多發(fā)性骨髓瘤患者骨髓活檢組織中IL-8、CD56的表達(dá)及臨床意義

黃裕林

重慶市開州區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，重慶 405400

多發(fā)性骨髓瘤(MM)為惡性血液系統(tǒng)疾病，其臨床發(fā)病機(jī)制主要與骨髓微環(huán)境、DNA甲基化、基因突變等有關(guān)[1]。近年來，隨著MM新興療法的臨床運(yùn)用，該類患者的生存率得到顯著提高，但該病仍難以治愈[2]。因此，尋找其早期診斷標(biāo)志物意義重大。目前，臨床對(duì)于MM的診斷主要依據(jù)骨髓細(xì)胞檢驗(yàn)、血清指標(biāo)檢驗(yàn)聯(lián)合影像學(xué)檢查[3]。有研究顯示，CD56可介導(dǎo)骨髓瘤細(xì)胞的黏附，其在漿細(xì)胞上呈高表達(dá)[4]。另有研究報(bào)道，白細(xì)胞介素-8(IL-8)能夠促進(jìn)腫瘤進(jìn)展，其可誘導(dǎo)血管生成[5]。為進(jìn)一步探討IL-8、CD56與MM的關(guān)系，本文對(duì)67例MM患者進(jìn)行了研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年1月至2021年5月本院收治的67例MM患者作為MM組。納入標(biāo)準(zhǔn)：均為初發(fā)病例，經(jīng)骨髓形態(tài)學(xué)、X線、免疫球蛋白(Ig)檢查，符合《中國多發(fā)性骨髓瘤診治指南(2015年修訂)》[6]中的診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并自身免疫性疾病、嚴(yán)重感染性疾病、其他惡性腫瘤及近期接受放化療治療等患者。MM組中男41例，女26例；年齡46～73歲，平均(55.26±3.54)歲；Durie-Salmon(D-S)分期[7]：Ⅰ期17例，Ⅱ期38例，Ⅲ期12例。另選取同期于本院就診的35例骨髓象檢查正常的患者作為對(duì)照組，其中男18例，女17例；年齡43～75歲，平均(56.15±2.89)歲。2組性別構(gòu)成、年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法 收集2組骨髓組織，經(jīng)石蠟包埋備用，應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)標(biāo)本中IL-8、CD56的表達(dá)。具體操作步驟：(1)將骨髓切片脫蠟后水化，經(jīng)溫室孵育15 min后，采用磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗骨髓切片3次，每次2 min，滴加一抗(兔抗人IL-8單抗、鼠抗人CD56單抗)，于37 ℃孵育2 h；(2)用吸水紙擦干切片后滴加聚合物輔助劑，于室溫下孵育20 min；(3)滴加辣根酶標(biāo)記的二抗(羊抗兔IgG)，于室溫下孵育20 min，采用PBS沖洗骨髓切片3次，每次2 min，經(jīng)二氨基聯(lián)苯胺染色后清洗切片；(4)經(jīng)蘇木精復(fù)染、脫水、封固后，于顯微鏡下進(jìn)行觀察。

1.3評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)[8]隨機(jī)選取10個(gè)高倍視野(×400)進(jìn)行觀察，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞。細(xì)胞陽性表達(dá)評(píng)分：陽性細(xì)胞占比<10%計(jì)0分，陽性細(xì)胞占比10%～25%計(jì)1分，陽性細(xì)胞占比>25%～50%計(jì)2分，陽性細(xì)胞占比>50%計(jì)3分。細(xì)胞染色強(qiáng)度評(píng)分：無染色計(jì)0分，呈淡黃色計(jì)1分，呈黃色或棕黃色計(jì)2分，呈棕褐色計(jì)3分。以細(xì)胞陽性表達(dá)評(píng)分與細(xì)胞染色強(qiáng)度評(píng)分之和為總分，總分≤1分為陰性(-)，總分2～3分為弱陽性(+)，總分4～5分為中強(qiáng)陽性(++)，總分≥6分為強(qiáng)陽性(+++)。

2 結(jié) 果

2.12組骨髓組織中IL-8、CD56表達(dá)情況比較 與對(duì)照組比較，MM組骨髓組織中IL-8和CD56的陽性表達(dá)率明顯更高(P<0.05)，見表1。

表1 2組骨髓組織中IL-8、CD56表達(dá)情況[n(%)]

