菜籽粕蛋白的堿溶酸沉工藝優化及其活性研究

翟曉娜，汪 濤，梁 亮，師建芳，謝奇珍，孫 昊，裴海生

（農業農村部規劃設計研究院，農業農村部農產品產后處理重點實驗室，北京 100121）

油菜籽是繼大豆和棕櫚之后的世界第三大植物油原料，餅粕作為其主要加工副產物，占比高達60%～65%，產量巨大。長期以來，菜籽粕絕大部分被用作飼料，附加值較低，但其蛋白質含量可高達30%～45%，且氨基酸組成合理，含有豐富的含硫氨基酸及一定量的賴氨酸，是一種優質的植物蛋白資源，利用前景廣闊[1]。自2010年以來，已有Burcon及DSM等公司生產的菜籽蛋白先后被FDA（U.S. Food and Drug Administration）、EFSA（European Food Safety Authority）批準公認安全的（generally regarded as safe, GRAS）及食品新資源原料，菜籽蛋白正逐步從動物轉向人類營養市場。我國作為油菜籽的生產大國，高附加值利用菜籽粕蛋白對提高油菜籽產業價值鏈意義重大。

油菜籽中的蛋白質主要包括菜籽球蛋白（cruciferin）、菜籽白蛋白（napin）及少量的油質蛋白，其中，菜籽球蛋白的平均分子量約為300～360 kDa、菜籽白蛋白的平均分子量約為14 kDa，分別具有良好的凝膠特性、成膜特性及一定的生物活性，應用前景良好[2?3]。目前，菜籽粕蛋白的制備方法包括：pH分段控制法[4?5]、鹽溶法[6]、酶解法[7]及靜電分離法[8]等，其中，pH分段控制法中的堿溶酸沉法是工業化生產最常用的方法，但仍存在目標蛋白選擇性差且多關注酸沉淀蛋白的問題。同時，在菜籽餅粕蛋白的提取過程中，提高其得率的同時盡可能降低其抗營養物質（如硫苷等）的含量是非常有必要的。因此，本實驗以浙江壓榨菜籽餅粕為原料，以蛋白質和硫苷溶出率、蛋白質沉淀率為主要考察指標，通過單因素與響應面分析對菜籽餅粕蛋白的堿溶酸沉工藝進行優化，并對菜籽粕酸沉淀蛋白及酸溶解蛋白提取物進行分析研究，旨在為拓寬菜籽粕蛋白提取物的應用提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

壓榨菜籽餅粕 購置于浙江嘉興；BSA、PBCl2Sigma；黑芥子硫苷酸鉀一水 上海源葉生物科技有限公司；考馬斯亮藍G-250、ABTS自由基試劑盒、SDS-PAGE凝膠制備試劑盒、預染蛋白Marker（14.4～97.4 kDa） 北京索萊寶科技有限公司；羧甲基纖維素鈉、HCl、NaOH、乙醇等 均為分析純，阿拉丁試劑（上海）有限公司；金黃色葡萄球菌（S.aureus）、大腸桿菌（E.coli）、黃青霉（P.chrysogenum）中國科學院。

UV-1780型紫外可見分光光度計 島津儀器（蘇州）有限公司；HWS-26型電熱恒溫水浴鍋 蘇州江東精密儀器有限公司；AR223CN型電子天平 奧豪斯（常州）儀器有限公司；TGL-24M高速冷凍離心機 湖南平凡科技有限公司；KN680全自動凱氏定氮儀 山東海能科學儀器有限公司；YC-1800實驗型噴霧干燥機 上海雅程儀器設備有限公司；DYZC-MINI4型電泳儀、WD-9143B凝膠成像系統 北京六一生物科技有限公司；BCN-1360型生物潔凈工作臺 北京東聯哈爾儀器制造有限公司；XSP-SM4型雙目生物顯微鏡 上海譜騫光學儀器有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 菜籽餅粕蛋白堿溶酸沉工藝

1.2.2 脫脂榨菜籽餅粕的制備 將菜籽餅粕粉碎過60目篩，以篩下餅粕粉為原料，石油醚為溶劑，按料液比1:10 g:mL在60～90 ℃下回流提取4 h后，自然干燥得脫脂菜籽餅粕，備用[9]。

