兩種流動相系統對氟康唑原料藥含量測定的方法學對比研究

梁艷輝,邢征宇,劉 斌,姚傳華,魏 丹

(海南省食品藥品檢驗所海口分所，海南 海口 570100)

氟康唑為三唑類第三代抗真菌藥，被用于各種真菌感染特別是對隱球菌、念珠菌和皮膚真菌具有良好的抗菌作用[1-2]。《中國藥典》2020年版二部收載的氟康唑原料藥的含量測定為電位滴定法，該方法操作繁瑣[3]。本文參考《中國藥典》2020年版二部氟康唑原料藥有關物質項下檢測方法和其制劑項下含量測定方法選擇了兩種系統對氟康唑原料藥的含量進行了方法學研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀 器

Agilent 1260型高效液相色譜儀，美國安捷倫公司；XS205DU 型電子天平，梅特勒-托利多(上海)有限公司。

1.2 試 藥

氟康唑原料藥(批號：210902)，海南沙汀寧制藥有限公司；氟康唑對照品(批號：100314-201906，含量：99.8%)，中國食品藥品檢定研究院；氟康唑雜質Ⅰ(批號：130699-201501，含量：99.1%)，中國食品藥品檢定研究院；甲醇和乙腈均為色譜純，其它試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 高效液相色譜法

在系統1和系統2的色譜條件相同的部分為色譜柱均為ACE Excel 5 C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流速均為1.0 mL·min-1，進樣量均為20 μL，柱溫均為40 ℃，方法系統適用性要求為氟康唑與雜質Ⅰ的分離度大于1.5，理論塔板數大于2000。流動相比例和實驗結果系統使用性見表格1。

表1 高效液相色譜法中色譜條件

2.2 溶液的配制

對照品溶液：精密稱取氟康唑對照品約50 mg+分別用系統1和系統2流動相→50 mL。

供試品液溶液：精密稱取氟康唑樣品約50 mg+分別用系統1和系統2流動相→50 mL。

雜質Ⅰ對照品溶液配制：精密稱取雜質Ⅰ對照品約10mg+分別用系統1和系統2流動相→10 mL。

系統適用性溶液的配制：精密稱取氟康唑10 mg+分別用系統1和系統2流動相+精密量取雜質Ⅰ對照品溶液1 mL→10 mL。

2.3 方法學驗證

2.3.1 專屬性試驗

精密稱取氟康唑樣品約50 mg，置50 mL容量瓶中，加系統1和系統2流動相溶解后分別做如下處理：(1)酸破壞：加 1 mol/L鹽酸溶液0.2 mL，放置1 h，再加1 mol/L氫氧化鈉溶液0.2 mL中和，再分別用系統1和系統2流動相稀釋至刻度；(2)堿破壞：加入1 mol/L氫氧化鈉溶液0.2 mL，放置1 h，再加1 mol/L鹽酸溶液0.2 mL中和，再分別用系統1和系統2流動相；(3)氧化破壞：加入30%過氧化氫溶液0.2 mL，放置 1 h，再分別用系統1和系統2流動相溶解并稀釋定容至刻度；(4)高溫破壞：取本品置80 ℃烘箱放置3 h，精密稱取50 mg，置50 mL量瓶中，再分別用系統1和系統2流動相溶解并稀釋定容至刻度，搖勻。(5)光照破壞：取本品光照破壞24 h，精密稱取50 mg，置50 mL量瓶中，再分別用系統1和系統2流動相溶解并稀釋定容至刻度，搖勻。按2.1.1項下的色譜條件測定，詳見圖1。結果表明，原料藥在酸、堿、光和熱的破壞試驗中，未出現其他雜質。在氧化破壞的條件下產生較多降解雜質，各雜質峰與主成分峰的分離度均大于1.5，表明本法的專屬性良好。在將原料藥制備成制劑時，應重點關注其在氧化環境中產生的雜質會影響到制劑的穩定性，預知未知雜質，則需要進一步研究。

圖1 系統1和系統2高效液相色譜破壞圖

2.3.2 線性范圍試驗

系統1中氟康唑對照品溶液進樣量在3.1048～31.0478 μg范圍內，進樣量與峰面積呈良好的線性關系，線性方程為Y=116.9X+7.765，r=1；系統2中氟康唑對照品溶液進樣量在2.0958～31.4370 μg范圍內，進樣量與峰面積呈良好的線性關系，線性方程為Y=115.15X+5.61，r=1。

2.3.3 重復性和精密度試驗

精密稱取氟康唑6份樣品，按照2.2要求稀釋后，平行測定6次，系統1中6份樣品的平均含量為99.7%，RSD為0.3%(n=6)；系統2中6份樣品的平均含量為99.4%，RSD為0.2%(n=6)，結果表明氟康唑樣品在系統1和系統2中均具有良好的重復性和精密度。

2.3.4 穩定性試驗

供試品溶液在系統1和系統2中連續12小時進樣檢測，樣品含量RSD分別為0.05%和0.09%，表明樣品在12小時內穩定性較好，能夠滿足檢驗要求，結果見表2。

表2 系統1和系統2穩定性試驗結果

2.3.5 檢測限與定量限

將對照品溶液逐級進行稀釋，測得其檢測限(S/N=3)和定量限(S/N=10)，系統1中的檢測限為2.0958 ng，定量限為8.3832 ng；系統2中的檢測限為0.0414 ng，定量限為1.0349 ng。

2.3.6 耐用性試驗

在系統1和系統2中其他條件不變的情況下分別考察了氟康唑6份樣品在調整流速和柱溫發生變化時，其含量的變化情況。考慮到系統誤差和人為誤差后，流速和柱溫發生變化后，兩兩比較的RSD值均在合理的范圍內，具體實驗過程中可以根據實驗室的條件選擇合適的實驗方案，結果分別見表3和表4。

表3 系統1和系統2不同流速對含量測定的影響

表4 系統1和系統2不同柱溫對含量測定的影響

3 結 論

本實驗考察了兩種系統對氟康唑的影響，實驗表明兩種流動相系統對含量檢測結果影響相差不大，系統適用性試驗結果表明系統1的分離度和理論塔板數優于系統2。《中國藥典》2020年版二部中，系統1是原料藥的有關物質檢測系統，系統2則用于其制劑中含量測定和有關物質。試驗對方法的專屬性進行全面考察，通過破壞實驗結果表明，降解雜質與主成分分離度均符合要求，王成剛[4]報道了在專屬性考察中保留時間約為17.5 min的雜質是由生產工藝過程中產生；嚴小紅[5]報道了氟康唑中未知雜質均在主峰相對保留時間1.5以上，均能與主峰獲得良好分離，對含量測定結果無干擾。耐用性試驗表明合理范圍內的條件參數變化，對結果影響較小，表明方法耐用性良好。

原料藥的純度要求高，限度要求嚴格，一般為99.0%～102.0%，含量測定更加注重結果的準確性。《中國藥典》2020年版對氟康唑原料藥的含量測定采用的是非水溶液滴定法，隨著現代藥品檢測技術的提高，高效液相色譜法既可用于定性分析又可用于定量分析，檢測結果準確度靈敏度均較高，在藥品研發、質量控制和檢測等領域有著廣泛的應用。方法驗證試驗表明，兩種系統均可用于氟康唑原料藥的含量測定，且可優選系統1的方法。