血清CXCL12及其受體CXCR4、CXCR7水平對宮頸癌復發的預測價值

徐 鳴，全培青，王秋梅，張文倩，俞劍娣，張 璐

復旦大學附屬婦產科醫院婦科，上海 200090

宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤之一，僅次于乳腺癌的發病率，死亡率位居第4位。我國每年宮頸癌新發患者13萬例，占全球宮頸惡性腫瘤新發患者的28%，且近年來惡性腫瘤患病呈年輕化趨勢[1-2]。宮頸癌早期癥狀常常不典型，待出現癥狀和體征后，一般腫瘤都有浸潤，并且預后較差。由于缺乏早期診斷宮頸癌的特異性腫瘤標志物，因此，尋找對宮頸癌早期診斷特異度和靈敏度高的指標成為研究熱點[3-4]。趨化因子是一類重要的免疫調節因子，可以通過與G蛋白偶聯受體進行相互作用，引起靶細胞的支架重構，并黏附于內皮細胞，進行定向的遷移。趨化因子C-X-C基元配體12(CXCL12)與其特異性的受體結合，通過信號通路引起細胞增殖和遷移，在腫瘤的發生和發展過程中均有重要作用[5-6]。在對乳腺癌患者的研究中發現CXCL12及其受體(CXCR4和CXCR7)是影響患者生存情況的獨立危險因素，其在乳腺癌的發生和轉移過程中具有重要作用，是乳腺癌診斷的重要生物標志物[7]。但CXCL12及其受體是否參與了宮頸癌的發生過程仍不清楚，本研究檢測宮頸癌患者血清CXCL12及其受體表達水平，探討其對宮頸癌復發的預測價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2016年1月至2017年12月在本院婦科行手術治療的113例宮頸癌患者為宮頸癌組，年齡32～75歲，平均(46.72±10.38)歲。納入標準：所有患者符合國際婦產科聯合會分類和診斷標準，并經病理檢查確診為宮頸癌；均接受手術治療；術前未接受放療、化療和激素治療等。排除標準：其他惡性腫瘤；肝炎、結核和急性肺炎等急、慢性炎癥；免疫性和血液性疾病。選擇本院同期75例診斷為宮頸上皮內瘤病變(CIN)的患者為CIN組，年齡35～76歲，平均(46.27±9.27)歲。另選擇同期本院45例體檢健康女性為對照組，年齡32～78歲，平均(46.92±11.82)歲。3組年齡差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經醫院倫理委員會審核通過，所有受試者均簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1標本采集和檢測 分別于宮頸癌患者入院時、手術后，CIN患者初次就診時，以及健康體檢者體檢當天采集所有受試者肘靜脈血約5 mL左右，標本室溫下靜置約20 min，然后以離心半徑15 cm、3 000 r/min離心10 min，取上清液約3 mL，放置在-80 ℃冰箱中保存待測。采用酶聯免疫吸附試驗測定血清CXCL12、CXCR4、CXCR7水平，所有試劑盒購自R&D公司，檢測過程嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.2.2觀察指標 記錄各組血清CXCL12、CXCR4、CXCR7水平，分析其與宮頸癌患者臨床病理特征的關系，及其對宮頸癌患者3年內復發的預測價值。

1.2.3隨訪 以患者術后第1天作為隨訪起點，采用電話、微信、QQ，住院和門診相結合的方式對患者隨訪3年。第1年每3個月隨訪1次，之后每6個月隨訪1次。所有患者無死亡，均參與了隨訪，以宮頸癌患者出現復發為終點事件。根據是否出現終點事件，將宮頸癌患者分為復發組和未復發組。

2 結 果

2.13組血清CXCL12、CXCR4、CXCR7水平比較 宮頸癌組手術前血清CXCL12、CXCR4、CXCR7水平明顯高于CIN組和對照組(P<0.05)，CIN組血清CXCL12、CXCR4、CXCR7水平明顯高于對照組(P<0.05)，見表1。