1.2.3 菜籽餅粕蛋白堿溶工藝優化 實驗過程中，脫脂菜籽餅粕與已調節好pH的堿溶液按一定比例混合均勻，恒溫反應一定時間后，4 ℃條件下以5000 r/min離心15 min，然后取堿溶液測定其中蛋白質和硫苷含量。

1.2.3.1 單因素實驗 以堿溶過程中菜籽餅粕中蛋白質和硫苷溶出量為測量指標，依次考察堿溶pH、堿溶時間、提取溫度及料液比各因素的影響，單因素基礎條件為：堿溶pH13.0，堿溶時間60 min，提取溫度45 ℃，料液比1:40 g/mL。各因素的水平梯度為，堿溶pH:12.0、12.5、13.0、13.5、14.0；堿溶時間：40、60、80、100、120 min；提取溫度：35、45、55、65、75 ℃；料液比：1:20、1:30、1:40、1:50、1:60 g/mL。

1.2.3.2 響應面優化試驗 在單因素實驗的基礎上，確定料液比為1:40 g/mL，利用響應面分析法對pH、時間、溫度3個因素進一步優化。根據Box-Behnken試驗設計原理，選取pH（X1）、時間（X2）及溫度（X3）為自變量，以蛋白質溶出率為響應值1（Y1），硫苷溶出率為響應值2（Y2）進行三因素三水平二指標的響應面分析，優化菜籽餅粕蛋白堿溶工藝條件，試驗因素與水平設計見表1。

表1 響應面試驗設計因素與水平Table 1 Factors and levels of Box-Behnken design

1.2.3.3 蛋白質溶出率測定 采用考馬斯亮藍法測定不同堿溶條件下菜籽餅粕蛋白的溶出含量，具體參照羅群[10]的實驗方法，并做適當修改，得到蛋白質濃度的標曲為：Y=0.0069x+0.0598，R2=0.9988（X表示BSA當量（mg）、Y表示溶液吸光度）。

1.2.3.4 硫苷溶出率測定 參照王寧惠[11]和趙冬吉[12]的方法，利用氯化鈀法對菜籽餅粕及其堿溶液中硫苷含量進行測定。精確稱取黑芥子硫苷酸鉀一水標準品0.02 g，用去離子水溶解后定容于10 mL容量瓶中配成 4.8139 μmol/mL 標準液，稀釋至所需濃度，取2 mL不同濃度標準液與3.0 mL 0.1% CMC 混合，再加入4.0 mmol/L PbCl2溶液2 mL，于室溫反應1 h后測定其520 nm的吸光值，以PbCl2、羧甲基纖維素鈉空白溶液作參比溶液制作標準曲線。得到黑芥子硫苷酸鉀一水的標曲為：Y=0.555718x?0.00357，R2=0.999（X表示黑芥子硫苷酸鉀一水濃度（μmol/mL）、Y表示溶液吸光度）。

準確稱取粉碎菜籽餅粕0.1 g于10 mL試管中，沸水浴鍋干蒸10 min后加入8 mL的90 ℃熱水混勻，再在沸水浴中反應40 min，冷卻靜置后添加去離子水至10 mL搖勻并過濾，取2 mL過濾液按上述操作測定菜籽餅粕中硫苷含量；取菜籽餅粕堿溶液2 mL按上述操作測定其硫苷含量。以堿溶液中硫苷含量與菜籽餅粕中硫苷含量的比例為硫苷溶出率。

1.2.4 菜籽餅粕蛋白酸沉條件優化 在上述實驗基礎上，冷凍離心收集上清液后，優化菜籽蛋白沉淀pH（1.0、2.0、3.0、4.0、4.2、4.4、4.6、4.8、5.0），4 ℃條件下以6000 r/min離心10 min后離心收集沉淀，真空冷凍干燥得菜籽餅粕酸沉蛋白，并計算其得率[9]；同時上清液經噴霧干燥得到酸溶蛋白提取物。采用凱氏定氮法測定菜籽餅粕堿溶液、酸沉蛋白、酸溶蛋白提取物的粗蛋白含量，其中，蛋白質換算系數為6.25[13]。

