子宮內膜癌組織血管緊張素(1-7)、miR-106b表達與患者臨床病理分期相關性研究

徐 珊，程 珂，劉鵬宇

(1.新鄉醫學院第三附屬醫院婦科，河南 新鄉 453003；2.新鄉醫學院醫院管理處,河南 新鄉 453003)

子宮內膜癌為絕經后以及圍絕經期女性多發的，部位在子宮內膜的惡性、上皮性腫瘤，是僅次于宮頸癌的婦科常見的惡性腫瘤，約占婦科總體惡性腫瘤的20%～30%[1]。臨床子宮內膜癌早期診斷多采取相關血清標志物檢測進行，但缺乏敏感度和特異性，對患者預后和治療價值有限，故尋求更為有效、具有參考價值的標志物對預后及診療進行參考具有重要價值[2-3]，惡性腫瘤與抑癌和原癌基因活性關系密切，微小RNA(miRNA,miR)為一類非編碼RNA單鏈，能夠結合相應基因序列對靶基因的表達產生抑制調節效果[4]，有研究[5]顯示：miR-106b對胃癌組織中癌細胞的遷移和增殖有促進作用，其在子宮內膜癌中可能也有類似作用。另有學者[6]指出：腎素-血管緊張素系統(Renin-angiotensin system,RAS)是人體體液、水鈉平衡以及生理功能調節的重要系統,血管緊張素(1-7)為該系統中的一種活性肽,存在于循環系統中的同時，在子宮中也發揮重要調節作用，與子宮內膜癌可能存在緊密聯系，故本研究探究子宮內膜癌患者子宮內膜組織中血管緊張素(1-7)、miR-106b表達情況及其與患者病理分期間的關系，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 擇本院2019年11月至2021年11月間107例子宮內膜癌患者將其子宮內膜癌組織切除后作為患病組，病例納入標準：①均接受穿刺活檢后確診為子宮內膜癌[7]；②未進行過放療以及化療等治療；③我院倫理委員會許可，簽署知情同意書。排除標準：①合并其他嚴重疾病或原發性腫瘤者；②合并急性炎癥、血液系統疾病者；③自身免疫缺陷及肝、腎嚴重病變者等。年齡49～70歲，平均(53.12±5.71)歲；孕次1～3次，平均(2.01±0.97)次；宮腔深度5～11 cm,平均(7.19±1.81)mm。據其TNM病理分期分組，Ⅰ-Ⅱ期組69例，年齡49～68歲，平均(52.98±5.25)歲；孕次1～3次，平均(1.99±0.94)次；宮腔深度5～10 cm,平均(7.16±1.63)mm。Ⅲ-Ⅳ期組38例，年齡52～70歲，平均(53.37±5.34)歲；孕次1～3次，平均(2.05±0.94)次；宮腔深度5～11 cm,平均(7.24±1.70)mm。TNM病理分期各分組患者間宮腔深度、孕次和年齡比較差異無統計學意義(均P>0.05)，具有可比性。另擇同期20例健康子宮內膜組織為健康組，年齡48～70歲，平均(53.27±5.93)歲；孕次1～3次，平均(2.00±0.98)次；宮腔深度5～12 cm，平均(7.24±1.94)mm。患病組與健康組間宮腔深度、孕次和年齡比較差異無統計學意義(均P>0.05)。

1.2 研究方法

1.2.1 血管緊張素(1-7)檢測：采用預冷處理過的0.9%氯化鈉溶液多次對新鮮冷凍的子宮內膜組織進行洗滌后取0.2 g，按照組織凈重(g)、0.9%氯化鈉溶液、甲基磺酰氟(Pheny1methylsulfonyl fluoride，PMSF)比例1∶10∶100將0.9%氯化鈉溶液和PMSF依次加入，后進行超聲勻漿到無顆粒、透明狀，取12 000 g于4 ℃下進行3000 r/min，5 min離心后取上清，以酶聯免疫吸附法檢測血管緊張素(1-7)含量，試劑盒來自上海江萊生物科技有限公司，操作均嚴格參照試劑盒說明進行。

