南海區(qū)第五人民醫(yī)院2014-2019年839株流感嗜血桿菌耐藥模式及流行特點研究

孔燕南 林錦喜 王孔專 陳影芳 奚克勤

528231南海區(qū)第五人民醫(yī)院檢驗科1，廣東佛山

528231南海區(qū)第五人民醫(yī)院腎內科2，廣東佛山

流感嗜血桿菌(HI)是常見的一類定植菌，主要存在于人體的口咽部、鼻咽部，是兒童社區(qū)獲得性感染的主要病原菌，主要的感染群體為兒童，可以通過原發(fā)和繼發(fā)感染。流感嗜血桿菌可以造成兒童肺炎、上呼吸道感染，進而引起敗血癥、腦膜炎，嚴重威脅兒童的健康。治療主要以抗菌藥物治療為主，但是由于抗菌藥物的廣泛應用，導致流感嗜血桿菌的耐藥性不斷上升，同時對于不同抗菌藥物的耐藥模式也發(fā)生了較大的改變[1]。本研究旨在了解南海區(qū)第五人民醫(yī)院HI 感染及菌株耐藥現(xiàn)況，為臨床治療提供依據(jù)，并了解其分子流行病學特征，對建立本地區(qū)流感嗜血桿菌的流行病學資料、推廣疫苗接種，建立流感嗜血桿菌防治的長效機制，形成以預防為主，防治結合的大健康診療模式具有重要意義[2]。本文通過對南海區(qū)第五人民醫(yī)院檢測出的839 株流感嗜血桿菌進行耐藥模式和流行病學特點的研究，為臨床診療和院內感染防治提供依據(jù)，現(xiàn)報告如下。

資料與方法

選取2014年1月-2019年12月南海區(qū)第五人民醫(yī)院檢驗科檢出的流感嗜血桿菌的菌株839株，其中來自男性531株；女性308株。患者年齡12天～106歲，其中≤1個月15株；1個月～11歲688株，＞11歲136株。

標本來源：全部839 株流感嗜血桿菌標本中有834株來自于呼吸道標本，占樣本總量的99.40%；來自分泌物培養(yǎng)的標本5株，占樣本總量的0.60%。

納入標準：①患者有明顯的呼吸道感染癥狀，臨床診斷支氣管炎、肺炎。②患者簽署相應的知情同意。③經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準，可以開展研究。

排除標準：①合并免疫缺陷、血液系統(tǒng)腫瘤等疾病；②已有明確的細菌、病毒等感染者。

方法：①細菌常規(guī)培養(yǎng)鑒定：采集的咽拭子標本或者痰液標本經(jīng)過處理后接種于血瓊脂平板和不加抗生素的巧克力平板，培養(yǎng)在濃度為5%的CO2環(huán)境中，保持溫度在35℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)時間為48 h，觀察菌落的生長形態(tài)和生長特點。根據(jù)菌落形態(tài)、生長特點及對X 因子、V 因子的需求進行HI 鑒定[3]。②藥敏試驗：采用瓊脂擴散敏感試驗(K-B 法)和法國梅里埃嗜血桿菌和布蘭漢球菌藥敏試劑盒(ATB HAEMO)進行藥敏試驗(微量稀釋法)，分別進行氨芐西林、阿莫西林/克拉維酸、頭孢克洛、頭孢呋辛、頭孢噻肟、四環(huán)素、氯霉素、復方新諾明、利福平、氧氟沙星等10 種藥物的敏感性測定，根據(jù)CLIS 規(guī)定的試驗要求來判定試驗結果，采用菌株為ATCC49247 作為質控菌株[4]。③β-內酰胺酶測定：用頭孢硝噻吩紙片檢測流感嗜血桿菌菌株的β-內酰胺酶產生情況。試紙由淡黃色變成紅色，表示為β-內酰胺酶陽性；不變色，則為陰性，在試驗中設置陰性對照。

觀察指標：比較流感嗜血桿菌在不同季節(jié)的分布情況；統(tǒng)計檢出的流感嗜血桿菌在不同性別及年齡的分布情況；比較流感嗜血桿菌對常用10 種抗生素的敏感及耐藥情況。

統(tǒng)計學方法：數(shù)據(jù)應用SPSS 20.0 統(tǒng)計學軟件分析；計數(shù)資料以[n(%)]表示，采用χ2檢驗；計量資料以(±s)表示，采用t檢驗；P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學意義。