表1 3組血清CXCL12、CXCR4和CXCR7水平比較

2.2宮頸癌患者手術前、后血清CXCL12、CXCR4和CXCR7水平比較 宮頸癌患者手術后血清CXCL12、CXCR4、CXCR7水平分別為(5.82±1.27)pg/L、(21.82±3.28)pg/mL、(1.97±0.76)ng/L，與手術前比較，均明顯降低(t=22.777、30.258、23.062，P<0.05)。

2.3宮頸癌患者手術前血清CXCL12、CXCR4、CXCR7水平與宮頸癌患者臨床病理特征的關系 血清CXCL12、CXCR4、CXCR7水平在不同臨床分期、浸潤深度和有無淋巴轉移、血管浸潤的宮頸癌患者中差異有統計學意義(P<0.05)，在不同年齡、病理類型、腫瘤最大徑、組織分化程度和是否絕經的宮頸癌患者中差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。

表2 宮頸癌患者血清CXCL12、CXCR4、CXCR7水平與臨床病理特征的關系

2.4復發組與未復發組宮頸癌患者血清CXCL12、CXCR4、CXCR7水平比較 復發組21例，未復發組92例。復發組血清CXCL12、CXCR4、CXCR7水平明顯高于未復發組(P<0.05)，見表3。

表3 復發組與未復發組宮頸癌患者血清CXCL12、CXCR4、CXCR7水平比較

2.5血清CXCL12、CXCR4、CXCR7檢測對宮頸癌復發的預測效能 繪制CXCL12、CXCR4、CXCR7檢測預測宮頸癌復發的ROC曲線，分析結果顯示，CXCL12、CXCR4、CXCR7聯合檢測預測宮頸癌復發的曲線下面積(AUC)為0.969，明顯高于CXCL12的0.791(Z=2.977，P=0.003)、CXCR4的0.804(Z=2.955，P=0.003)和CXCR7的0.856(Z=2.437，P=0.015)，而3項指標單獨檢測預測宮頸癌復發的AUC差異無統計學意義(P>0.05)，見表4、圖1。

表4 血清CXCL12、CXCR4、CXCR7對宮頸癌復發的預測效能分析

圖1 血清CXCL12、CXCR4、CXCR7檢測預測宮頸癌復發的ROC曲線

3 討 論

宮頸癌發生轉移是一個多步驟的復雜過程，首先從原發腫瘤部位脫落，侵犯周圍組織，并發生黏附，侵入淋巴管和血管，并將腫瘤細胞轉移到其他部位，形成相同類型的繼發性腫瘤。腫瘤在發生、發展過程中，多種細胞因子起到重要作用。近年來，“趨化吸引理論”已經成為腫瘤轉移的研究熱點。趨化因子是指由白細胞和其他基質細胞分泌，可以結合于內皮細胞表面，對中性粒細胞、淋巴細胞和單核細胞具有趨化和激活作用的細胞因子。趨化因子的作用是趨化細胞的遷移，使細胞從趨化因子信號增加的部位向趨化因子源處遷移。腫瘤轉移是惡性腫瘤死亡的主要原因，早期診斷和早期干預，是提高腫瘤患者生存期的重要手段。

