金銀花配方顆粒中綠原酸提取工藝的研究

上官同強 孟令江 滕海達 劉爽

關鍵詞：金銀花配方顆粒;綠原酸;提取工藝條件

【中圖分類號】 R28 【文獻標識碼】 A ? ? ? 【文章編號】2107-2306（2022）06--02

中藥配方顆粒是以符合炮制規范的中藥飲片為原料，經現代工業的提取、濃縮、干燥、精制成顆粒，其性味功效與原飲片一致，不含糖、防腐劑和其他賦形劑。用其代替中藥飲片供中醫飲片臨床辨證討論，隨證加減，配方使用，既能保持原中藥飲片的藥效，又保證了中醫臨床的用藥特色[1]。

金銀花為忍冬科忍冬屬植物忍冬的干燥花蕾，為常用藥，具有清熱解毒，抗病毒等功能，其功能性成分主要包括揮發油類、有機酸類、黃酮類、環烯醚萜苷類、三萜皂苷類等成分。，其中綠原酸類物質是金銀花有機酸的主要有效成分[2]，綠原酸（CGA）是由咖啡酸的羧基和奎尼酸的羥基縮合而成的縮酚酸，是植物細胞通過莽草酸途徑合成的一種苯丙素類物質，其分子結構中有酯鍵、不飽和雙鍵、多元酚和鄰二酚羥基，具有抗氧化、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、降血脂、降血糖和免疫調節等多方面的藥理作用，在食品、醫藥和化工等領域都有廣泛的應用[3]。本試驗以綠原酸提取量、出膏率、為指標，采用正交試驗對人參配方顆粒提取工藝進行優化。

1工藝研究資料

1.1劑型選擇

配方顆粒要求即為顆粒，故本品為顆粒劑

1.2提取工藝研究

1.2.1材料與儀器

儀器：美國Agilengt 1260 Infinity II高效液相色譜系統，G7129A 1260 Infinity II樣品瓶進樣器，G7129A 1260 ICC集成式柱溫箱，G7114A 1260 Infinity II紫外檢測器，G7111A 1260 Infinity II四元梯度泵，8301AA工作站數據處理系統OpenLAB CDS ChemStation Workstation;TP-A500電子天平;日本Shimadzu UV-2600紫外可見分光光度計;電熱恒溫水浴鍋（DK-98-Ⅱ）;電熱恒溫干燥箱（WGLL-125BZ型）。

材料：金銀花對照藥材：批號為121060-201608，購買于中國食品藥品檢定研究院。

綠原酸對照品：批號為110753-201716，購買于中國食品藥品檢定研究院。供試品：供試品：批號171801701、171801702、171801703。試劑：乙腈為色譜純（Fisher Chemicals），水為娃哈哈純凈水，其余試劑為分析純。

1.2.2提取工藝路線的設計

根據原國家食品藥品監督管理總局發布的《中藥配方顆粒管理辦法（征求意見稿）》第一章第三條的規定，配方顆粒的定義為：中藥配方顆粒是由單味中藥飲片經水提、濃縮、干燥、制粒而成，在中醫臨床配方后，供患者沖服使用。故采用水提取法。

1.2.3觀察指標：以綠原酸提取量和出膏率為指標，分別對加水倍量、提取次數、提取時間等工藝參數進行考察，通過對正交試驗結果進行綜合分析，選取與綠原酸含量和出膏率與標準煎劑最接近的提取工藝參數作為人參配方顆粒的最優提取工藝。

1.3含量標準

參考《中國藥典》2015年版一部金銀花綠原酸含量限度為1.5%，木犀草苷含量限度為0.050%。為了保證產品質量，內控綠原酸含量規定為不得少于1.5%，木犀草苷含量規定為不得少于0.050%。

2方法與結果

2.1樣品的測定方法

2.1.1吸水量測定

取金銀花100g，加入10倍量水浸泡，直至藥材完全浸透，濾出未被吸收的水，稱量浸潤后藥材重量，計算藥材吸水量，結果為373ml/100g。

2.1.2綠原酸的含量測定方法：照高效液相色譜法測定。

色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈-0.4%磷酸溶液（13：87）為流動相;檢測波長為327nm。理論板數按綠原酸峰計算，應不低于1000。

對照品溶液的制備取綠原酸對照品適量，精密稱定，置棕色瓶中，加50%甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得（10℃以下保存）。

供試品溶液的制備取本品，研細，取粉末約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加50%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理（200W，45kHz）30分鐘，放冷。再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇定容至刻度搖勻，即得

測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.1.3木犀草苷的含量測定：照高效液相色譜法測定。

色譜條件與系統適用性試驗用苯基硅烷鍵合硅膠為填充劑（Agilent ZORBAX SB-phenyl 4.6mm×250mm，5μm），以乙腈為流動相A，以0.5%冰醋酸溶液為流動相B，按下表中的規定進行梯度洗脫;檢測波長為350nm。理論板數按木犀草苷峰計算應不低于20000。

對照品溶液的制備取木犀草苷對照品適量，精密稱定，加70%乙醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備取本品，研細，取粉末約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇50ml，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率45kHz）1小時，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，即得。

測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.1.4出膏率的測定將提取液濃縮至約100ml，置已干燥至恒重的蒸發皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3h，取出置干燥器中冷卻30min，迅速精密稱重，按下式計算出膏率。

