一支箭黃酮類化學(xué)成分研究*

曾碧濤

(宜賓職業(yè)技術(shù)學(xué)院，四川 宜賓 644003)

一支箭為瓶爾小草科(Ophioglossaceae)瓶爾小草屬蕨類植物[1]，在四川、貴州、云南、西藏等西南各省均有分布[2-3]。現(xiàn)在藥材市場上流通的三個(gè)種為瓶爾小草(Ophioglossum vulgatum Linn.)、狹葉瓶爾小草(Ophioglossum thermale Kom.)和尖頭瓶爾小草(Ophioglossum pedunculosum Desv.)。一支箭是重要的民間中草藥，具有多種藥用價(jià)值，主要治療毒蛇咬傷、跌打損傷、燒傷燙傷、瘀血疼痛、肝炎等[4-7]。由于近年來過度采挖、農(nóng)藥使用和環(huán)境變化等因素，使其分布范圍日益縮減，數(shù)量越來越稀少[8]。

黃酮類化合物作為一支箭的主要物質(zhì)基礎(chǔ)，具有重要的藥理活性[9-11]，為了進(jìn)一步開發(fā)該藥材資源提供依據(jù)，我們對(duì)一支箭(Ophioglossum vulgatum Linn.)的黃酮類成分進(jìn)行系統(tǒng)研究，共分離得到了5個(gè)化合物，化合物1～4首次從該植物中分離得到。其結(jié)構(gòu)見圖1。

圖1 化合物1～5的結(jié)構(gòu)圖

1 儀器與材料

Thermo Scientific LTQ Orbitrap XL型高分辨質(zhì)譜儀；Agilent 400 MHz 核磁共振儀(TMS為內(nèi)標(biāo))；FS-9200T中壓制備色譜儀，天津博納艾杰爾科技有限公司；半制備型高效液相色譜儀，Waters公司；薄層色譜硅膠、柱色譜硅膠，青島海洋化工廠；乙腈、甲醇(色譜純)，其余試劑為國產(chǎn)分析純。

實(shí)驗(yàn)所用藥材一支箭2020年5月采自四川宜賓市，經(jīng)西南民族大學(xué)民族藥物研究所張志鋒教授鑒定為一支箭Ophioglossum vulgatum Linn.，樣品保存于宜賓職業(yè)技術(shù)學(xué)院(標(biāo)本號(hào)：CN20201032)。

