TGF-β1、HIF-1α 在輸卵管妊娠中的表達(dá)和意義

金力榮，楊麥青，徐洪波，魏燕妮

（1.昌邑市人民醫(yī)院產(chǎn)科，山東 昌邑 261300；2.昌邑市人民醫(yī)院病理科，山東 昌邑 261300；3.濰坊市人民醫(yī)院病理科，山東 濰坊 261041；4.昌邑市人民醫(yī)院輸血科，山東 昌邑 261300；5.濰坊護(hù)理職業(yè)學(xué)院健康管理系，山東 濰坊 261041）

當(dāng)受精卵植入子宮腔外時(shí)，就會(huì)發(fā)生異位妊娠，其是婦產(chǎn)科常見的急腹癥。在美國(guó)，異位妊娠的患病率為1%～2%，占妊娠相關(guān)死亡的2.7%[1]。而異位妊娠中以輸卵管妊娠最為常見，嚴(yán)重者可以因破裂導(dǎo)致孕婦死亡[2，3]。因此，早期發(fā)現(xiàn)和診斷異位妊娠對(duì)于孕早期的產(chǎn)婦尤其重要。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（TGF-β）由3 種亞型（TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3）組成，TGF-β1是一種多功能細(xì)胞因子，參與調(diào)節(jié)維持機(jī)體細(xì)胞分化、凋亡和免疫穩(wěn)態(tài)過程[4-6]。任何原因引起的TGF-β1水平改變，均會(huì)導(dǎo)致機(jī)體免疫穩(wěn)態(tài)的失衡，從而導(dǎo)致各種疾病的發(fā)展[7-9]。在慢性腎炎、骨折愈合、癌癥等疾病形成過程中都發(fā)現(xiàn)有TGF-β1表達(dá)水平的改變[8-10]。低氧誘導(dǎo)因子1（HIF-1）已被證明是低氧反應(yīng)基因表達(dá)的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，在氧平衡調(diào)節(jié)過程中起著重要的作用，它有2 個(gè)亞基HIF-1α 和HIF-1β，而HIF-1α 決定其生理活性[11，12]，調(diào)節(jié)多種血管生成因子的基因表達(dá)，在葡萄胎代謝、新生血管形成等過程中至關(guān)重要，并參與多種疾病的發(fā)生[13-16]。本研究通過檢測(cè)輸卵管妊娠患者血清TGF-β1表達(dá)水平，分析其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系和與HIF-1α 表達(dá)的相關(guān)性，來探索TGF-β1、HIF-1α在輸卵管妊娠的作用，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019 年1 月-2021 年9 月昌邑市人民醫(yī)院產(chǎn)科就診并經(jīng)過臨床診斷的輸卵管妊娠患者40 例（停經(jīng)6～8 周）設(shè)為實(shí)驗(yàn)組，將同期進(jìn)行產(chǎn)檢的30 名健康產(chǎn)婦設(shè)為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有納入對(duì)象均是漢族，Torch 檢查無異常；年齡20～45 歲；肝功、甲狀腺功能、心臟、肺功能均正常。排除標(biāo)準(zhǔn)：存在高血壓病、糖尿病、免疫性疾病者；生殖器解剖異常者；腫瘤史者。兩組年齡、產(chǎn)次、孕次、體質(zhì)指數(shù)、血壓比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），可對(duì)比，見表1。所有納入對(duì)象均知情同意并簽署知情同意書。

表1 兩組一般資料比較（）

表1 兩組一般資料比較（）

1.2 方法 抽取受試者空腹血5 ml，靜置1 h，離心后做好標(biāo)記將血清置于-80℃冰箱凍存?zhèn)溆谩?yīng)用貝克曼庫(kù)爾特AU5800 全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清人絨毛膜促性腺激素β 亞單位（β-hCG）、孕酮（P）水平；采用雙抗體夾心ABC-ELISA 法檢測(cè)血清TGF-β1、HIF-1α 水平。ELISA 試劑盒購(gòu)買自武漢賽培生物科技有限公司，操作時(shí)嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，使用美國(guó)全自動(dòng)酶聯(lián)檢測(cè)儀450 nm 測(cè)定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線及標(biāo)準(zhǔn)公式計(jì)算受試樣本的濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以（）表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以（n）表示，采用χ2檢驗(yàn)；采用Pearson 相關(guān)性分析TGF-β1、HIF-1α的關(guān)系；采用ROC 曲線評(píng)估TGF-β1、HIF-1α 對(duì)輸卵管妊娠的診斷靈敏度；以P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組TGF-β1、β-hCG、P、HIF-1α 水平比較 實(shí)驗(yàn)組血清TGF-β1、HIF-1α、β-hCG、P 水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 兩組TGF-β1、β-hCG、P、HIF-1α 水平比較（）

表2 兩組TGF-β1、β-hCG、P、HIF-1α 水平比較（）

2.2 血清TGF-β1、HIF-1α 低表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 TGF-β1、HIF-1α 低表達(dá)與血清β-HCG、P 有關(guān)（P＜0.05）；而與年齡、孕次、產(chǎn)次、收縮壓、舒張壓、體質(zhì)指數(shù)無關(guān)（P＞0.05），見表3。

表3 輸卵管妊娠患者血清TGF-β1、HIF-1α 與臨床病理參數(shù)的關(guān)系（n）

2.3 血清TGF-β1與HIF-1α的相關(guān)性分析 TGF-β1低表達(dá)與HIF-1α 低表達(dá)呈正相關(guān)（r＝0.341，P＝0.016），見圖1。