出膏率（%）=W＼WO×100%式中：W為浸膏重量;WO為藥材重量。

2.2提取工藝條件的研究

2.2.1 水提工藝的正交試驗

對提取工藝影響較大的因素有加水倍量、提取時間、提取次數。藥材吸水量測定結果顯示吸水量等于藥材總量的3.73倍，因此選擇加水倍量為10、12、14。以干膏綠原酸提取量作為評分標準，采用L9（34）正交表進行提取工藝的優化篩選，因素水平見表1。

方法：分別稱取金銀花9份，每份100g，按正交表進行試驗，加水回流提取，濾過，濾液濃縮干燥后、測定干膏重量及水分，照中國藥典2015年版一部金銀花含量測定項下方法測定綠原酸含量，以每1g飲片綠原酸的提取量作為綜合評分標準，并對其進行方差分析，實驗安排及結果見表2，方差分析見表3。

結果表明，以綠原酸提取量為評分指標，影響提取工藝的因素作用順序為提取次數>加水量>提取時間，由表3可知，A（提取時間）、B（提取次數）、C（加水量）因素均無顯著性影響，結合生產實際考慮，確定金銀花最佳提取工藝為A1B2C3，也即加水14倍，提取2次，每次0.5小時。

2.2.2最佳提取工藝驗證試驗

根據正交試驗結果篩選的最佳工藝條件進行驗證試驗。取金銀花，共3份，分別加水14倍提取2次，每次提取0.5小時，提取液濾過，減壓濃縮，干燥，稱重，計算出膏率并測定綠原酸提取量，結果見表4。

由表4結果可知，三批金銀花中綠原酸的提取量分別為11.95mg/g、11.23mg/g、11.12mg/g，RSD值為3.94%，篩選出的提取工藝穩定可行。確定金銀花配方顆粒的提取工藝為：金銀花加水14倍，提取2次，每次0.5小時。

2.2.3金銀花質量的含量檢測

照正文色譜條件，對三批金銀花配方顆粒進行含量測定，結果見表19。

根據測定結果，結合實際情況，擬定本品按干燥品計算，每1g含綠原酸（C16H18O9）不得少于20.0mg，含木犀草苷（C21H20O11）不得少0.40mg。符合《中國藥典》2015年版一部金銀花綠原酸含量限度為1.5%，木犀草苷含量限度為0.050%。

3結論

通過正交實驗，確定最佳提取工藝為：金銀花加水14倍，提取2次，每次0.5小時。經重復試驗提示，篩選得到的金銀花配方顆粒綠原酸最佳提取工藝條件穩定可行，且綠原酸提取量與出膏率都較高。

4討論

中藥配方顆粒克服了中藥飲片煎煮時、服用量大的缺點，避免了因煎煮費時、服用量大的缺點，避免了因煎煮方法不當而直接影響藥物藥效。有利中藥工業化、產業化、，進一步加深與國際市場的聯系。中藥劑型的進步為全人類的發展提供了便利[4]。但我們也要認識到中藥配方顆粒的研究和發展還不成熟，還有很多我們沒有攻克的難題，如中藥配方顆粒成本較高、復方合煎與單煎混合液化學成分的異同等等[5]，因此加快推進中藥顆粒配方技術的進步，是現階段需要解決的問題。

綠原酸和木犀草苷是金銀花中兩種有效的生理活性物質，綠原酸是抗菌解毒，消炎利膽的主要活性物質，而木犀草苷則具有抗腫瘤、抗誘變、抗感染等藥理活性。2005年新版中華人民共和國國藥典將忍冬（Lonicera japonica Thunb）作為金銀花藥材的唯一來源，規定綠原酸和木犀草苷作為金銀花的質量檢測指標。因此研究金銀花顆粒中綠原酸的最佳提取工藝時，要充分考慮木犀草苷的提取量。

綠原酸是由咖啡酸與奎尼酸形成的酯，其分子結構中有酯鍵、不飽和雙鍵及多元酚三個不穩定部分。在從植物提取過程中，往往通過水解和分子內酯基遷移而發生異構化。由于綠原酸本身的不穩定性，提取時不能高溫、強光及長時間加熱。因此，生產金銀花配方顆粒時，盡量做到提取后立刻濃縮，即使需要放置，需對儲液罐增加冷卻系統。以減少綠原酸的損耗。

參考文獻：

[1]陳平.中藥配方顆粒對豐富、發展傳統中藥湯劑的作用與意義[J].中華中醫藥雜志，2005，20（5）：2.

[2]朱文卿，任漢書，鄭媛媛，等.金銀花的功能性成分及其生物活性研究進展[J].食品工業科技，2021，42（13）：412-426.

[3]王慶華，杜婷婷，張智慧，等.綠原酸的藥理作用及機制研究進展[J].藥學學報，2020，55（10）：2273-2280.

[4]陳平.中藥配方顆粒對豐富、發展傳統中藥湯劑的作用與意義[J].中華中醫藥雜志，2005，020（005）：314-315.

[5]紀昌青.中藥配方顆粒劑臨床應用的優勢和局限性[J].內蒙古中醫藥，2013，032（023）：44.

基金項目：內蒙古自治區科技計劃項目，項目名稱：蒙中藥配方顆粒提取工藝與質量標準研究