2 提取與分離

將一支箭藥材1.5 kg粗粉，加10倍體積的95%乙醇。加熱回流提取3次，第一次2 h，第二次2 h，第三次1.5 h，合并三次提取液，減壓回收溶劑，加入2倍體積的水混勻。過濾，濾渣用50%乙醇洗滌2次，合并濾液。將濾液上經(jīng)過處理活化的聚酰胺，控制流速為0.2 L·min-1，完成后水洗至流出液無色，用20%、70%和95%乙醇梯度洗脫，收集洗脫液，減壓回收溶劑，得各粗提取物，稱重分別得到3 g、11 g和2 g。TLC檢測發(fā)現(xiàn)用70%乙醇洗脫得到的粗提取物斑點(diǎn)最多。將70%乙醇洗脫部分(10 g)甲醇溶解后用硅膠拌樣(60～80目)，硅膠濕法裝柱(200～300目)進(jìn)行分離。洗脫劑用二氯甲烷-甲醇 (20∶1→2∶1)，約500 mL收集一份，共收集33份。以5%三氯化鋁-乙醇溶液為顯色劑進(jìn)行TLC檢測，對(duì)相同部分進(jìn)行合并后得到Fr. A～F。將Fr. B(0.3 g)進(jìn)行再次硅膠柱層析，洗脫劑為二氯甲烷-甲醇(8∶1)，TLC監(jiān)控，收集主要斑點(diǎn)部分用半制備反相色譜再次分離，以乙腈-0.1%磷酸水(35∶65)為流動(dòng)相，檢測波長為254 nm，得到化合物5(17 mg)；對(duì)具有明顯斑點(diǎn)的Fr. C(0.7 g)進(jìn)行再次硅膠柱色譜分離，洗脫劑為二氯甲烷-甲醇(6∶1)，用TLC過程監(jiān)控，收集相對(duì)單一部分Fr. C1，用半制備反相色譜分離，流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸水(32∶68)，得化合物4(15 mg)，將Fr. D(1.0 g)用常壓反相硅膠柱色譜再次粗分，甲醇-水(50∶50→90∶10)梯度洗脫，TLC監(jiān)控，得Fr. D3、Fr. D4，F(xiàn)r. D6三個(gè)相對(duì)單一樣品，再用半制備高效液相對(duì)樣品進(jìn)行精制，乙腈-0.1%磷酸水為流動(dòng)相，檢測波長254 nm，得化合物1(13 mg)、化合物3(16 mg)，F(xiàn)r. F(0.4 g)再次進(jìn)行硅膠柱色譜分離，洗脫劑為二氯甲烷-甲醇(5∶1)，TLC監(jiān)控，得相對(duì)單一的組分Fr. F1，將其用半制備反相色譜分離，以乙腈-0.1%磷酸水(25∶75)為流動(dòng)相，檢測波長254 nm，收集主要目標(biāo)物，減壓抽干，甲醇溶解后過濾，濾液用凝膠色譜精分，用純甲醇為洗脫劑，得到化合物2(12 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：淡黃色粉末。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)：δ7.56 (1H，d，J=2.4 Hz，H-2′)，7.52 (1H，dd，J=8.4，2.5 Hz，H-6′)，7.26 (1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，6.80 (1H，d，J=2.4 Hz，H-8)，6.43 (1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，5.07 (1H，d，J=7.2 Hz，H-1?)，4.84 (1H，d，J=7.6 Hz，H-1″)，3.79 (1H，s，-OCH3)；13C-NMR (100 MHz，DMSO-d6)δ：148.2 (C-2)，138.9 (C-3)，178.6 (C-4)，161.3 (C-5)，99.7 (C-6)，163.4 (C-7)，95.0 (C-8)，156.5 (C-9)，101.6 (C-10)，124.2 (C-1′)，116.1(C-2′)，146.9 (C-3′)，156.0 (C-4′)，116.2 (C-5′)，120.7 (C-6′)，100.1 (C-1″)，73.5 (C-2″)，76.8(C-3″)，69.9(C-4″)，77.5(C-5″)，61.0(C-6″)，106.3 (C-1)，73.6 (C-2)，76.3 (C-3)，70.2 (C-4)，77.7 (C-5)，61.1 (C-6)，60.2(-OCH3)。與文獻(xiàn)[12]報(bào)道基本一致，故鑒定為 3-O-甲基槲皮素7-O-β-D-葡萄糖基-4′-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物2：淡黃色粉末。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)：δ7.40 (1H，d，J=2.0 Hz，H-2′)，7.35 (1H，d，J=15.6 Hz，H-7″″′)，7.27 (1H，dd，J=8.4，2.0 Hz，H-6′)，6.93 (1H，d，J=2.0 Hz，H-2″″′)，6.88 (1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，6.85 (1H，dd，J=8.0，1.6 Hz，H-6″″′)，6.67 (1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.66 (1H，d，J=8.4 Hz，H-5″″′)，6.39 (1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，6. 13 (1H，d，J=16.0 Hz，H-8″″′)，5. 50 (1H，br s，H-1?)，5.48 (1H，br s，H-1″″)，4.26 (1H，d，J=7.8 Hz，H-1)，1.10 (3H，d，J=6.0 Hz， H-6″″)，0. 91 (3H，d，J=6.0 Hz，H-6″)；13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：157.6 (C-2)，135.0 (C-3)，178.4 (C-4)，161.3 (C-5)，99.8 (C-6)，162.1 (C-7)，94.8 (C-8)，156.4 (C-9)，106.0 (C-10)，120.8 (C-1′)，116.0 (C-2′)，145.6 (C-3′)，149.2 (C-4′)，116.0 (C-5′)，121.5 (C-6′)，101.1 (C-1″)，82.1(C-2″)，70.6 (C-3″)，72.1 (C-4″)，70.8 (C-5″)，18.3 (C-6″)，106.6 (C-1)，74.1 (C-2)，76.3 (C-3)，69.6 (C-4)，74.0 (C-5)，63.1 (C-6)，98.8 (C-1″″)，70.2 (C-2″″)，70. 6 (C-3″″)，72.0 (C-4″″)，70.5 (C-5″″)，17.8 (C-6″″)，125.9 (C-1″″′)，115.8 (C-2″″′)，145.5 (C-3″″′)，148.6 (C-4″″′)，116.0 (C-5″″′)，121.5 (C-6″″′)，145.6 (C-7″″′)，114.2 (C-8″″′)，166.7 (C-9″″′)。與文獻(xiàn)[13]報(bào)道基本一致，故鑒定為槲皮素3-O-(6-O-咖啡酰基)-β-D-葡萄糖基-(1→2)-α-L-鼠李糖-7-O-α-L-鼠李糖苷。

