長鏈非編碼RNA SChLAP1表達水平在前列腺癌組織中的臨床意義及預后關系

吳昊明, 傅廣波, 2

(1.徐州醫科大學, 江蘇 徐州, 221004; 2.徐州醫科大學附屬淮安市第一人民醫院, 江蘇 淮安, 223300)

前列腺癌是一種常見的男性泌尿系統惡性腫瘤，發病率較高，由于發病隱匿，多數患者確診時已是晚期，嚴重威脅男性生命健康[1-2], 其發病率和死亡率近年來呈逐年增加趨勢[3-4]。目前，有關前列腺癌發生發展、轉移的機制尚未十分明確，隨著分子生物及病理學研究的深入，長鏈非編碼RNA(LncRNA)已被證實在癌癥腫瘤的發生發展中參與調節重要細胞信號通路。LncRNA是可通過多種途徑調控基因表達的非編碼單鏈RNA[5], 對機體的生長、發育及細胞的分化等起到廣泛的調控作用，與包括惡性腫瘤的發病機制密切相關[6]。研究[7]證明，LncRNA可作為癌基因或抑癌基因調控前列腺癌細胞的增殖、遷移、侵襲、凋亡等活動。LncRNA SChLAP1在前列腺癌中可發揮促癌作用，與前列腺癌的惡性程度、轉移以及預后緊密相關[8]。但目前關于LncRNA SChLAP1在前列腺癌中表達的臨床意義及預后關系的研究相對較少。本研究對98例前列腺癌患者腫瘤組織中LncRNA SChLAP1的表達水平進行檢測，并分析LncRNA SChLAP1與腫瘤病理及臨床預后的關系，以期為前列腺癌的臨床診治提供依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將2017年1月—2018年12月接受治療的98例初診前列腺癌患者納入本研究(前列腺癌患者組)。另外按年齡匹配的原則選擇同期接受治療的98例良性前列腺增生患者為對照組。前列腺癌患者年齡48～72歲，平均(59.30±7.12)歲; 前列腺增生患者年齡49～71歲，平均(60.24±6.85)歲, 2組患者年齡比較，差異無統計學意義(P>0.05)。納入標準: 初診患者且臨床診斷符合《前列腺癌診斷治療指南(2014)》中的診斷標準; 治療前未接受過抗腫瘤治療的患者，如化療、放療、激素治療等; 合作性較好，能配合長期隨訪的患者。排除標準: 合并其他惡性腫瘤的患者; 并發嚴重心腦血管疾病或肝腎功能不全的患者; 合作性差，不能配合隨訪的患者; 未能簽署知情同意書的患者。本研究經倫理委員會批準，并且所有患者和家屬均知情同意。收集前列腺癌患者的年齡、腫瘤直徑、Gleason評分、TNM病理分期、組織分化、轉移情況等。

1.2 方法

1.2.1 組織標本的收集: 收集術中癌癥患者手術切除的前列腺癌組織和癌旁正常組織，以及良性前列腺增生患者的增生組織，術后立即于液氮速凍，然后放置于-80 ℃冰箱中保存待測。所有組織標本均經2名以上病理科專家確診。

1.2.2 實時熒光定量聚合酶鏈反應(qRT-PCR)測定病理組織中LncRNA SChLAP1的表達: 取出待測組織約50～100 mg, 用4 ℃預冷的磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗，然后將組織置于Cryomill全自動冷凍研磨儀，加入液氮維持低溫，研碎組織成為微細顆粒狀，加入PE離心管。使用MiniBEST Plant RNAExtraction Kit試劑盒(日本TaKaRa公司)，根據說明書提供各組織樣本的總RNA。使用Nano Drop 2000分光光度計測定260、280 nm的吸光度(A)值，控制A260/A280在1.9～2.1, RNA 電泳檢測其完整性。以總RNA為模板，使用Fast Quant RT Kit逆轉錄試劑盒[天根生化科技(北京)有限公司]合成第一鏈cNDA。取出2 μL產物進行qRT-PCR反應。qRT-PCR反應體系: cDNA 1 μL, 2×Super Real Pre Mix Plus(SYBR Green)10 μL, 上下游引物各1 μL，補純凈水至20 μL。qRT-PCR反應條件: 94 ℃ 預變性4 min, 94℃變性30 s, 60 ℃退火20 s, 72 ℃延伸60 s, 循環40次，采用2-△△Ct法計算待測樣本LncRNA SChLAP1的相對表達量。引物由天根生化科技(北京)有限公司合成，引物序列見表1。

表1 qRT-PCR引物序列

1.2.3 治療與隨訪: 所有患者均行前列腺癌根治性切除術，并且根據《前列腺癌診斷治療指南(2014)》推薦的前列腺癌治療方案進行術后對癥治療，包括化療、放療及不良反應防控等。所有患者術后每3個月進行電話隨訪，收集患者的總生存期(OS)和無病生存期(DFS)信息，隨訪截止日期為2021年6月30日或患者死亡。截至隨訪時，前列腺癌患者組共有56例患者生存, 42例患者死亡。

