中國、美國及AOAC微生物分析方法確認準則比較

宋俊華，段麗芳，夏玉先， 邢立國 ，侯春青， 吳進龍*

(1. 沈陽沈化院測試技術有限公司，遼寧 沈陽 110021；2.農業農村部農藥檢定所，北京 100125；3.重慶聚立信生物工程有限公司，重慶 401120)

按照聯合國糧農組織(FAO)和世界衛生組織(WHO)在2017年聯合發布的FAO/WHO微生物農藥標準制定要求(https：//www.fao.org/fileadmin/templates/agphome/documents/Pests_Pesticides/Specs/JMPS_Manual_2016/Manual-Revised_Section_9_Final_-_2018_12_05.pdf)，在申請微生物農藥產品的國際標準時，如果有效成分和相關雜質的分析方法不是已經發布的國際農藥分析協作委員會(CIPAC)或美國分析化學家協會(AOAC)的方法，需要對分析方法進行同行驗證(peer validated)以證實其可靠性。但與傳統化學農藥不同的是，國際農藥分析協作委員會(CIPAC)并沒有制定專門針對微生物農藥的方法確認和驗證指南，考慮到微生物農藥和傳統化學農藥分析方法原理的巨大差異，完全依照CIPAC相關準則對微生物農藥分析方法進行確認并不合理。本文比較了中國出入境檢驗檢疫總局、美國環保局(EPA)和AOAC發布的三個微生物分析方法確認準則，供相關管理部門及行業在微生物農藥管理及分析方法開發、確認及驗證過程中提供參考。

中國國家質量監督檢驗檢疫總局于2012年發布了《食品微生物檢驗方法確認技術規范》SN/T 3266-2012，主要使用待確認方法與基準方法進行比較的方式，對食品微生物定性、定量分析方法進行確認，包括實驗室內確認和實驗室間確認兩個階段。AOAC于2012年發布《AOAC 食品和環境表面微生物分析方法準則》(AOAC International Methods Committee Guidelines for Validation of Microbiological Methods for Food and Environmental Surfaces)，主要適用于食品和環境中微生物分析方法確認。美國環保局于2016年發布《EPA微生物分析方法驗證》的指南(Method Validation of U.S. Environmental Protection Agency (EPA) Microbiological Methods of Analysis)，其范圍涵蓋所有基質條件下的微生物分析方法確認。AOAC和EPA的確認均分為三個階段，分別為實驗室內確認、小范圍確認(AOAC和EPA分別將其稱為獨立確認(independent validation study)和第二階段確認)和大范圍確認(AOAC和EPA分別將其成為協同驗證(Collaborative Study)和第三階段確認)。

有關微生物分析方法確認的專用術語包括：1. LOD50：檢測概率為50%時的分析物濃度。2. 排他性(exclusivity)：未被檢出的非靶標菌種，其具有潛在的交叉反應可能性。3. 包容性(inclusivity)：能被檢出的靶標菌種。4. 檢測概率(POD，Probability of Detection)： 對于某固定基質和檢測濃度，定性分析方法所能檢出的陽性結果比例，與樣品濃度相關，AOAC準則中用其作為定性方法確認的判定指標。5. 部分回收(fractional recovery)：一組相同接種水平的樣品獲得陽性結果的數量和陰性結果的數量，陽性結果比例應該大約占總樣品數量的50%，則滿足確認標準。

表 中國、美國及AOAC微生物分析方法確認準則比較

續表

從上表可以看出，美國EPA的方法確認準則與傳統化學農藥分析方法的確認準則要求最為接近，同時納入了微生物分析驗證相關的特殊要求，如換算成對數形式統計等，是目前最有針對性的微生物分析方法確認準則。我國于2016年發布了《農藥產品質量分析方法確認指南》NY/T 2887～2016，主要針對化學農藥適用，無專門針對微生物 農藥的分析方法確認指南。為鼓勵我國微生物農藥健康發展，規范管理，建議開展相關微生物分析方法確認研究，推動相關準則制定。