化合物3：淡黃色粉末。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)：12.7 (1H，br s，H-5-OH)，7.19 (1H，d，J=8.4 Hz，H-4′)，6.90 (1H，d，J=8.4 Hz，H-3′)，6.73 (1H，d，J=2.4 Hz，H-8)，6.40 (1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，5.20 (2H，s，H-7′)，5.03 (1H，d，J=7.2 Hz，H-1″)；13C-NMR (100 MHz，DMSO-d6)δ：149.8 (C-2)，133.1 (C-3)，174.1 (C-4)，161.1 (C-5)，99.2 (C-6)，162.5 (C-7)，94.6 (C-8)，155.4 (C-9)，106.1 (C-10)，119.9 (C-1′)，114.2 (C-2′)，114.6 (C-3′)，149. 9 (C-4′)，140.5 (C-5′)，115.2 (C-6′)，63.1 (C-7′)，100.1 (C-1″)，77.2 (C-2″)，69.5 (C-3″)，72.9 (C-4″)，76.4 (C-5″)，60.6 (C-6″)。文獻(xiàn)[14]報(bào)道基本一致，故鑒定為瓶爾小草素-7-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物4：淡黃色粉末。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)：7.75 (1H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′)，7.34 (1H，d，J=15.6 Hz，H-7″″′)，6.91(1H，d，J=2.0 Hz，H-2″″′)，6.88 (1H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′)，6.83 (1H，dd，J=8.4，2.0 Hz， H-6″″′)，6.67 (1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.65(1H，d，J=8.4 Hz，H-5″″′)，6.40 (1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，6.10 (1H，d，J=16.0 Hz，H-8″″′)，5.58 (1H，br s，H-1″)，5.50 (1H，br s，H-1″″)，4.28 (1H，d，J=7.8 Hz，H-1)，4.13 (1H，m，H-6)，4.12 (1H，br s，H-2″)，3.84 (1H，br s，H-2″″)，3.63 (1H，dd，J=9.2，3.2 Hz，H-3″″)，3.55 (1H，dd，J=9.6，3.2 Hz，H-3″)，3.43 (1H，m，H-5″″)，3.37 (1H，m，H-5″)，3.28 (1H，m，H-4″″，5″″)，3.20(1H，m，H-3)，3.19 (1H，m，H-4)，3.12 (1H，t，J= 9.6 Hz，H-4″)，3.06 (1H，t，J=8.0 Hz，H-2)，1. 10 (3H，d，J=6.0 Hz，H-6″″)，0.88 (3H，d，J=6.0 Hz，H-6″)；13C-NMR (100 MHz，DMSO-d6)δ：157.6 (C-2)，135.0 (C-3)，178.3 (C-4)，161.4 (C-5)，99.9 (C-6)，162.1 (C-7)，94.9 (C-8)，156.4 (C-9)，106.5 (C-10)，120.6 (C-1′)，131.0 (C-2′)，115.8 (C-3′)，160.6(C-4′)，116.0 (C-5′)，131.0 (C-6′)，101.0 (C-1″)，81.9 (C-2″)，70.6 (C-3″)，72.0 (C-4″)，70.9 (C-5″)，18.3 (C-6″)，106.1 (C-1)，74.1 (C-2)，76.4 (C-3)，70.2 (C-4)，74.1 (C-5)，63.3 (C-6)，98.9 (C-1″″)，70.3 (C-2″″)，70.6 (C-3″″)，72.1 (C-4″″)，70.5 (C-5″″)，18.2 (C-6″″)，125.8 (C-1″″′)，115.3 (C-2″″′)，145.9 (C-3″″′)，148.6 (C-4″″′)，115.8(C-5″″′)，121.4 (C-6″″′)，145.5 (C-7″″′)，114.1 (C-8″″′)，166.7 (C-9″″′)。與文獻(xiàn)[15]報(bào)道基本一致，故鑒為山柰酚3-O-(6-O-咖啡酰基)-β-D-葡萄糖基-(1→2)-α-L-鼠李糖-7-O-α-L-鼠李糖苷。

化合物5：淡黃色粉末。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)：7.56 (1H，d，J=2.4 Hz，H-2′)，7.43 (1H，dd，J=8. 4，2.4 Hz，H-6′)，6.90 (1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，6.74 (1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.42 (1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，5.06 (1H，d，J=7.2 Hz，H-1″)，3.78 (3H，s，-OCH3)，3.67 (1H，br d，J=10.4 Hz，H-5″)，3.45 (1H，dd，J=6.0，12.0 Hz，H-6″)，3.37 (1H，m，H-5″)，3.30(1H，t，J=7.2 Hz，H-6″)，3.20 (1H，dd，J=7.2，8.8 Hz，H-2″)，3.17(1H，t，J=9.0 Hz，H-4″)；13C-NMR (100 MHz，DMSO-d6)δ：155.9 (C-2)，137.9 (C-3)，178.1 (C-4)，160.9 (C-5)，99.2 (C-6)，162.9 (C-7)，94.4 (C-8)，156.2(C-9)，105.8 (C-10)，120.7 (C-1′)，115.6 (C-2′)，145.2 (C-3′)，148.9 (C-4′)，115.7(C-5′)，120.7(C-6′)，99.8 (C-1″)，73.1(C-2″)，76.4(C-3″)，69.5(C-4″)，77.1 (C-5″)，60.6 (C-6″)，59.7 (-OCH3)。與文獻(xiàn)[16]報(bào)道基本一致，故鑒定為 3-O-甲基槲皮素 7-O-β-D-葡萄糖苷。

4 結(jié) 論

本文通過硅膠柱色譜、凝膠色譜及高壓制備色譜等方法對(duì)一支箭(OphioglossumvulgatumLinn.) 的黃酮類成分進(jìn)行分離純化，通過測定分離得到化合物的理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征。共分離得到5個(gè)黃酮類化合物，前4個(gè)化合物為首次從該植物中分離得到。為了進(jìn)一步開發(fā)該藥材資源提供了依據(jù)。