1.3 統計分析

2 結 果

2.1 前列腺癌組織、癌旁正常組織及良性前列腺增生組織中LncRNA SChLAP1表達水平

前列腺癌組織中LncRNA SChLAP1表達水平高于癌旁正常組織和良性前列腺增生組織，差異有統計學意義(P<0.01); 癌旁正常組織和良性前列腺增生組織中LncRNA SChLAP1表達水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見圖1。

與前列腺癌組織比較, **P<0.01。

2.2 前列腺癌患者術后生存情況

98例患者術后隨訪時間為30～54個月，隨訪中位數為41個月。1、2、3年的無疾病生存率分別為84.69%(83/98)、65.31%(64/98)和46.94%(46/98), 總生存率分別為89.80%(88/98)、76.53%(75/98)和58.16%(57/98)。

2.3 LncRNA SChLAP1表達水平與前列腺癌臨床病理學參數的關系

前列腺癌組織中LncRNA SChLAP1表達水平與患者腫瘤分期、腫瘤分化程度、淋巴結轉移和Gleason評分相關(P<0.05), 而與患者的年齡和腫瘤大小無關(P>0.05)。見表2。

表2 LncRNA SChLAP1表達水平與前列腺癌臨床病理學參數的關系

2.4 LncRNA SChLAP1表達水平對前列腺癌患者DFS和OS的影響

前列腺癌患者腫瘤組織中LncRNA SChLAP1表達水平的中位值為3.565, 以LncRNA SChLAP1表達水平≥3.565為高表達, <3.565為低表達。LncRNA SChLAP1高表達患者的FDS和OS低于LncRNA SChLAP1低表達患者(FDS:χ2=10.584,P<0.001; OS:χ2=17.964,P<0.001)。見圖2。

A: 不同LncRNA SChLAP1表達水平前列腺癌患者的DFS; B: 不同LncRNA SChLAP1表達水平前列腺癌患者的OS。

2.5 前列腺癌患者DFS和OS的影響因素

腫瘤分期、腫瘤分化程度、淋巴結轉移、Gleason評分和LncRNA SChLAP1表達水平均為前列腺癌患者DFS和OS的影響因素(P<0.05)。見表3、表4。

表3 前列腺癌患者DFS影響因素的Cox回歸分析

表4 前列腺癌患者OS影響因素的Cox回歸分析

3 討 論

LncRNA是一類由超過200個核苷酸組成的RNA, 由于缺乏開放閱讀框而不能編碼蛋白質，最初被認為不具有生物學功能[9]。LncRNA 可通過與DNA、RNA或蛋白質相互作用調控基因的表達[10-11]。LncRNAs可以干涉調節轉錄和翻譯、調節細胞分化、調控細胞周期和細胞增殖、細胞凋亡、上皮-間質轉化調控、染色質修飾和細胞核-細胞質之間的運輸等多種過程。LncRNA在多種惡性腫瘤中異常表達，發揮關鍵的調控作用，與腫瘤的發生發展密切相關[12], 并且在作為臨床預后標志物及預測治療模式風險等方面起著非常重要的作用[13]。LncRNA在前列腺癌的發生發展中起重要作用，目前發現與前列腺癌相關的LncRNA主要包括PSLNR、GASL1、PANDAR和FEZF1-AS1等。

LncRNA SChLAP1, 也稱LINC00913, 位于2號染色體基因座，在前列腺癌呈現出高表達[14]。LncRNA SChLAP1的高表達與前列腺癌的臨床預后高度相關，可以作為患者預后不良的獨立風險預測指標[8, 15]。高表達LncRNA SChLAP1的患者更容易發展成致死性前列腺癌[16], 包括腫瘤的轉移和前列腺癌特異性死亡。李萍等[17]研究顯示, SChLAP1可以調節前列腺癌細胞的凋亡，而微小RNA-101-5p(miR-101-5p)是其下游的靶點之一。本研究結果顯示，前列腺癌組織中LncRNA SChLAP1的表達水平較癌旁正常組織和良性前列腺增生組織顯著增加，與上述文獻報道結果一致。前列腺癌組織中LncRNA SChLAP1表達水平與患者腫瘤分期、腫瘤分化程度、淋巴結轉移和Gleason評分有關，提示LncRNA SChLAP1可能參與前列腺癌的發生發展。Kaplan-Meier生存曲線分析顯示, LncRNA SChLAP1高表達患者的FDS和OS較LncRNA SChLAP1低表達患者均顯著降低; Cox風險回歸模型分析發現, LncRNA SChLAP1表達水平均為前列腺癌患者DFS和OS的影響因素，表明LncRNA SChLAP1可作為前列腺癌臨床預后的評價指標。

綜上所述, LncRNA SChLAP1在前列腺癌患者組織中呈高表達，并且可能與前列腺癌的發生發展有關，其可作為前列腺癌的臨床預后評價指標。