1.2.5 菜籽餅粕蛋白提取物特征分析

1.2.5.1 SDS-PAGE凝膠電泳測定蛋白質分子質量分布 采用電泳儀進行SDS-PAGE凝膠電泳，按照WANG等[14]的方法，并作適當修改，具體方法如下：將菜籽餅粕堿溶液、酸沉淀蛋白、酸溶蛋白提取物分別（粗蛋白含量5 mg/mL，溶劑pH約為12.0的水溶液）與緩沖液（0.125 mol/L Tris-HCl（pH6.8）含1%SDS、2%β-巰基乙醇、5%甘油及0.025%溴酚藍）按1:1體積比混合后煮沸約5 min，上樣10 μL，80 V電泳1 h后，轉為120 V繼續電泳約2 h，電泳選用12%的分離膠和5%的濃縮膠，電泳結束后將凝膠置于40%甲醇與考馬斯亮藍-G250進行染色處理30 min后，于45%甲醇和10%乙酸溶液中脫色，待膠片背景藍色呈透明狀后進行凝膠電泳成像。

1.2.5.2 菜籽粕蛋白提取物清除ABTS自由基的能力 采用ABTS自由基清除能力檢測試劑盒對菜籽粕酸沉蛋白及酸溶蛋白提取物的抗氧化能力進行測定。本實驗在405 nm下測定樣品的吸光值，其中，樣品的吸光值記為A樣品，以蒸餾水為空白吸光值記為A空白，試劑本底的照吸光值記為A對照。

1.2.5.3 菜籽粕蛋白質提取物抑菌特性探究 采用牛津杯抑菌圈法研究菜籽粕酸沉蛋白及酸溶蛋白提取物對金黃色葡萄球菌（S.aureus）、大腸桿菌（E.coli）、黃青霉菌（P.chrysogenum）的抗菌特性[15]。

首先將S.aureus、E.coli于LB瓊脂培養基中活化24 h，挑取單菌落接種于100 mL LB液體培養基，于37 ℃、150 r/min培養24 h后，將菌體濃度調整至約為1.0×107CFU/mL的菌懸液備用。P.chrysogenum接種到PDA培養基上28 ℃培養48 h后，用含有0.1%吐溫80的無菌水制備其孢子懸浮液，并將孢子懸浮液濃度調整為1.0×107孢子/mL。

分別吸取上述制備的S.aureus、E.coli菌懸液、P.chrysogenum孢子懸浮液0.02 mL接種到LB瓊脂培養基及PDA培養基上并涂布均勻后，分布在牛津杯中加入0.05 mL酸沉淀蛋白溶液與酸溶蛋白提取物溶液，并以無菌PBS為對照，S.aureus、E.coli培養24 h，P.chrysogenum培養48 h后，觀察其抑菌效果。

1.3 數據分析

研究中實驗均重復3次，結果表示為平均值±標準差（SD），采用Design Expert 8.0.6、Origin 2017和SPSS 20對實驗數據進行處理和分析。

2 結果與分析

2.1 菜籽餅粕蛋白堿溶條件單因素實驗

2.1.1 堿溶pH對堿溶液中蛋白質和硫苷溶出效果的影響 菜籽餅粕蛋白質的提取受到環境pH的影響顯著（P<0.05），且一般高強度堿溶浸提工藝更有利于氮物質的溶出[9]。如圖1所示，堿溶液中蛋白質的溶出率隨pH的增加而增大，并在pH為13.0條件下發生顯著增高（P<0.05），且在pH13.5時達到最大（約為8.78%）而后降低，這可能與餅粕中蛋白質與植酸類物質的結合穩定性受pH影響有關，即植酸可與菜籽蛋白中的賴氨酸（pKa=10.53）、精氨酸（pKa=12.48）分別通過-NH2、-CN3H4發生相互作用，隨著堿溶階段pH的增大，蛋白-植酸復合物的穩定性會逐漸下降，進而提高蛋白質的溶出效果[16]。FETZER等[17]的研究也表明弱堿性浸提環境對菜籽粕蛋白的提取效果無顯著影響，只有當pH增加至11.0后，蛋白質提取率才會明顯提升約9%～12%。從圖1可看出，堿溶液中硫苷的含量隨pH的增大表現出先降低后增高的趨勢，并在pH13.0時達到最低，為（1.15%±0.01%），與ZHANG等[9]研究發現的硫苷在中高強度堿環境浸提過程中會隨pH的增加出現降低的結果相吻合，這主要與硫苷在較強堿性條件下會轉化為3-丁烯腈及硫葡糖等小分子有關[18]。另外，實驗中可發現在相對較弱的堿性浸提環境中，蛋白質和硫苷的溶出比例成反比，以蛋白質溶出最大化同時盡可能降低硫苷的溶出率，本實驗優選pH13.0進行下一步實驗。此外，本研究pH與以往文獻優化pH相比較高，主要是因為本實驗以物料混合前水溶液pH為優化值[9,17,19]。