1.2.2 miR-106b檢測：將子宮內膜組織樣本中的總RNA提取后，采用DEPC水將其溶解后對RNA純度和濃度進行測定后，以反轉錄試劑盒(上海夢澤生物科技有限公司，型號A3500)轉錄成cDNA，按照兩步法熒光定量反轉錄試劑盒(上海研生生化試劑有限公司)說明書步驟進行測定，其中，引物：上游序列：5’-TTTTTCGCCCTTAGCGTGAAGA-3’,下游序列：5’-GAGGCAGTCGAAGCTCTCG-3’,U6作內參基因,上游引物：5’-CTCGCTTCGGCAGCACA-3’,下游序列：5’-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3’，實時熒光定量聚合酶鏈式反應,反應體系包含引物各0.5、1 μl cDNA、5.5 μl RNase-free ddH2O、7.5 μl SYBR Green Mix，共15 μl。實時熒光定量PCR儀設置程序95 ℃、12 min，95 ℃、15 s，60 ℃、15 s，72 ℃、15 s，40循環，進行反應，結束后分析記錄數據，miR-106b表達以2-△△CT進行計算。

1.3 觀察指標

1.3.1 子宮內膜癌組織血管緊張素(1-7)、miR-106b表達情況：對比患病組和健康組子宮內膜癌組織血管緊張素(1-7)、miR-106b表達水平差異。

1.3.2 不同TNM病理分期分組患者子宮內膜癌組織血管緊張素(1-7)、miR-106b表達情況：對比Ⅰ-Ⅱ期組和Ⅲ-Ⅳ期組患者子宮內膜癌組織血管緊張素(1-7)、miR-106b表達水平差異。

1.3.3 子宮內膜癌患者TNM病理分期與血管緊張素(1-7)、miR-106b表達間相關性：Pearson檢驗子宮內膜癌患者血管緊張素(1-7)、miR-106b和TNM病理分期間的相關性。

1.3.4 子宮內膜癌患者TNM病理分期與血管緊張素(1-7)、miR-106b表達的關系：采用有序多分類邏輯回歸分析子宮內膜癌病理分期和血管緊張素(1-7)、miR-106b間的關系。

2 結 果

2.1 兩組血管緊張素(1-7)、miR-106b表達情況比較 患病組患者血管緊張素(1-7)和miR-106b表達均高于健康組(P<0.05)，見表1。

表1 兩組血管緊張素(1-7)、miR-106b表達情況比較

2.2 不同TNM病理分期分組患者血管緊張素(1-7)、miR-106b表達情況比較 Ⅰ-Ⅱ期組患者血管緊張素(1-7)表達低于Ⅲ-Ⅳ期組，Ⅰ-Ⅱ期組患者miR-106b表達高于Ⅲ-Ⅳ期組(均P<0.05)，見表2。

表2 不同TNM病理分期分組患者血管緊張素(1-7)和miR-106b表達情況比較

2.3 子宮內膜癌患者TNM病理分期與血管緊張素(1-7)、miR-106b表達的相關性 Pearson檢驗表明，子宮內膜癌患者血管緊張素(1-7)與其病理分期呈正相關(r=0.805，P=0.000)，miR-106b表達與其病理分期呈負相關(r=-0.547，P=0.000)。

2.4 子宮內膜癌患者TNM病理分期與血管緊張素(1-7)、miR-106b表達的關系 以子宮內膜癌TNM病理分期分組為因變量，血管緊張素(1-7)和miR-106b為自變量，行有序多分類邏輯回歸，分析子宮內膜癌患者子宮內膜血管緊張素(1-7)和miR-106b表達和其TNM病理分期間關系密切(均P<0.05)，見表3。

表3 子宮內膜癌患者病理分期與血管緊張素(1-7)、miR-106b的有序多分類邏輯回歸分析

3 討 論

子宮內膜癌的發生現多認為是Wnt/β聯蛋白經典通路及Notch信號通路異常、p53基因突變以及微衛星的不穩定性等多因素綜合作用的結果，以上因素還可能影響子宮內膜癌患者的預后和轉移過程，但仍有較多機制難以明確，探索新思路，新方法對子宮內膜癌的治療和預防有重要價值[8-9]，臨床以往多采用CA199、CA125等腫瘤標志物對該病患者預后和診斷進行判斷，但其在卵巢癌、盆腔炎癥、子宮內膜異位癥等疾病中也有異常表達，從而使其對子宮內膜癌患者預后的評判特異性有限，故尋求具有更好診斷價值的特異性指標對該病患者預后改善以及有效診治具有重要作用[10-11]。

