膜控型非諾貝特緩釋微丸制備工藝優選及體外釋放度評價

牛向偉 ，姜莉莉 ，周國忠 ，張 寧

（1. 頸復康藥業集團有限公司，河北 承德 067000； 2. 河北省中藥新輔料技術創新中心，河北 承德 067000）

高脂血癥已成為21世紀威脅人類生命健康的主要疾病之一，也是眾多慢性疾病的直接誘因［1］。目前，臨床用于調血脂的藥物主要可分為貝特類、他汀類、煙酸類、樹脂類、膽固醇吸收抑制劑及其他六大類［2］。其中，貝特類的代表藥物為非諾貝特，其上市產品劑型以速釋劑為主［3］。但高脂血癥患者多為老年人，速釋制劑藥物釋放過快，易造成藥物突釋而產生中毒；且劑量較小，1 d 需服用2～3 次才能達到治療效果，易出現漏服現象，順應性差。由于藥物本身難溶［4］，若制成普通的緩釋劑會造成遲釋現象，影響療效；而制成微球比表面積較大，難以把握藥物包封率及釋放度。微丸是一種多單元型給藥系統，具有比表面積適中、釋藥穩定、流動性好等優點［5-7］，將藥物制成緩釋微丸效果較理想。本研究中采用流化床包衣技術制備膜控型非諾貝特緩釋微丸，采用正交試驗優選制備工藝，并考察其體外釋放效果。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Mini-Glatt 型流化床（德國Glatt 公司）；LC-10AT型高效液相色譜儀（日本島津公司）；ZRS-8GD 型智能溶出試驗儀（天大天發科技有限公司）；FEI JEM -2800F 型聚焦離子束/ 場發射掃描電子顯微鏡（美國FEI 公司）；XSE205DU 型電子分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司，精度為十萬分之一）；DG-202BS型電熱恒溫鼓風干燥箱（天津市天宇實驗儀器有限公司）。

1.2 試藥

非諾貝特對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為20180405，純度為99.9%）；非諾貝特緩釋膠囊（上海愛的發制藥有限公司，批號為20180709，規格為每粒250 mg）；非諾貝特原料藥（江蘇恩華藥業集團有限公司，批號為171021）；Eudragit NE30D 丙烯酸樹脂水分散體（德國羅姆公司，批號為G090918109）；羥丙甲基纖維素（遼寧奧達制藥有限公司，批號為20180602）；滑石粉（廣西龍勝華美滑石開發有限公司，批號為1612075）；十二烷基硫酸鈉（湖南九典宏陽制藥有限公司，批號為TF33191103）；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 緩釋微丸制備

2.1.1 載藥微丸制備

取羥丙甲基纖維素（黏度為4 mPa·s）3 g，分散于熱水中，攪拌，冷卻，待溶液澄清后加入非諾貝特原料藥4 g及滑石粉（過100 目篩）0.5 g，混勻，即得上藥液；取空白丸芯（400～500 μm）60 g，置流化床內，采用底噴包衣技術包載藥層。設置包載藥層工藝參數為進風流量10 m3/ h，霧化壓力1.7 bar，噴槍流速 2.5 mL/ min，物料溫度35 ℃，反吹間隔4 s。隨時調整參數至載藥結束，即得載藥微丸。

2.1.2 正交試驗優選微丸制備工藝

采用流化床技術制備載藥微丸時發現，霧化壓力（因素A）、物料溫度（因素B）和噴槍流速（因素C）對微丸制備工藝的影響較大。故以這3 個參數為考察因素，以7 h 的藥物累積釋放率為評價指標，采用L（934）正交試驗優化制備工藝。因素與水平見表1，正交試驗設計及結果見表2。

表1 因素與水平Tab.1 Factors and levels of L9（34） orthogonal test

表2 L9（34）正交試驗設計及結果（n=9）Tab.2 Design and results of L9（34） orthogonal test（n=9）

采用Design Expert 8.0.6 軟件進行試驗設計與數據分析。由表2 可知，影響微丸釋放度的順序由大至小為因素C>因素A>因素B。直觀分析擬訂最優方案為A1B3C3，即霧化壓力為1.7 bar，物料溫度為35 ℃，噴槍流速為2.5 mL/min。

2.1.3 載藥緩釋微丸制備

取十二烷基硫酸鈉和滑石粉（過100 目篩）各1 g，加入丙烯酸樹脂水分散體和適量超純水稀釋至固體含量（按丙烯酸樹脂水分散體計）為10%，即得緩釋層包衣液，采用流化床包衣技術將其包裹于載藥微丸上。設置包衣工藝條件為進風流量9 m3/h，霧化壓力1.7 bar，噴槍流速2.5 mL/min，物料溫度35 ℃，反吹間隔5 s。隨后適當固化衣膜，得到載藥緩釋微丸。

2.2 標準曲線建立

2.2.1 色譜條件

色譜柱：Dikma Diamonsil C18柱（200 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：水（磷酸調pH 至2.5）- 乙腈（25∶75，V/V）；流速：1 mL/min；檢測波長：286 nm；柱溫：25 ℃；進樣量：20 μL。

2.2.2 線性關系考察

取非諾貝特對照品20 mg，精密稱定，置100 mL 容量瓶中，加入適量流動相溶解并稀釋至刻度，用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得對照品貯備液。分別精密吸取0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mL對照品貯備液，置50 mL容量瓶中，加入流動相稀釋至刻度，即得質量濃度分別為2.0，4.0，6.0，8.0，10.0，12.0 μg/mL 的系列對照品溶液，按2.2.1 項下色譜條件進樣測定，以非諾貝特質量濃度為橫坐標（X，μg/mL）、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y=29 450X+88.457（r=0.999 6，n=6）。結果表明，非諾貝特質量濃度在2.0～12.0 μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