圖1 堿溶pH對蛋白及硫苷溶出的影響Fig.1 Effects of alkali pH on the protein and glucosinolates content

2.1.2 堿溶時間對堿溶液中蛋白質和硫苷溶出率的影響 由圖2可以看出，菜籽餅粕堿溶液中的蛋白質溶出率與硫苷溶出率變化規律一致，均隨著浸提時間的延長表現出先增加后持平或緩慢下降的趨勢，并在浸提時間為80 min時達到最大，此時堿溶液中蛋白質和硫苷的溶出率分別為（7.86%±0.09%）和（1.16%±0.01%）。對比以往研究也可發現，當堿溶浸提至一定時間后，浸提時間的延長對有效物質的溶出已無明顯作用，多次短時浸提可能在實際操作過程中更有利于提高生產效率[17]。本實驗優選80 min進行下一步實驗。

圖2 提取時間對蛋白及硫苷溶出的影響Fig.2 Effects of extraction time on the protein and glucosinolates content

2.1.3 堿溶溫度對堿溶液中蛋白質和硫苷溶出率的影響 圖3顯示，堿溶浸提溫度的提高有利于餅粕中蛋白質和硫苷的溶出，且對硫苷溶出的影響較大。其中，當浸提溫度升高至65、75 ℃時蛋白質溶出率分別為（9.77%±0.01%）、（9.80%±0.01%），雖略有提高但已無顯著性差異（P>0.05），而硫苷的溶出率則顯著增加（P<0.05）。浸提溫度有利于蛋白質溶出的這一現象與羅群等[20]的研究一致，但與FETZER等[17]研究發現的常溫更有利于蛋白質溶出的現象有出入，這可能與實驗中菜籽餅粕的制備方式有關。本實驗基于最大化提高蛋白質提取效率的同時降低硫苷溶出的原則，優選55 ℃進行料液比單因素實驗優選。

圖3 提取溫度對蛋白及硫苷溶出的影響Fig.3 Effects of extraction temperature on the protein and glucosinolates content

2.1.4 料液比對堿溶液中蛋白質和硫苷溶出率的影響 增大物料與溶劑的接觸面積一定程度上有利于目標物質提取效率的提高。以往研究通常選用1:5～1:20的料液比（g/mL）進行研究，并發現料液比并不會顯著提高蛋白質的提取效率[21,17]，基于此，本研究以1:20為料液比起始值，料液比對菜籽餅粕堿溶條件下蛋白質和硫苷溶出率的影響如圖4所示：當料液比在1:20～1:40 g/mL范圍內時，隨著料液比的增加，堿溶液中蛋白質的溶出率逐步增大并在1:40 g/mL達到最大（9.77%±0.01%），相比較而言，硫苷的溶出率受料液比的影響較小，整體趨勢相對平緩；當料液比>1:40 g/mL后，料液比的增加對蛋白質和硫苷的溶出均無明顯影響。綜合實際生產節水，優選1:40 g/mL的料液比。

圖4 料液比對蛋白及硫苷溶出的影響Fig.4 Effects of the ratio of material to solvent on the protein and glucosinolates content

2.2 菜籽餅粕蛋白堿溶條件響應面試驗結果分析

2.2.1 響應面試驗設計與結果 在單因素實驗結果的基礎上確定料液比為1:40 g/mL，以pH（X1）、浸提時間（X2）和浸提溫度（X3）3因素為自變量，以蛋白質溶出率為響應值（Y1）、硫苷溶出率為響應值（Y2），采用響應面法進行三因素三水平的試驗設計，共包括17組試驗方案。試驗方案及結果見表2。

表2 響應面試驗設計與結果Table 2 Design and results of response surface experiment

2.2.2 模型建立與方差分析 利用Design Expert 8.0.6軟件對結果進行方差分析（見表3，表4），對擬合回歸方程進行方差分析和顯著性檢驗，將數據進行多元回歸擬合，得到蛋白質溶出率（Y1）與pH（X1）、浸提時間（X2）和浸提溫度（X3）的二次響應面回歸方程為：

