蘇州地區(qū)呼吸道感染未成年住院患者常見(jiàn)呼吸道病毒IgM抗體檢測(cè)及分析*

張 馨，李 陽(yáng)，李 丹，繆美華，何 萍，花盛浩，邵雪君，閔蘭芳△

1.蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇蘇州 215025；2.蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇蘇州215004；3.蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院兒研所，江蘇蘇州 215025

急性呼吸道感染是兒童最常見(jiàn)的感染性疾病。超過(guò)90%的急性呼吸道感染由呼吸道病毒引起[1]。呼吸道病毒感染對(duì)兒童健康有較大影響[2]，是引起兒童發(fā)病和死亡的主要原因[3]。研究發(fā)現(xiàn)，呼吸道病毒的流行趨勢(shì)與季節(jié)、性別、年齡、氣候等因素相關(guān)[4-6]，而且不同環(huán)境下的呼吸道病毒常存在一定差異，因此進(jìn)行呼吸道感染病毒的流行病學(xué)調(diào)查對(duì)該地區(qū)呼吸道感染的預(yù)防和臨床治療意義重大。基于以上背景，本研究利用間接免疫熒光法對(duì)2016年3月至2021年2月在蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院住院的臨床診斷為呼吸道感染的未成年患者血清標(biāo)本進(jìn)行了5種常見(jiàn)呼吸道病毒IgM抗體的檢測(cè)，包括腺病毒(ADV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、流感病毒A型(IVA)、流感病毒B型(IVB)、人類副流感病毒(HPIVS)，并進(jìn)行流行病學(xué)分析，旨在了解常見(jiàn)呼吸道病毒的感染情況及流行趨勢(shì)。

1 資料與方法

1.1一般資料 根據(jù)《實(shí)用兒科學(xué)》[7]中的診斷標(biāo)準(zhǔn)，將2016年3月至2021年2月在蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院住院的有急性呼吸道感染呼吸道癥狀、發(fā)熱時(shí)間較長(zhǎng)，臨床診斷為呼吸道感染的未成年患者納入研究，共42 429例。其中男性24 525例，女性17 904例，男、女比例為1.37∶1。根據(jù)我國(guó)南方季節(jié)特征，每年春季為3～5月，夏季為6～8月，秋季為9～11月，冬季為12至次年2月(將1、2月份計(jì)入前一年進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì))。參考王衛(wèi)平主編的《兒科學(xué)》[8]，將納入研究的未成年患者按年齡段分組：新生兒組(0～<28 d)、嬰兒組(28 d至<1歲)、幼兒組(1～<3歲)、兒童組(3～<14歲)、青少年組(14～<18歲)。納入研究的未成年患者性別及臨床科室分布情況見(jiàn)表1。本研究經(jīng)蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查通過(guò)。

表1 納入研究的未成年患者性別及臨床科室分布情況(n)

1.2儀器與試劑 5種呼吸道病毒IgM抗體檢測(cè)試劑盒為比爾賽有限公司產(chǎn)品。熒光顯微鏡為德國(guó)LEICA公司產(chǎn)品，型號(hào)為L(zhǎng)EICA DM 2000。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本采集 采集納入研究患者急性期外周靜脈血3 mL，注入促凝管，以4 000 r/min離心10 min，收集血清備用。

1.3.2標(biāo)本檢測(cè) 采用間接免疫熒光法，參照試劑盒說(shuō)明書分別檢測(cè)ADV、RSV、IVA、IVB、HPIVS 5種呼吸道病毒IgM抗體。(1)在干燥、潔凈的EP管中加入15 μL PBS、15 μL吸附劑和15 μL血清，徹底混勻后，13 000 r/min離心10 min去除沉淀，以防干擾檢測(cè)。(2)載玻片3孔中分別加入15 μL經(jīng)步驟(1)處理過(guò)的血清、15 μL陽(yáng)性對(duì)照、15 μL陰性對(duì)照，并于37 ℃孵育90 min后清洗兩次自然晾干。(3)上述3孔每孔加入15 μL抗人IgM FITC結(jié)合物溶液，于37 ℃溫育30 min，清洗并自然晾干。最后加適量封閉介質(zhì)并加蓋玻片，用熒光顯微鏡在400倍放大率下觀察每孔的熒光強(qiáng)度。