結果

流感嗜血桿菌在不同季節(jié)的分布情況比較：在2014年1月-2019年12月連續(xù)6年，按照月份分布，流感嗜血桿菌3～5月分離菌株數(shù)最多，共410 株(48.87%)。不同月份流感嗜血桿菌分離菌株數(shù)見圖1。按季節(jié)分布，春季(3～5月)最多，共410 株(48.87%)，其次為冬季(12月，1月，2月)和夏季(6～8月)，分別為139 株(16.56%)和187 株(22.29%)，而秋季最少，為103株(12.28%)。

圖1 流感嗜血桿菌月份分布圖

性別及年齡分布比較：檢出的流感嗜血桿菌的菌株839 株，其中來自男性531 株，占63.29%；女性308 株，占36.71%。患者年齡12 天～106 歲，以兒童感染者居多，共703 例，占83.79%，其中≤1 個月15株，占1.79%，1 個月～11 歲688 株，占98.21%，＞11歲136株，占16.21%[5-6]。

流感嗜血桿菌對常用10 種抗生素的敏感及耐藥情況：在所檢測的10 種抗生素中，根據(jù)CLIS 規(guī)定的試驗要求來判定試驗結果，結果利福平、氯霉素和阿莫西林/克拉維酸、四環(huán)素、頭孢噻肟、氧氟沙星、頭孢呋辛的敏感度較高外，其他抗生素有較大程度的耐藥性。氨芐西林、阿莫西林/克拉維酸、頭孢克洛、頭孢呋辛、頭孢噻肟、四環(huán)素、氯霉素、復方新諾明、利福平、氧氟沙星等10種藥物[7]。見表1。

表1 流感嗜血桿菌對常用10種抗生素的敏感率和耐藥情況比較[n(%)]

討論

流感嗜血桿菌寄居于人類上呼吸道黏膜，往往引起呼吸道感染、肺炎，嚴重的還會引起腦膜炎，甚至敗血癥等嚴重疾病，特別是免疫系統(tǒng)未發(fā)育完全的嬰幼兒和免疫力低下的成年人更易感染。除了引起呼吸道本身感染以外，還可能感染骨骼、循環(huán)系統(tǒng)、結膜、腦膜等，引起局部和全身的感染。同時，由于近幾年環(huán)境污染加劇，以及抗菌藥物的濫用，導致流感嗜血桿菌的感染率耐藥率亦逐年上升，給臨床治療帶來難度，嚴重威脅人民群眾的身體健康[8]。

季節(jié)分布顯示，春季(3～4月)是流感嗜血桿菌感染的高發(fā)季節(jié)，其中3月和4月是春季發(fā)病的高峰月份，這與國內其他地區(qū)的研究結果相似，均好發(fā)于春季。但與其他地區(qū)6年來流感嗜血桿菌高發(fā)的月份比較，存在提前或推后的現(xiàn)象，考慮可能是不同地區(qū)和不同年份的氣候變化有一定關系，同時還由于研究的樣本大小不同，對結果也會產生一定影響。同時，歐美一些國家，包括澳大利亞在內的南半球國家的研究顯示，流感嗜血桿菌的發(fā)病高發(fā)季節(jié)均為春季或冬季，與本研究基本一致。

本組HI菌株來源男性患者的比例明顯高于女性，與國內其他地區(qū)和國外的研究結果類似，但是目前無相應研究對其發(fā)生機制進行闡述。

傳統(tǒng)的診療規(guī)范對于流感嗜血桿菌的感染治療首選的藥物是氨芐西林。近幾年，隨著抗生素的使用強度不斷增加，流感嗜血桿菌對耐氨芐西林耐藥率逐漸上升，耐藥程度不容忽視。

β 內酰胺酶陽性的流感嗜血桿菌，對頭孢菌素類仍然有很強的敏感性。盡管第二代頭孢菌素頭孢克洛耐藥性較高，但頭孢呋辛仍然有較高的敏感率，其毒性小、經(jīng)濟可作為治療流感嗜血桿菌感染的首選。第三代頭孢菌毒素頭孢噻肟和含酶抑制劑阿莫西林/克拉維酸有很高的敏感率，臨床應根據(jù)藥敏結果合理使用抗生素[9-10]。

綜上所述，南海區(qū)第五人民醫(yī)院2014-2019年839 株流感嗜血桿菌耐藥模式及流行特點研究表明，流感嗜血桿菌主要的發(fā)病季節(jié)為春季，發(fā)病人群年齡集中于兒童。對其進行藥敏試驗，表明傳統(tǒng)的氨芐西林耐藥性不斷升高，耐藥模式的試驗表明，二代頭孢菌素仍然具有較高的藥物敏感度，可作為臨床治療的首選藥物。