新鮮賦值血清多點校準提高不同檢測系統間總膽紅素檢測結果的一致性

何成欽，劉艷婷，楊 娜，肖光軍△，陳 姝，龔國忠，曹 丹，趙明才

1.四川省遂寧市中心醫院檢驗科，四川遂寧 629000；2.四川省遂寧市第一人民醫院檢驗科，四川遂寧 629000

總膽紅素(TBIL)檢測是各級醫療機構臨床實驗室均普遍開展的常規生化檢測項目，其檢測結果常用于診斷患者有無溶血及評估其肝、膽系統在膽色素代謝中的功能狀態[1-2]。目前，臨床實驗室TBIL檢測主要以釩酸鹽法、重氮法、化學氧化法、酶法和干化學法為主[3]，雖然大部分試劑生產廠家提供的試劑對TBIL的檢測結果能溯源至美國國家標準與技術研究院(NIST)的標準物質SRM 916a，但相關研究顯示，TBIL的檢測結果在不同檢測方法、不同試劑間均存在一定差異，且部分檢測系統間的結果差異隨標本TBIL水平升高而增加，同時TBIL見光易分解，其校準品儲存和使用不當則將進一步加大檢測系統間的結果差異，從而導致實驗室間的檢測結果無法實現互認，不利于患者的診療及預后評估，也為患者的轉診造成了一定影響[3-5]。故本研究以配套檢測系統賦值的新鮮血清作為校準品對待評價檢測系統進行多點校準，分析校準前后兩檢測系統檢測結果的一致性，探討新鮮賦值血清多點校準在提高不同檢測系統間TBIL檢測結果一致性中的可行性。

1 材料與方法

1.1標本來源 收集遂寧市中心醫院新生兒科、兒科患兒常規生化檢測后剩余的新鮮血清標本56份，然后將每份標本混勻后分成兩份，一份標本用于新鮮賦值血清多點校準前兩檢測系統間檢測結果的比對。另一份標本則用于校準后兩檢測系統間檢測結果的比對，每份標本盛裝于1.5 mL離心管中，編號后避光保存于-80 ℃超低溫冰箱中備用。同時，收集TBIL水平在20～500 μmol/L的不同水平新鮮血清標本5份，用于配套檢測系統賦值和校準待評價檢測系統[6]。所有新鮮血清標本均無溶血、脂血，且人類免疫缺陷病毒(HIV)抗體、丙型肝炎病毒(HCV)抗體及乙肝表面抗原(HBsAg)檢測結果均為陰性。

1.2儀器與試劑 配套檢測系統由Roche Cobas C702全自動生化分析儀及其配套的重氮法TBIL檢測試劑(批號：50333801)與生化復合校準品(批號：41006701)組成；待評價檢測系統由日立7600全自動生化分析儀、四川邁克實業有限公司生產的釩酸鹽法TBIL檢測試劑(批號：1220101)與配套的生化復合校準品(批號：1020081)組成，項目檢測參數嚴格按照試劑盒說明書設置；水平2(批號：45782)和水平3(批號：45783)液體生化多項質控品由美國伯樂公司提供。

1.3方法

1.3.1新鮮血清的賦值 使用配套檢測系統檢測收集的5份不同TBIL水平的新鮮血清標本，每份標本檢測3次，計算其均值，該均值即為配套檢測系統對新鮮血清標本的賦值[6]。新鮮血清標本賦值后，2～8 ℃避光保存，并于1 h內對待評價檢測系統完成校準。賦值前對儀器進行常規保養，然后使用Roche生化復合校準品對配套檢測系統校準，且室內質控在控。

1.3.2待評價檢測系統新鮮賦值血清多點校準 使用新鮮賦值血清對待評價檢測系統進行多點校準前，對TBIL檢測參數中的校準參數進行修改，其他參數不做修改，具體修改如下：Calibration Type由“Linear”改為“Spline”，Point由“2”改為“6”，Span由“2”改為“3”，同時將儀器中生化復合校準品TBIL的賦值刪掉，另外新設置5個水平的校準品(校準品1～5)，并將經配套檢測系統賦值的5份新鮮血清標本按水平從低到高的順序依次輸入校準品1～5賦值處。設置各水平校準品的校準架位置，新鮮賦值血清混勻后與純化水分別放置于校準架的相應位置，選擇校準類型為“Full”后對待評價檢測系統TBIL檢測項目進行多點校準，儀器自動繪制工作曲線。