1.3.3結(jié)果判斷 陽(yáng)性：觀察到1%～15%細(xì)胞的細(xì)胞核、胞質(zhì)或胞膜出現(xiàn)蘋果綠色熒光(在RSV和HPIVS中能同時(shí)觀察到著色的合胞體)；陰性：觀察到細(xì)胞呈現(xiàn)紅色。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用Microsoft Office Excel 2003、SPSS20.0、GraphPad軟件對(duì)所收集的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料用頻數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.15年間5種呼吸道病毒抗體檢出情況 呼吸道病毒IgM抗體檢出率在不同年份之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=602.02，P<0.05)，見(jiàn)表2。5種呼吸道病毒中，IVB和HPIVS的總檢出率居前兩位，分別為6.55%和5.35%。

2.2不同性別人群5種呼吸道病毒的檢出情況 男性和女性人群比較：呼吸道病毒IgM抗體檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；IVB、HPIVS IgM抗體的檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而ADV、RSV、IVA IgM抗體的檢出差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表3。

表3 不同性別人群5種呼吸道病毒IgM抗體的檢出情況分析[n(%)]

2.3不同季節(jié)5種呼吸道病毒的檢出情況 5種呼吸道病毒IgM抗體在不同季節(jié)之間的檢出率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表4。

表4 不同季節(jié)5種呼吸道病毒IgM抗體檢出情況分析[n(%)]

2.4不同年齡段分組的5種呼吸道病毒檢出情況 不同年齡段分組的5種呼吸道病毒IgM抗體檢出率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。RSV在嬰兒組中的檢出率最高(P<0.05)。見(jiàn)表5。

表5 不同年齡段人群5種呼吸道病毒IgM抗體檢出率分析[n(%)]

2.5不同年份、季節(jié)、年齡段分組的5種呼吸道病毒IgM抗體檢出情況 綜合分析不同年份、季節(jié)、不同年齡段分組中檢出的5種呼吸道病毒IgM抗體的分布情況，見(jiàn)表6。

表6 不同年份、季節(jié)、年齡段分組中檢出的5種病毒IgM抗體的分布情況[n(%)]

續(xù)表6 不同年份、季節(jié)、年齡段分組中檢出的5種病毒IgM抗體的分布情況[n(%)]

3 討 論

急性呼吸道感染主要由呼吸道病毒感染引起，不同病毒感染的臨床癥狀相似，但治療用藥卻各有不同[9]，未成年人免疫系統(tǒng)尚不完善、易感染，是呼吸道病毒主要侵犯對(duì)象[10]。因此對(duì)急性呼吸道感染未成年患者進(jìn)行呼吸道病毒檢測(cè)，對(duì)疾病的早期診斷、干預(yù)以及治療具有重要的指導(dǎo)意義。呼吸道病毒IgM抗體檢測(cè)具有簡(jiǎn)便、快速、成本低等優(yōu)點(diǎn)[11]，通常在發(fā)病后一周內(nèi)可在血清中被檢測(cè)到，因此IgM抗體可作為急性感染期的診斷指標(biāo)，適合臨床快速篩查呼吸道病毒感染，指導(dǎo)臨床早期準(zhǔn)確用藥。

