牛病毒性腹瀉病毒在新疆褐牛不同飼養階段的感染情況調查

努爾賽力克·努素甫，阿斯哈提·哈山，王海軍，陳榮貴*

（1.新源縣農業農村局，新疆 新源縣 835800；2.新疆伊犁州動物疾病控制與診斷中心）

牛病毒性腹瀉病（Bovine viral diarrhea，BVD）是由牛病毒性腹瀉病毒（Bovine viral diarrhea virus，BVDV）引起的一種重要的牛傳染性疾病，臨床上發病率高，傳染性強，一般以發熱、白細胞減少、口腔等消化道黏膜糜爛、壞死和腹瀉為主要癥狀[1]。BVDV不僅可感染牛，也能感染山羊、綿羊、鹿等反當動物。同時也是生物制品血清、凍精的主要污染源。該病呈世界性區域分布，給全球畜牧業造成了巨大的經濟損失[2]。中華人民共和國農業部發布第96號公告（2008年），將BVD定為三類疫病，世界動物衛生組織（OIE）也將該病列為法定報告的動物疫病及國際動物胚胎交流病原名錄三類疫病。

新疆牛存欄數一直居全國前列，不同地區也存在BVDV 感染。王龍[3]對新疆16 個不同牛場1 171份牛血清進行抗原和抗體檢測，結果表明，BVDV 抗體陽性率高達90.0%～98.5%，抗原陽性率為1.5%。王青青[4]對新疆南疆地區的14 個規模化奶牛場采集的1 555 份血清樣品進行檢測，結果顯示，BVDV平均抗體陽性率為84.48%，抗原陽性率為0.78%，可見BVDV 在新疆地區的感染率非常高。目前關于新疆伊犁哈薩克自治州褐牛BVDV感染的報道較少，為了解BVDV在伊犁哈薩克自治州褐牛規模化養殖場不同飼養階段的感染情況，我們進行了BVDV抗原和抗體檢測，以為該病的疫苗免疫和凈化提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 血清樣品

在新疆伊犁哈薩克自治州某褐牛場針對哺乳期犢牛（0～3月齡）、斷奶期犢牛（4～6月齡）、育成牛（6～12月齡）、育肥牛（12～18月齡）、妊娠母牛和哺乳母牛分別采集2份血液樣品，一份分離血清，另一份加入肝素抗凝，-20 ℃保存備用。

1.1.2 實驗設備

微量移液器、伯樂酶標儀、高速冷凍離心機（Thermo 公司）、PCR儀（Thermo 公司）、恒溫生化培養箱、生物安全柜、瓊脂糖凝膠電泳儀和伯樂凝膠成像系統（北京六一儀器廠）等。

1.1.3 主要試劑

牛病毒性腹瀉病毒抗體檢測試劑盒、牛病毒性腹瀉病毒抗原檢測試劑盒，均購自IDEXX公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 抗原和抗體ELISA檢測

采用ELISA方法檢測BVDV抗體和抗原，具體步驟按照牛病毒性腹瀉病毒抗體/抗原檢測試劑盒說明書進行檢測。檢測前將試劑盒從4 ℃冰箱中取出恢復至室溫。

1.2.2 結果判定

BVDV抗體ELISA結果判定：當P-N ≥0.150且NC≤0.25時，檢測結果有效。腹瀉病毒抗體是否存在由S/P值決定：S/P ＜0.20，BVDV抗體陰性；0.2 ＜S/P ≤0.3，BVDV抗體可疑；S/P ≥0.30，BVDV抗體陽性。

陰性對照和陽性對照平均值計算公式：

式中：NC為陰性對照OD值的平均值；PC為陽性對照OD值的平均值；P-N為PC與NC之差。

BVDV抗原ELISA結果判定：被檢樣品OD值-陰性對照OD值≤0.300，判定為抗原陰性；＞0.300，判定為抗原陽性。

1.2.3 數據分析

對所有檢測數據用Excel軟件進行匯總分析。

2 結果與分析

2.1 血清抗體檢測結果

由表1可知，6個不同飼養階段牛群血清中和試驗檢測的BVDV陽性率分別為85.0%、38.7%、85.2%、87.0%、82.5%和89.8%，其中斷奶期犢牛（4～6月齡）抗體陽性率最低，哺乳母牛抗體陽性率最高。621份樣品中，總抗體陽性率為80.2%。牛BVDV抗體陽性率所反映的是牛以往感染BVDV的情況以及母源抗體或疫苗免疫狀況，說明80.2%的牛具備抵抗BVDV感染的能力。通過血清學檢測BVDV抗體陽性率，對伊犁地區褐牛牛病毒性腹瀉的防治有一定的參考價值。

表1 不同飼養階段褐牛牛病毒性腹瀉病毒抗體檢測結果

2.2 抗原檢測結果

表2 不同飼養階段褐牛牛病毒性腹瀉病毒抗原檢測結果

6個不同飼養階段牛群的樣品抗原檢測的陽性率分別為0%、0%、0%、0.8%、0%和0.9%。在育肥牛和哺乳母牛牛群中各檢測出1頭抗原陽性牛，可能為持續感染牛（persistentlyinfected，PI），并在2周后對這2頭陽性牛進行復檢，檢測結果仍為陽性，因此，判定這2頭陽性牛為PI牛，建議牛場進行隔離清除。

3 結論與討論

BVD一直以來都是威脅牛群健康的重要傳染性疾病之一，會對牛群生育力、呼吸系統、消化系統、產奶量等產生嚴重的影響，進而影響中國畜牧業的快速發展。根據歐洲國家的BVD防控經驗，我們應在以下方面做好相關工作：（1）快速識別和剔除持續感染牛；（2）密切監測牛場的BVD感染狀況；（3）嚴格限制妊娠動物移動；（4）嚴格落實養殖場生物安全措施，高效保護易感動物。在牛養殖密度高的地區，BVD只能通過預防與接種疫苗相結合來控制。在以往的BVD流行病學調查中，主要調查整個養殖場牛血清的陽性率，很少報道和分析不同飼養階段牛的血清陽性率。本研究調查發現，3～6月齡斷奶犢牛血清抗體陽性率為38.7%，遠低于平均抗體陽性率（80.2%），感染風險最高，其他飼養階段血清陽性率都在80%以上，推測3～6月齡犢牛血清抗體陽性率較低的主要原因可能是母源抗體消減導致。因此，建議在進行疫苗免疫時，重點對3～6月齡斷奶犢牛進行免疫防控。

依據BVDV血清抗體陽性率超過80%的牛場判定為高風險牛場的標準[5]，本研究中該牛場總抗體陽性率為80.2%，超過80%，因此，有可能存在PI牛。通過進一步進行PI牛的篩查，檢測篩查到2頭PI牛。隨著診斷技術的發展，運用ELISA方法檢測BVDV抗原和抗BVDV特異性抗體的技術在不斷改進，使得低成本實現大規模篩選成為可能。通過病毒學篩查，可以識別并消除持續感染的動物，從而達到對牛場BVDV的凈化。