1.3.3新鮮賦值血清多點校準前后檢測結果的一致性評估 使用新鮮賦值血清對待評價檢測系統進行多點校準前， 每天從-80 ℃超低溫冰箱中將收集的新鮮血清標本取出8份(編號1～8)放置于室溫避光環境中，恢復至室溫并充分混勻后，參照EP9-A2文件[7]的方法，按1～8 、8～1 的順序分別在配套檢測系統和待評價檢測系統中完成TBIL水平的檢測，每份標本的檢測結果取兩次檢測的均值，連續7 d共檢測56份標本。使用新鮮賦值血清對待評價檢測系統進行多點校準后，每天從-80 ℃超低溫冰箱中取出另一套新鮮血清標本中的8份(編號1～8)在待評價檢測系統中按1～8、8～1的順序完成TBIL的水平檢測，每份標本的檢測結果取兩次檢測的均值，連續7 d共檢測56份標本。收集數據，并參照EP9-A2文件[7]中的方法進行離群值檢驗，然后以配套檢測系統的檢測結果為X、待評價檢測系統的檢測結果為Y進行線性回歸分析，計算新鮮賦值血清多點校準前后兩檢測系統間檢測結果的線性回歸方程Y=bX+a和R2，并通過回歸方程計算待評價檢測系統在不同醫學決定水平(Xc)處的預期偏倚(SE)及其95%置信區間(95%CI)[7-8]。依據衛生行業標準WS/T403-2012確定TBIL檢測的允許總誤差(TEa)為±15%，并以SE≤1/2TEa為臨床可接受標準，評價新鮮賦值血清多點校準前后兩檢測系統間檢測結果的一致性。SE=[(b-1)X+a] ×100/X[7]。

1.4統計學處理 采用Excel 2010軟件對數據進行分析處理。

2 結 果

2.1新鮮血清標本的賦值及對待評價檢測系統進行校準 使用配套檢測系統對5份新鮮血清標本進行賦值，各標本3次檢測的均值依次為27.7、109.4、235.5、361.4、468.0 μmol/L，以此為各標本TBIL的水平，并使用這5份新鮮血清標本對待評價檢測系統進行校準，儀器自動繪制工作曲線。

2.2新鮮賦值血清多點校準前后檢測結果的比較 校準前，待評價檢測系統和配套檢測系統檢測結果線性回歸方程的b值為0.888 6，不在0.97～1.03內，且待評價檢測系統的結果偏倚隨TBIL水平的升高而增大，見圖1、2；校準后，待評價檢測系統和配套檢測系統檢測結果線性回歸方程的b值為1.012 8，在0.97～1.03內，且待評價檢測系統的結果偏倚均<1/2TEa，見圖3、4。

圖1 校準前配套檢測系統與待評價檢測系統TBIL檢測結果線性回歸圖

2.3新鮮賦值血清多點校準前后兩檢測系統檢測結果的一致性 根據回歸方程計算新鮮賦值血清多點校準前后待評價檢測系統在17.1、34.2、171.0、342.0 μmol/L 4個Xc處的SE、預期值及其對應的95%CI，結果見表1。

圖2 校準前兩檢測系統間TBIL檢測結果的偏倚圖

圖3 校準后配套檢測系統與待評價檢測系統TBIL檢測結果的線性回歸圖

圖4 校準后兩檢測系統間TBIL檢測結果的偏倚圖

表1 新鮮賦值血清多點校準前后待評價檢測系統的SE、預期值及對應的95%CI

3 討 論

檢測系統是由儀器、試劑、校準品、操作程序等共同組成，但因各級醫療機構臨床實驗室的條件存在一定差異，而全自動生化分析儀和檢測試劑盒的生產廠家眾多，導致目前大部分臨床實驗室仍采用非配套檢測系統進行常規生化項目的檢測[9]。由于非配套檢測系統未建立完整的溯源鏈，繼續使用試劑盒的配套校準品及其標示值對項目進行校準，將影響檢測結果的準確性，可能使實驗室間的檢測結果缺乏一致性，從而無法實現檢驗結果互認，故如何實現不同檢測系統結果的一致性仍是目前臨床實驗室急需解決的實際問題[6,10]。