表3 蛋白質溶出率回歸方程的方差分析Table 3 Analysis of variance for protein yield’s regression equation

表4 硫苷溶出率回歸方程的方差分析Table 4 Analysis of variance for glucosinolate content’s regression equation

硫苷溶出率（Y2）與pH（X1）、浸提時間（X2）和浸提溫度（X3）的二次響應面回歸方程為：

由表3、表4可知，兩模型的P值均<0.0001，表明模型擬合效果顯著，能很好地反映變量與響應變量之間的關系；兩回歸模型的失擬項分別為0.0504、0.0882，即失擬不顯著, 并且多元決定系數分別為R2=0.9976、R2=0.9928，擬合效果較好。另外，回歸方程一次項系數絕對值的大小，決定了各因素對響應值影響的主次順序，可看出，浸提pH是影響菜籽餅粕堿溶蛋白質溶出的關鍵因素（P<0.0001），其次浸提時間（P=0.0024）與溫度（P<0.0001）；就硫苷溶出率而言，各因素的影響大小為浸提溫度（P<0.0001）>浸提pH（P=0.0087）>浸提時間（P=0.0158）。

2.2.3 響應面分析 在模型分析的基礎上，圖5展示了交互因素對菜籽粕蛋白質堿溶浸提工藝的影響效果，結合擬合方程，堿性條件下的蛋白質與硫苷溶出率均受浸提pH與浸提溫度的交互影響較大，其中，浸提pH與浸提溫度的交互作用可顯著影響蛋白質的溶出效果（P＝0.0016）。以蛋白質溶出率最大且硫苷溶出率最低，分析優化得到脫脂菜籽餅粕蛋白質堿溶優化的提取條件為pH13.16，浸提時間82.07 min，浸提溫度45.71 ℃，該條件下理論蛋白質溶出率為8.42%、硫苷溶出率為1.60%。經修正確定最終工藝參數為pH13.1，浸提時間82 min，浸提溫度46 ℃，液料比1:40 g/mL，此條件下進行3次平行試驗，得到蛋白質溶出率平均值為8.78%、硫苷溶出率平均值為1.65%，與理論值相比，實驗值和預測值具有良好的相關性，說明該響應面模型和最優化條件是有效的。

圖5 交互因素對蛋白和硫苷溶出率的影響Fig.5 Effects of the interaction of various factors on the protein yield and glucosinolates content

2.3 菜籽餅粕蛋白酸沉最優條件

菜籽蛋白等電點寬泛，約為3～9[22]，堿溶酸沉工藝中酸沉條件的選擇會直接影響蛋白的回收率及其物化性質[2,23]，前期有研究發現菜籽蛋白在pH4.5～5.5間回收率最高[23]，AKBARI等[24]則表明pH4.0酸沉條件下獲得的蛋白質與pH4.5酸沉條件下的蛋白質純度更高。本實驗在堿溶工藝條件優化的基礎上，以酸沉蛋白得率最高為指標，對菜籽粕蛋白的最佳酸沉條件（pH條件設置1、2、3、4、4.2、4.4、4.6、4.8、5）進行篩選，結果如圖6所示，堿溶液中的蛋白質的沉淀率在pH1～5的范圍內隨著pH的增大呈現先增大后減小的趨勢，并在pH4時酸沉條件下沉淀率最大，約為10.48%，該變化趨勢與ZHANG等的[9]研究結果相一致，這主要與菜籽蛋白的各組成成分不同的等電點值相關。