圖1 TGF-β1 與HIF-1α的相關(guān)性分析

2.4 血清TGF-β1與HIF-1α 在輸卵管妊娠中的診斷效能分析 ROC 曲線分析顯示，血清TGF-β1低表達(dá)用于診斷輸卵管妊娠的曲線下面積是0.721（P＝0.002）；血清HIF-1α 低表達(dá)用于診斷輸卵管妊娠的曲線下面積是0.692（P＝0.006），見圖2。

圖2 血清TGF-β1、HIF-1α 低表達(dá)在診斷輸卵管妊娠中的ROC 曲線圖

表3（續(xù)）

3 討論

宮外孕的發(fā)病機(jī)制比較復(fù)雜，其危險(xiǎn)因素包括盆腔炎病史、吸煙史、輸卵管手術(shù)史、既往異位妊娠史和不孕癥。異位妊娠是妊娠早期孕產(chǎn)婦死亡率的主要原因，任何妊娠早期出現(xiàn)陰道出血或下腹疼痛且尚未確定宮內(nèi)妊娠的患者都應(yīng)考慮宮外孕[1]。宮外孕中輸卵管妊娠約占其中的98%，輸卵管妊娠據(jù)著床部位的不同可以分為壺腹部妊娠、峽部妊娠、傘部妊娠和間質(zhì)部妊娠[17，18]。由于輸卵管的管腔狹窄且管壁較薄，伴隨孕囊的生長(zhǎng)，比較容易破裂，但輸卵管免疫細(xì)胞的組成、表型和活性的改變都有助于輸卵管妊娠的發(fā)生。

TGF-β1是TGF-β 亞型的一種，在多個(gè)方面上控制細(xì)胞的生長(zhǎng)。在成人機(jī)體中，TGF-β1對(duì)免疫細(xì)胞的發(fā)育和成熟至關(guān)重要，維持免疫耐受和內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，并調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的各個(gè)方面。TGF-β1能夠顯著抑制Th 淋巴細(xì)胞的激活和增殖，在B 細(xì)胞和漿細(xì)胞生物學(xué)的調(diào)節(jié)中也起著關(guān)鍵作用，從而限制炎癥可能導(dǎo)致的組織破壞性反應(yīng)[19]。有文獻(xiàn)報(bào)道[20]，TGF-β1在早期自然流產(chǎn)中表達(dá)降低，并且TGF-β1的表達(dá)與血清β-hCG、P 和雌激素水平有關(guān)，提示TGF-β1參與維持正常妊娠過程。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組血清TGF-β1低于對(duì)照組，且其與β-hCG、P的表達(dá)有關(guān)（P＜0.05），提示TGF-β1參與了輸卵管妊娠的發(fā)生、發(fā)展，其表達(dá)水平降低，可能通過致纖維化作用降低和改變炎細(xì)胞炎性因子的分泌，從而改變?cè)心抑膊课焕w維組織修復(fù)和炎細(xì)胞浸潤(rùn)的平衡，導(dǎo)致輸卵管妊娠的發(fā)生。

HIF-1α的水平主要靠氧氣濃度來調(diào)節(jié)。當(dāng)細(xì)胞微環(huán)境氧氣濃度正常時(shí)，HIF-1α 可被泛素化降解，維持正常的表達(dá)水平，但當(dāng)細(xì)胞缺氧時(shí)，HIF-1α的降解受阻，濃度就會(huì)升高，從而會(huì)啟動(dòng)與低氧耐受相應(yīng)的轉(zhuǎn)錄過程[14-16]。有研究報(bào)道[12-14]，HIF-1α 在癌癥、骨質(zhì)疏松、心肌梗死等疾病中異常表達(dá)，參與了這些疾病的發(fā)生、發(fā)展，并且在高齡孕婦易流產(chǎn)疾病研究和妊高癥研究中也發(fā)現(xiàn)有HIF-1α的異常表達(dá)，說明HIF-1α 在妊娠過程中有一定的作用。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組血清HIF-1α 低于對(duì)照組，且其與β-hCG、P的表達(dá)有關(guān)（P＜0.05），提示HIF-1α 參與了輸卵管妊娠的發(fā)展過程。孕囊早期的血供對(duì)于維持孕囊正常發(fā)育起著重要的作用，血管形成不足會(huì)導(dǎo)致低氧影響孕囊的發(fā)育。HIF-1α 在輸卵管妊娠患者血清中顯著降低，提示輸卵管妊娠中這些異位孕囊所處的微環(huán)境不能有效調(diào)控低氧情況。此外，本研究相關(guān)性分析顯示，TGF-β1低表達(dá)與HIF-1α低表達(dá)呈正相關(guān)（r＝0.341，P＝0.016），說明TGF-β1與HIF-1α 在輸卵管妊娠中的作用是協(xié)同作用。ROC 曲線分析顯示，血清TGF-β1低表達(dá)用于診斷輸卵管妊娠的曲線下面積是0.721（P＝0.002）；血清HIF-1α 低表達(dá)用于診斷輸卵管妊娠的曲線下面積是0.692（P＝0.006），提示TGF-β1、HIF-1α 低表達(dá)對(duì)于輸卵管妊娠有一定的診斷意義。

綜上所述，輸卵管妊娠患者血清TGF-β1、HIF-1α的表達(dá)降低，TGF-β1、HIF-1α 低表達(dá)與β-hCG、P的表達(dá)有關(guān)，且血清TGF-β1、HIF-1α 低表達(dá)在輸卵管妊娠診斷中的敏感性較高。