CXCL12是目前研究比較多的趨化因子，主要包括α和β兩種異構體，其與受體CXCR4結合的信息傳遞生物學軸在腫瘤細胞的增殖和遷移過程中具有重要作用[8]。近年來大量的研究發現CXCL12與特異性受體CXCR4結合，參與了多種惡性腫瘤的轉移過程[9-10]。CXCR4高表達的惡性腫瘤具有更強的侵襲能力，并且與淋巴轉移也密切相關。本研究顯示，宮頸癌組血清CXCL12和CXCR4水平較CIN組和對照組明顯升高(P<0.05)，而手術后宮頸癌組血清CXCL12和CXCR4水平較手術前明顯降低(P<0.05)，說明血清CXCL12和CXCR4水平升高與宮頸癌有明顯的關系。在對宮頸癌的研究中發現，CXCR4-CXCL12軸在宮頸癌轉移中發揮著重要作用，包括調控腫瘤部位白細胞浸潤，調節腫瘤細胞血管生成，激活免疫應答，刺激腫瘤細胞的增殖和轉移，下調CXCR4的表達能夠明顯減少宮頸癌細胞的黏附能力[11]。本研究發現，在臨床分期高、有淋巴轉移、浸潤深度>1/2肌層和有血管浸潤的宮頸癌患者中血清CXCL12和CXCR4水平更高(P<0.05)，說明血清CXCL12和CXCR4水平與宮頸癌臨床分期、淋巴轉移和浸潤深度有密切關系。ROC曲線分析顯示，當血清CXCL12>13.10 pg/L時，其預測宮頸癌復發的靈敏度為66.7%，特異度為82.6%，AUC為0.791；當血清CXCR4>67.13 pg/mL時，其預測宮頸癌復發的靈敏度為61.9%，特異度為96.7%，AUC為0.804，說明CXCL12和CXCR4對宮頸癌復發均有一定的預測效能。當CXCL12和CXCR4水平達到最佳臨界值時，是否需要采取進一步的干預措施，從而達到改善預后的目的，仍需要在未來的研究中進行明確。

本研究還顯示，宮頸癌組血清CXCR7水平明顯高于CIN組和對照組(P<0.05)，說明CXCR7參與了宮頸癌的發生、發展。現已知CXCR7作為CXCL12的第二受體，其生物學功能與其在組織和器官中的表達水平和誘導信號的反應能力密切相關[12]。CXCR7既可以作為非信號受體，也可以作為信號受體，從而發揮不同的作用[13]。CXCR7作為非信號受體雖然不如其他CXCR受體一樣與G蛋白偶聯，激活下游通道，但不影響CXCR7和CXCL12結合后的內化作用[14]。而CXCR7作為信號受體，與CXCL12結合后如何介導信號轉導的機制仍不清楚，現有研究表明，CXCR7可以協同CXCR4增強CXCL12介導G蛋白信號轉導作用，提高細胞的增殖、遷移和黏附能力[15]；同時CXCR7可以作為CXCL12清道夫受體，可以清除腫瘤微環境中的CXCL12，防止腫瘤細胞CXCR4的脫敏，促使CXCR4一直保持信號轉導作用，促進腫瘤的發生、發展[16]。現有研究證實，CXCR7-CXCL12軸具有促進腫瘤增殖、血管生成和抗凋亡的作用，與CXCR4-CXCL12軸的生物效應一致[17]。本研究證實宮頸癌患者血清CXCR7水平與臨床分期、淋巴轉移、浸潤深度和血管浸潤具有明顯關系，而且宮頸癌復發組血清CXCR7水平明顯高于未復發組(P<0.05)。當血清CXCR7>6.28 ng/L時，其預測宮頸癌復發的靈敏度為57.1%，特異度為100.0%，AUC為0.856，說明CXCR7對宮頸癌復發具有一定的預測價值。CXCL12、CXCR4、CXCR7聯合檢測預測宮頸癌復發的AUC為0.969，明顯高于3項指標單獨檢測測預測宮頸癌復發的AUC(P<0.05)，說明聯合檢測預測宮頸癌復發的效能更高。當3項指標均達到最佳臨界值時，對宮頸癌復發具有很高的預測效能，對于這些患者是否需要采取進一步干預措施，從而降低術后復發的發生率，需要進一步研究明確。

綜上所述，CXCL12及其受體CXCR4、CXCR7參與了宮頸癌的發生、發展過程，3項指標聯合檢測對宮頸癌復發具有重要的預測價值。