圖6 酸沉pH對蛋白制備的影響Fig.6 Effects of acid precipitation pH on rapeseed protein

2.4 菜籽餅粕蛋白提取物SDS-PAGE分析

圖7為菜籽餅粕堿溶液、菜籽餅粕酸沉蛋白和菜籽餅粕酸溶蛋白提取物的SDS-PAGE圖。前期研究表明，菜籽蛋白主要包含有11/12S球蛋白，該蛋白可降解為6個亞基，每個亞基由α-（約30～40 kDa）和β-（約20 kDa）兩條多肽鏈以二硫鍵鏈接組成；以及N1.7/2S白蛋白，其由兩條不同分子量（10～12 kDa與3～6 kDa）的肽鏈組成[25?26]。從圖7可以看出，堿溶液樣品中的蛋白條帶主要集中分布<41 kDa以下，其中，低分子量蛋白相對較多，這與其蛋白含量及一定程度的水解有關[27]。對比分析酸沉蛋白與酸溶蛋白提取物中的蛋白條帶可發現，酸沉蛋白的條帶在31 、14～22 及<14.4 kDa間均有分布，即含有一定的球蛋白及白蛋白，表示蛋白種類及水解物相對較多；相比而言，酸溶蛋白提取物則主要為白蛋白（14.4 kDa）及小分子水解物[28]。進一步分析，菜籽餅粕酸沉蛋白與酸溶蛋白提取物中的粗蛋白含量分別為（78.10%±0.53%）、（15.25%±0.17%）。

圖7 菜籽粕蛋白提取物的SDS-PAGE圖譜Fig.7 SDS-PAGE of rapeseed meal protein extracts

2.5 菜籽餅粕蛋白提取物的活性

2.5.1 菜籽餅粕蛋白清除ABTS自由基的活性 菜籽蛋白及其水解物已被報道具有一定的生物活性，如增強免疫、抗氧化活性及抑菌等[1]。實驗選取ABTS陽離子自由基為對象，對菜籽餅粕蛋白提取物的體外抗氧化活性進行了測定，結果表明同等粗蛋白含量的菜籽粕酸溶蛋白提取物其自由基清除率與酸沉蛋白相比更高，兩者的EC50值分別為0.438、1.372 mg/mL（如圖8所示），推測一是主要與兩者的蛋白組成種類有關，其中，酸溶蛋白中多為分子量較小的白蛋白與其蛋白質水解物，在自由基體系中暴露的疏水性基團較多，更易與ABTS接觸發生氫原子轉移[4,29]；二是可能與提取物中其他組分如多糖等有關。

圖8 菜籽粕蛋白提取物的ABTS自由基清除能力Fig.8 ABTS free radical scavenging ability of rapeseed protein extracts

2.5.2 菜籽餅粕蛋白的抑菌能力 進一步對兩種蛋白提取物的抑菌性進行了分析，其中，兩者均表現出一定的抑制金黃色葡萄球菌生長的能力（圖9），且酸沉淀蛋白發揮作用的濃度低于酸溶蛋白提取物，即酸沉蛋白具有較強的抑制金黃色葡萄球菌生長的能力，如圖9a所示，10 mg/mL與5 mg/mL酸沉蛋白的抑菌圈直徑分別約為15.23 mm與11.02 mm，這與DUAN等[30]發現菜籽球蛋白與菜籽白蛋白相比更易獲得抗菌肽相一致；此外，兩者對大腸桿菌及黃青霉的生長幾乎無抑制能力。

圖9 菜籽粕蛋白提取物對金黃色葡萄球菌的抑制作用Fig.9 Inhibition of rapeseed protein extracts on S.aureus

3 結論

菜籽餅粕富含蛋白質，本文對菜籽餅粕蛋白的堿溶酸沉工藝進行了系統優化，結果表明：菜籽餅粕經脫脂處理后，在pH13.1的條件下以1:40 g/mL的料液比、46 ℃條件下浸提82 min后，其蛋白質溶出率可達8.78%且硫苷溶出率相對較低為1.65%；進一步，調節菜籽餅粕蛋白堿提取液的pH至4.0，冷凍離心后，分別對其沉淀物及上清液進行凍干和噴霧干燥處理，可得到菜籽餅粕酸沉蛋白與酸溶蛋白提取物，SDS-PAGE結果顯示：酸沉蛋白分子量在31、14～22及<14.4 kDa間均有分布，主要為菜籽球蛋白；菜籽餅粕酸溶蛋白提取物的分子量主要分布在<14.4 kDa左右，主要為菜籽白蛋白；且兩種不同提取物的粗蛋白含量分別為（78.10%±0.53%）與（15.25%±0.17%）。此外，兩者都表現出了一定的體外ABTS自由基清除及抑制金黃色葡萄球菌生長的能力。本實驗為菜籽餅粕蛋白的開發利用提供了一定的理論支撐，進一步可對菜籽餅粕蛋白提取物的結構及其加工特性進行研究。