血管緊張素Ⅱ以及血管緊張素(1-7)是RAS系統中的一類多功能活性肽，前者對血管內皮生長因子具有促進作用，從而有利于腫瘤血管的形成，還可調節相關基因和轉化因子促進腫瘤細胞的增殖進程，血管緊張素(1-7)對其具有抑制作用而對腫瘤細胞增殖產生抑制效果[12]。miR-106b為人類7號染色體上的，對多種基因通路和細胞因子具有調節作用的因子，在乳腺癌、肝癌、胃癌及腫瘤細胞侵襲以及增殖過程中均發揮重要作用[13]，本研究患病組血管緊張素(1-7)和miR-106b均高于健康組，提示子宮內膜癌患者體內存在miR-106b和血管緊張素(1-7)表達的異常，據其病理分期分組比較后發現，Ⅰ-Ⅱ期組患者血管緊張素(1-7)低于Ⅲ-Ⅳ期組，Ⅰ-Ⅱ期組miR-106b高于Ⅲ-Ⅳ期組，且經Pearson檢驗得，子宮內膜癌患者血管緊張素(1-7)與其病理分期正相關，miR-106b表達與其病理分期負相關，提示其血管緊張素(1-7)和miR-106b表達與子宮內膜癌患者TNM病理分期有較好相關性，結合有序多分類邏輯回歸分析得，子宮內膜癌患者子宮內膜血管緊張素(1-7)和miR-106b表達和其TNM病理分期間關系密切，進一步證實了血管緊張素(1-7)和miR-106b表達與子宮內膜癌患者TNM病理分期間具有密切關系。分析原因：有學者對子宮內膜癌患者可能參與調節癌細胞組蛋白乙酰化修飾的相關miRNA進行調控、分析后發現有101種miRNA出現表達的異常，其中miR-106b相關基因簇與子宮內膜癌的變化有密切關系[14]，另有學者[15]研究發現:miR-106b可能在子宮內膜癌患者腫瘤細胞遷移和侵襲過程中發揮著重要作用,且與患者組織學分級、淋巴結轉移以及FIGO分期間有明確正相關關系，對子宮內膜癌具有一定診斷價值。殘疾基因同源物2(Disabled homolog 2,DAB2)是一類與多種惡性腫瘤關系密切的抑癌基因磷蛋白，可通過絲裂原信號的轉導過程參與癌細胞分裂過程，還可作用于腫瘤胞外信號的相關調節蛋白，從而調控腫瘤的分化與增殖[16]，已有學者[17]指出，在子宮內膜癌發展與發生中有DAB2的參與且與患者疾病進展表現出一定的正相關關系，而miR-106b可對子宮內膜癌患者腫瘤細胞上相關靶基因DAB2的表達產生下調作用，進而有助于癌細胞的侵襲和增殖，促進患者病理分期的進展和惡化[18]。而血管緊張素(1-7)可通過拮抗血管緊張素Ⅱ作用，抑制血管緊張素Ⅱ對c-myc基因和轉化生長因子β的調節作用，從而對子宮內膜癌細胞的增殖進行調控，也可拮抗其促血管內皮生長因子分泌作用，達到減少腫瘤組織內血管的形成的作用[19]。此外，其還可直接對子宮內膜上皮細胞產生抑制分化的效果，從而使異常增生的細胞編程性死亡，達到調控子宮內膜相關組織生長的作用，進而阻礙患者病理進程的進一步發展和惡化[20]。

綜上所述，子宮內膜癌患者存在血管緊張素(1-7)和miR-106b表達的異常升高狀態，其TNM病理分期Ⅰ-Ⅱ期較Ⅲ-Ⅳ期患者具有更低的血管緊張素(1-7)表達和更高的miR-106b表達，TNM病理分期與血管緊張素(1-7)和miR-106b表達水平關系密切且具有較好相關性，臨床可針對患者病理分期結果進行術后輔助治療的指導，并將其作為新靶點達到改善預后的效果。