jiàn)圖1；Sestrin2陽(yáng)性患者生存率100.00%，陰性患者生存率86.11%。Kaplan-Meier 生存分析顯示，Sestrin2的表達(dá)情況與子宮內(nèi)膜癌患者的生存率具有相關(guān)性(P=0.05)，見(jiàn)圖2。

圖1 Sestrin1 陽(yáng)性與陰性患者的總生存曲線

圖2 Sestrin2陽(yáng)性與陰性患者的總生存曲線

3 討論

Sestrin1、2可通過(guò)多途徑促進(jìn)自噬，并緩解 ROS聚集、各種內(nèi)外環(huán)境應(yīng)激及腫瘤發(fā)生等病理過(guò)程，mTOR是自噬最重要的調(diào)控因子之一。研究表明，mTOR在大多惡性腫瘤中的活性水平明顯升高，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖[3-4]，并促進(jìn)癌細(xì)胞的遷移和上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT) 標(biāo)志物的表達(dá)[6]。

Sestrin1大部分生物學(xué)功能仍不清楚，國(guó)內(nèi)外對(duì)Sestrin1與癌癥相關(guān)的研究甚少， Elisa Oricchio等[7]研究發(fā)現(xiàn)Sestrin1基因是淋巴瘤的腫瘤抑制因子，是Chr. 6q頻繁缺失的生物學(xué)相關(guān)靶點(diǎn)；染色體的丟失及Sestrin1基因的表觀遺傳學(xué)沉默，會(huì)導(dǎo)致淋巴瘤中mTORC1激活，而持續(xù)活躍的mTORC1最終導(dǎo)致不良預(yù)后。Norihiko Narita等[8]的研究發(fā)現(xiàn)Sestrin1是一個(gè)治療頭頸部鱗癌新的分子靶點(diǎn)，抑制Sestrin1能增加癌細(xì)胞中ROS的產(chǎn)生，降低順鉑耐藥和熱療耐藥。以上研究表明，Sestrin1與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展以及藥物耐藥存在密切的聯(lián)系。本研究發(fā)現(xiàn)，Sestrin1在子宮內(nèi)膜樣腺癌、子宮內(nèi)膜增生伴非典型性、子宮內(nèi)膜增生不伴非典型性及增殖期子宮內(nèi)膜中存在由低到高的差異性表達(dá)。在Sestrin1與臨床病理特征相關(guān)性分析時(shí)發(fā)現(xiàn)Sestrin1與年齡、組織學(xué)分級(jí)存在相關(guān)性(P<0.05)，而與浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及FIGO 分期的關(guān)系不顯著(P>0.05)；在生存分析中，Sestrin1與患者生存時(shí)間的關(guān)系不顯著(P>0.05)，但死亡病例的Sestrin1表達(dá)均為陰性，Sestrin1與生存時(shí)間的關(guān)系需要擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步明確。以上結(jié)論提示Sestrin1促進(jìn)了子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)生發(fā)展，其低表達(dá)的子宮內(nèi)膜樣腺癌患者預(yù)后更差。

近年來(lái)對(duì)Sestrin2的研究最廣泛，其在許多腫瘤中均存在異常表達(dá)，與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著顯著的相關(guān)性。Sestrin2在肝細(xì)胞癌[9]、直腸癌[10]、膀胱癌[11]及肺癌[12]等癌組織中和相對(duì)應(yīng)正常組織中均存在差異性表達(dá)，其低表達(dá)與腫瘤晚期、癌細(xì)胞高活性及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，生存期明顯縮短。藥物研究中，Sestrin2可能通過(guò)調(diào)節(jié)AMPK/mTOR信號(hào)通路依賴的細(xì)胞自噬參與肝癌的索拉非尼原發(fā)性耐藥，是一種克服索拉非尼耐藥的靶點(diǎn)[13]；槲皮素能增加結(jié)直腸癌細(xì)胞株內(nèi)ROS的產(chǎn)生，后者可直接刺激Sestrin 2轉(zhuǎn)錄，而Sestrin2蛋白表達(dá)上調(diào)則抑制細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)凋亡[14]。這些研究結(jié)果表明，Sestrin2在抑制惡性腫瘤增殖、促進(jìn)自噬及臨床治療過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。本研究結(jié)果顯示，Sestrin2在子宮內(nèi)膜樣腺癌、子宮內(nèi)膜增生伴非典型性、子宮內(nèi)膜增生不伴非典型性及增殖期子宮內(nèi)膜中存在由低到高的差異性表達(dá)；在臨床病理特征相關(guān)性分析中發(fā)現(xiàn)Sestrin2與組織學(xué)分級(jí)、浸潤(rùn)深度存在相關(guān)性(P<0.05)，而與年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及FIGO 分期的關(guān)系不顯著(P>0.05)，在生存分析結(jié)果中，Sestrin2與患者生存時(shí)間存在相關(guān)性(P=0.05)，陰性患者生存率明顯低于陽(yáng)性患者；這些結(jié)果與以上研究結(jié)論基本一致，說(shuō)明Sestrin2可能在子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)展中扮演著重要的角色，并可能與子宮內(nèi)膜樣腺癌患者的治療及預(yù)后相關(guān)。但Shin等[15]卻發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株中Sestrin2 mRNA和蛋白水平上調(diào)，他們分析可能與腫瘤微環(huán)境如ROS、缺氧、炎癥和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反饋刺激Sestrin2轉(zhuǎn)錄有關(guān)，并明顯抑制mTORC1活性及子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖和遷移；此外還發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生及不良預(yù)后與mTORC1通路過(guò)度激活抑制的自噬密切相關(guān)。

在本研究結(jié)果顯示，Sestrin1、2在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達(dá)具有顯著相關(guān)性(P=0.000)，均明顯低于不伴非典型性的子宮內(nèi)膜增生(P<0.05)，且死亡病例均來(lái)自雙陰性患者?？赡芘cWang等提出的Sestrin亞型在同一疾病中可能存在動(dòng)態(tài)表達(dá)和補(bǔ)償功能[16]相關(guān)。

綜上所述，檢測(cè)Sestrin1、2的表達(dá)對(duì)判斷子宮內(nèi)膜樣腺癌惡性程度、預(yù)后以及對(duì)子宮內(nèi)膜樣腺癌患者的病理診斷、臨床治療具有重要意義。