2.3 體外釋放度試驗

按2020 年版《中國藥典（四部）》中的槳法［8］，設置參數，轉速為120 r/min，溶出介質為10 g/L 十二烷基硫酸鈉溶液（助溶劑），溶出體積為1 000 mL，溫度為36.5～37.5 ℃。依法操作，分別于1，2，4，7，12 h 時吸取供試品溶液各10 mL，濾過，立即向所操作容器中補充10 mL 溶出介質，精密量取 2 mL 續濾液，置 50 mL 容量瓶中，加入流動相稀釋并定容，按2.2.1 項下色譜條件進樣測定3次，計算供試品溶液在不同時間的累積釋放率。結果自制制劑與參比制劑的釋藥時間基本一致，表明自制制劑體外釋放度良好。詳見圖1。

圖1 自制制劑與參比制劑的體外釋放曲線（n=5）Fig.1 Release profiles of the homemade preparation and reference preparation in vitro（n=5）

2.4 緩釋微丸體外釋放度影響因素考察

老化時間：將按上述優化條件制備好的載藥緩釋微丸置40 ℃烘箱中，分別于老化0，5，10，15，20 h 時按2.3項下方法測定體外釋放度，繪制體外釋放曲線（圖2）。結果表明，藥物的體外釋放度隨老化時間的延長而減慢，但當老化時間達到10 h 以上時，體外釋放度未見明顯變化，表明緩釋微丸的衣膜已愈合完全，藥物釋放趨于穩定，故老化時間確定為10 h。

圖2 老化時間對緩釋微丸體外釋放度的影響（n=5）Fig.2 Effects of aging time on the release of sustained-release pellets in vitro（n=5）

包衣增量：由本制劑通過空白丸芯經過包覆藥物層及緩釋層衣膜而延緩藥物的釋放，釋放機制為膜滲透型，故緩釋層包衣的增量會直接影響藥物的釋放。采用丙烯酸樹脂分別增量10%，15%，20%，25%，30%，測定藥物1，4，7 h 的累積釋放量是否符合藥典規定的10%～30%、50%～75%、75%以上。結果當包衣增量為10%，15%時，藥物出現了突釋現象；當包衣增量為25%～30%時，藥物出現了遲釋現象；當包衣增量為20%時緩釋效果良好。故最終包衣增量選擇20%。詳見圖3。

圖3 包衣增量對緩釋微丸體外釋放度的影響（n=5）Fig.3 Effects of coating increment on the release of sustained-release pellets in vitro（n=5）

2.5 載藥緩釋微丸掃描電子顯微鏡表征

按優選工藝制備載藥緩釋微丸，采用掃描電子顯微鏡進行體外表征。結果微丸衣膜較平整光滑，圓整度好（圖4 A 和圖4 B）；明顯看到空白丸芯，藥物及緩釋層清晰可見（圖4 C）；可觀察到微丸表面成膜材料致密規則（圖4 D）。結果表明，包衣效果較理想。

圖4 緩釋微丸表面及橫切面掃描電子顯微鏡表征A-B.Plans C.Section D.Partial enlargementFig.4 SEM characterizations of the surface and cross-section of sustained-release pellets

3 討論

非諾貝特為生物藥劑學分類系統Ⅱ類藥物，屬難溶型藥物，溶出度較低，水中溶解度僅為0.8 μg/mL［9］，故口服生物利用度較低。為提高其溶解度，曾考察不同方法，如做成自乳化給藥系統，采用超臨界流體法、乳化固化法、噴霧干燥法等制備微粉化非諾貝特，與乳糖、聚維酮、十二烷基硫酸鈉共研磨，與β- 環糊精制成包合物，采用介孔結構的氧化錫載體載藥等［10-15］，可提高藥物溶出度，但口服后仍可能出現藥物再結晶、藥物突釋、載藥量較小、包封率較低、個體差異較大等問題。由于藥物本身難溶，若制成普通的緩釋片劑會造成藥物遲釋現象，影響療效；而制成微球比表面積較大，藥物包封率及釋放度很難把握。因此，制成比表面積相對適中的緩釋微丸，再包封于膠囊之中，藥物的釋放效果較理想。

非諾貝特緩釋微丸的制備受以下因素影響。1）包衣材料的類型。本試驗中采用緩釋成膜材料，選用的10%丙烯酸樹脂水分散體為中等滲透性非離子型聚合物，其分子結構中不含活性基團，屬非pH 依賴型，且最低成膜溫度只有5 ℃，具有良好的膜抗張強度和拉伸率。2）流化床工藝參數。采用L（934）正交試驗確定最佳工藝參數為霧化壓力1.7 bar，物料溫度35 ℃，噴槍流速2.5 mL/min，制得的微丸平整光滑，圓整度好，包衣效果較理想，釋藥穩定，適合批量生產。

非諾貝特緩釋微丸體外釋放度受以下因素影響。1）對于膜控型制劑，包衣增量對其藥效起決定性作用，本研究中最終確定包衣增量為20%，此時體外釋放效果良好。2）老化時間對膜滲透性及外觀影響較大，故需通過充分的試驗確定最適老化時間，以保證制劑釋藥性能符合要求，且能在貯存期間維持釋藥性能的穩定，本研究中最終確定老化時間為10 h。

綜上所述，本研究中優選的非諾貝特緩釋微丸的制備工藝簡單可行，制備樣品的體外釋放度符合要求，與參比制劑緩釋效果相近，達到了預期的緩釋效果，為開發新劑型奠定了基礎。