本研究分析了2016年3月至2021年2月有急性呼吸道感染癥狀的42 429例住院未成年患者血液標(biāo)本中的5種常見(jiàn)呼吸道病毒IgM抗體檢測(cè)結(jié)果，總檢出率為13.40%，結(jié)果低于國(guó)內(nèi)一些文獻(xiàn)的報(bào)道[12-13]，這可能與地域、檢出病毒的種類、檢測(cè)方法與時(shí)間(IgM產(chǎn)生的窗口期)等因素有關(guān)[6]。5種常見(jiàn)呼吸道病毒中，IVB和HPIVS的IgM抗體檢出率位居前列，這和文獻(xiàn)[14-15]的報(bào)道基本一致。2020年病毒抗體檢出率顯著降至8.69%，這可能跟全民響應(yīng)國(guó)家號(hào)召，積極做好新冠疫情防護(hù)措施有關(guān)，如勤洗手、戴口罩、多通風(fēng)、少接觸等。本研究中，呼吸道病毒IgM抗體檢出率，男性(11.92%)明顯低于女性(15.42%)，這與文獻(xiàn)[16]報(bào)道的結(jié)論相符。不同性別人群中檢出率的差異可能與男女氣道結(jié)構(gòu)差異，激素水平及抵抗力不同有關(guān)。5種常見(jiàn)呼吸道病毒感染呈現(xiàn)一定季節(jié)性，主要集中在春冬交替季節(jié)，結(jié)果與文獻(xiàn)[17]報(bào)道的一致。IVB主要流行于春冬季；HPIVS主要流行于夏秋季。春冬季由于氣溫低，室內(nèi)開窗通風(fēng)時(shí)間較短，學(xué)校、幼兒園等聚集場(chǎng)所易引起群發(fā)性病毒感染，從而導(dǎo)致未成年人發(fā)生急性呼吸道感染的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加。年齡偏小的新生兒組、嬰兒組易感染HPIVS，而幼兒組、兒童組以及青少年組則以IVB感染為主。RSV在嬰兒組中的檢出率最高。不同年齡段呼吸道病毒IgM抗體檢出率隨著年齡的增長(zhǎng)先增加后降低，3～14歲的兒童組最高，這與文獻(xiàn)[18]的報(bào)道一致，這可能與兒童接觸范圍大且接觸人群復(fù)雜，兒童機(jī)體免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育完全，抵抗力低下等因素有關(guān)。本研究還發(fā)現(xiàn)，不同各年份、季節(jié)、年齡段分組中，均以IVB或HPIVS抗體的檢出率最高。2016、2017年HPIVS較為流行，2018、2019年IVB較為流行，2020年又以HPIVS流行為主，筆者推測(cè)IVB和HPIVS兩種病毒以兩年為周期交替暴發(fā)流行。

綜上所述，因地區(qū)、氣候、檢測(cè)方法、時(shí)間、研究對(duì)象等因素的不同，本研究與其他文獻(xiàn)報(bào)道的研究結(jié)果不完全相同，但根據(jù)蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院呼吸道病毒IgM抗體檢測(cè)結(jié)果，兒童急性呼吸道感染以IVB、HPIVS感染為主，好發(fā)于春冬兩季，3～14歲的女童為易感人群。故針對(duì)易感人群，積極開展預(yù)防接種、健康教育、衛(wèi)生宣教等活動(dòng)，加強(qiáng)家長(zhǎng)及兒童防護(hù)意識(shí)非常必要。血清IgM抗體檢測(cè)的結(jié)果雖與抗原檢測(cè)的結(jié)果有所差異，但對(duì)兒科呼吸系統(tǒng)疾病的早期快速診斷具有重要價(jià)值，如將二者聯(lián)合運(yùn)用，可顯著提高疾病檢出率，為臨床診療提供快速、準(zhǔn)確的診斷依據(jù)。本研究也存在一定的不足：(1)未涉及呼吸道病原體其他檢測(cè)方法，缺乏對(duì)呼吸道病原體檢測(cè)更深入的分析；(2)呼吸道病原體的研究種類偏少，在后續(xù)的研究中將進(jìn)一步擴(kuò)大研究范圍，更全面地探討呼吸道病原體的分布規(guī)律以及流行趨勢(shì)。