表2 IL-8、CD56與MM患者臨床特征的關(guān)系

2.3IL-8和CD56對(duì)MM的診斷效能 根據(jù)漿細(xì)胞表面免疫表型表達(dá)情況對(duì)MM進(jìn)行診斷，以1-特異度為橫坐標(biāo)，以靈敏度為縱坐標(biāo)，繪制IL-8及CD56診斷MM的ROC曲線，結(jié)果顯示，IL-8單獨(dú)檢測(cè)診斷MM的AUC為0.788(95%CI：0.621～0.907，P=0.027)，靈敏度為87.43%，特異度為80.15%；CD56單獨(dú)檢測(cè)診斷MM的AUC為0.754(95%CI：0.596～0.879，P=0.041)，靈敏度為85.03%，特異度為77.93%；IL-8和CD56聯(lián)合檢測(cè)診斷MM的AUC為0.836(95%CI：0.711～0.953，P=0.008)，靈敏度為91.14%，特異度為83.29%，見圖1。

圖1 IL-8、CD56單獨(dú)及聯(lián)合診斷MM的ROC曲線

3 討 論

MM患者常伴發(fā)腎功能異常、骨骼受損、免疫功能低下等癥狀，目前，臨床對(duì)于該病的治療，雖可改善患者預(yù)后，但完全治愈較為困難[9]。臨床資料顯示，MM患者存在B、T細(xì)胞免疫缺陷，尤其是在B細(xì)胞向漿細(xì)胞分化過程中，存在細(xì)胞膜表面Ig、表面抗原大量丟失現(xiàn)象[10]。CD56為跨膜Ig，其在細(xì)胞的生長、遷移過程中發(fā)揮重要作用[11]。有研究報(bào)道，CD56在MM腫瘤細(xì)胞中表達(dá)水平較高，可能成為髓外病變的預(yù)測(cè)指標(biāo)[12]。IL-8為炎癥趨化因子，臨床資料顯示，IL-8表達(dá)于MM患者骨髓基質(zhì)細(xì)胞中，可誘導(dǎo)骨髓瘤細(xì)胞趨化[13]。

本研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組比較，MM組骨髓組織中IL-8和CD56的陽性表達(dá)率明顯更高(P<0.05)，提示IL-8和CD56在MM患者骨髓組織中呈高表達(dá)。通過分析IL-8和CD56與MM患者臨床特征關(guān)系，本研究發(fā)現(xiàn)，不同D-S分期的MM患者骨髓組中IL-8、CD56的陽性表達(dá)率不同，Ⅱ期和Ⅲ期MM患者骨髓組織中IL-8、CD56的陽性表達(dá)率均高于Ⅰ期(P<0.05)，Ⅲ期MM患者骨髓組織中CD56的陽性表達(dá)率高于Ⅱ期(P<0.05)，提示骨髓組織中IL-8、CD56陽性表達(dá)率隨MM的D-S分期增高而升高。分析其機(jī)制可能為：(1)IL-8可能通過影響骨髓瘤漿細(xì)胞增殖及骨髓環(huán)境，刺激漿細(xì)胞繁殖、遷移；(2)CD56可能在骨髓瘤細(xì)胞分化過程中脫落，致使骨髓瘤細(xì)胞與基質(zhì)細(xì)胞不能黏附，骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)入血漿，致骨髓瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移。陳思衍等[14]研究發(fā)現(xiàn)，MM患者骨髓組織中IL-8的陽性表達(dá)率較高，且骨髓瘤分期越高，IL-8陽性表達(dá)率越高。張彩霞等[15]研究報(bào)道，CD56在MM細(xì)胞表面呈陽性表達(dá)。孫歡等[16]研究發(fā)現(xiàn)，CD56的表達(dá)與MM患者臨床分期有關(guān)。以上研究結(jié)果提示，IL-8和CD56對(duì)評(píng)估MM的病情變化、臨床分期等具有一定參考價(jià)值。

本研究顯示，IL-8和CD56聯(lián)合檢測(cè)診斷MM的AUC為0.836，高于IL-8、CD56單獨(dú)檢測(cè)診斷MM的0.788、0.754，提示IL-8和CD56聯(lián)合檢測(cè)診斷MM的效能更高，IL-8、CD56可作為MM的臨床診斷評(píng)價(jià)指標(biāo)。黃垚等[17]研究報(bào)道，CD56與MM的免疫特征、臨床分期有關(guān)，其可作為評(píng)價(jià)MM Ig分型的指標(biāo)。

綜上所述，MM患者骨髓組織中IL-8、CD56的陽性表達(dá)率較高，且其表達(dá)與MM的D-S分期有關(guān)，IL-8和CD56聯(lián)合檢測(cè)可用于MM的臨床診斷。