本研究結果顯示，兩檢測系統分別使用試劑盒配套校準品進行校準時，其回歸方程的b值為0.888 6，不在0.97～1.03內，說明兩檢測系統間檢測結果存在較大的系統誤差，待評價檢測系統的偏倚隨標本TBIL水平的升高而呈增大的趨勢，與王楊等[3]、于智君等[4]的研究結果一致。因線性回歸分析顯示R2>0.95，說明進行比對的標本水平范圍合理，其線性回歸方程的b值和a值可靠，可通過回歸方程計算待評價檢測系統在不同Xc處的SE[7-8]。新鮮賦值血清多點校準前待評價檢測系統在17.1、34.2、171.0、342.0 μmol/L這4個Xc處的SE均>1/2TEa，且SE隨TBIL水平的升高而呈逐漸升高趨勢，說明兩檢測系統檢測結果缺乏一致性，這與王楊等[3]的研究結果存在一定差異，可能與其選擇以SE≤±10%為臨床可接受標準有關，也側面反映了方法比對試驗中所選擇的質量標準將影響結果的評價。

本研究發現，校準前待評價檢測系統在TBIL低水平處的偏倚較小，隨著TBIL水平的降低偏倚趨近于零，而高水平處偏倚則隨著TBIL水平的升高而逐漸增加，說明兩檢測系統間檢測結果可能并不呈線性關系，此時肖光軍等[11]使用的用外部校正因子來實現不同檢測系統結果一致性的方法可能不適用于本研究中的兩套檢測系統，故應采用其他適宜的方法來提高檢測結果的準確性和可比性。相關研究顯示，非配套檢測系統可使用國際公認的有證標準物質、參考方法或配套檢測系統賦值的新鮮血清來進行校準，實現溯源鏈的傳遞，從而提高檢測結果的準確性和可比性，雖然對大部分臨床實驗室來說，國際公認的有證標準物質和經參考方法賦值的新鮮血清均較難獲得，但新鮮血清在不同檢測系統間不存在基質效應，是非配套檢測系統最佳的校準品[6,10]，故本研究采用經配套檢測系統賦值的新鮮血清對待評價檢測系統進行校準。同時，因兩檢測系統間檢測結果可能并不呈線性關系，故本研究將TBIL的校準類型由兩點校準改為多點校準，以進一步提高兩檢測系統對不同水平標本檢測結果的一致性和可比性。本研究結果顯示，經新鮮賦值血清多點校準后，其線性回歸方程的b值由0.888 6變為1.012 8，已滿足b值在0.97～1.03內的質量要求，檢測結果偏倚及其在4個Xc處的SE均<1/2TEa，檢測結果具有一致性，說明新鮮賦值血清多點校準可減小檢測系統間的系統誤差，使兩檢測系統間TBIL的檢測結果具有一致性。本研究校準后，當TBIL水平接近600 μmol/L時，待評價檢測系統的結果偏倚雖在可接受范圍內，但與其他水平處的偏倚相比較明顯增加，可能與TBIL水平已接近配套檢測系統線性范圍的上限和校準品5的水平較低有關，但該水平已遠高于342.0 μmol/L這一Xc，該偏倚對新生兒病理性黃疸等疾病的診療影響較小，可在以后的研究中適當調整5份新鮮賦值血清標本的TBIL水平，以進一步提高不同檢測系統間高水平標本檢測結果的可比性。

綜上所述，應用新鮮賦值血清作為非配套檢測系統的校準品，可實現溯源鏈的傳遞，提高非配套檢測系統檢測結果的準確性及不同檢測系統間檢測結果的一致性，且具有成本低、操作簡單的優點，在實現區域檢驗結果互認中具有較高的可行性。同時，試劑生產廠家和臨床實驗室應關注不同檢測系統在低水平和高水平處檢測結果的準確性和可比性，通過改變校準類型、調整校準品水平范圍等方法進一步提高檢測結果的準確性和可比性。本研究未對新鮮賦值血清兩點校準與多點校準對TBIL檢測結果一致性的影響進行探討，也未在更多的檢測系統間進行應用和探討，因此所得結論仍需進一步研究驗證。