肝豆?fàn)詈俗冃詣?dòng)物模型的研究進(jìn)展

楊玉龍， 魏濤華， 楊文明,3， 郝文杰， 楊 悅， 錢(qián)南南， 李 祥， 江海林

1 安徽中醫(yī)藥大學(xué) 研究生院， 合肥 230000； 2 安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院 腦病中心，合肥 230000； 3 新安醫(yī)學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 合肥 230000

肝豆?fàn)詈俗冃杂址Q(chēng)Wilson病(Wilson’s disease, WD)，是一種與銅代謝障礙有關(guān)的以銅的病理性蓄積為特征的常染色體隱性遺傳病[1]。系定位于13q14.3的ATP7B基因突變引起肝細(xì)胞銅轉(zhuǎn)運(yùn)障礙，導(dǎo)致銅穩(wěn)態(tài)受損，肝、腦、腎等器官銅沉積，進(jìn)而產(chǎn)生一系列臨床癥狀，Czonkowska等[2]通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，肝損傷是WD最早和最常見(jiàn)的表現(xiàn)。

細(xì)胞內(nèi)銅穩(wěn)態(tài)的調(diào)控主要有賴(lài)于兩個(gè)銅轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶，ATP7A和ATP7B。在低銅環(huán)境中ATP7B將細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的銅轉(zhuǎn)運(yùn)至囊泡進(jìn)行生物學(xué)合成。當(dāng)細(xì)胞內(nèi)銅含量增，ATP7B則由反面高爾基體管網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)移至細(xì)胞質(zhì)胞膜旁,以利于將多余的銅轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞外[3]。隨著對(duì)WD遺傳基礎(chǔ)和病理生理學(xué)認(rèn)識(shí)的不斷深入，尋找理想的WD動(dòng)物模型已成為WD基礎(chǔ)研究中的核心內(nèi)容。目前針對(duì)WD模型方面的研究主要有離體細(xì)胞模型和動(dòng)物模型。離體細(xì)胞模型主要包括皮膚成纖維細(xì)胞模型及肝細(xì)胞模型[4]。但由于離體細(xì)胞模型主要用于進(jìn)行細(xì)胞水平及分子水平的研究，無(wú)法進(jìn)行個(gè)體整體水平的動(dòng)態(tài)研究及評(píng)估，近年來(lái)逐漸被動(dòng)物模型取代。動(dòng)物模型具有WD的整體特性，可以按研究需要及時(shí)采集或分批采集各種標(biāo)本樣品以了解疾病的發(fā)病過(guò)程及其機(jī)制；亦可嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件，排除干擾因素，從而提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可比性和重復(fù)性，使所得到的成果更準(zhǔn)確[4]，近年來(lái)成為Wilson病研究的熱點(diǎn)。目前WD的動(dòng)物模型主要為：(1)小鼠，如毒乳(toxic milk，TX)小鼠、Jackson毒乳(the Jackson laboratory toxic milk，TX-J)小鼠、ATP7B基因敲除(ATP7B-/-)小鼠；(2)大鼠，如Long-Evans cinnamon(LEC)大鼠、PINA和ATP7B基因有缺陷(LPP)大鼠；(3)大型哺乳動(dòng)物，如Bedlington犬、拉布拉多尋回犬及北羅納德賽羊。這些模型對(duì)研究銅的分布和代謝，肝、腦等器官病理生理表現(xiàn)以及疾病治療等方面具有重要價(jià)值[5]。現(xiàn)將以上動(dòng)物模型的國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究進(jìn)展綜述如下。

1 小鼠模型

小鼠與人類(lèi)在基因水平上高度同源，是復(fù)制人類(lèi)疾病的常用動(dòng)物[6]。目前WD的小鼠主要有模型TX小鼠、TX-J小鼠及ATP7B-/-小鼠。

1.1 TX小鼠

TX小鼠是由DL品系小鼠自然突變產(chǎn)生，由Rauch教授[7]于1983年首次提出。其表型特征為:色素沉著減少、生長(zhǎng)發(fā)育不良、震顫、行為運(yùn)動(dòng)異常。由于母鼠母乳喂養(yǎng)的致命影響，Rauch將這種新的突變品系命名為毒奶小鼠。

1.1.1 病理生理改變 TX小鼠約在2月齡開(kāi)始出現(xiàn)銅的沉積，首先是肝臟和腦，以肝臟為重，至第4個(gè)月沉積最為顯著，可達(dá)對(duì)照組的60～80倍[8]。到6個(gè)月大時(shí)，肝臟出現(xiàn)結(jié)節(jié)狀纖維化、膽管增生和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。在>6月齡的小鼠肝臟中發(fā)現(xiàn)肝實(shí)質(zhì)在形態(tài)學(xué)、超微結(jié)構(gòu)及完整性方面均與正常肝細(xì)胞存在巨大差異[9]。對(duì)這些小鼠肝臟病理生理的進(jìn)一步研究顯示，TX小鼠和WD患者的肝臟在大體形態(tài)、組織學(xué)和超微結(jié)構(gòu)異常方面有許多相似之處。除肝臟外小鼠的腦部也出現(xiàn)不同程度的損傷，Howell等[10]通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)TX小鼠在3月齡時(shí)腦內(nèi)的銅含量開(kāi)始升高，尤其是大腦皮層、紋狀體、丘腦、下丘腦、小腦和腦干。然而TX小鼠不同時(shí)期的腦損傷程度不同：疾病早期(3月齡)腦內(nèi)有銅沉積但無(wú)明顯病理?yè)p傷；疾病中期(6月齡)腦內(nèi)銅、鐵水平均升高，TX小鼠腦內(nèi)可見(jiàn)明顯脫髓鞘和軸突損傷，但無(wú)明顯神經(jīng)元壞死；在疾病的晚期(12月齡)TX小鼠腦內(nèi)可觀察到明顯的神經(jīng)細(xì)胞壞死跡象[11]。此外，與月齡相當(dāng)?shù)膶?duì)照組相比，TX小鼠所有腦功能區(qū)的金屬硫蛋白水平均明顯更高，這可用于解釋為何有些小鼠腦遭受銅毒性而癥狀缺乏[12]。

腎損傷也是WD常見(jiàn)的臨床特征之一，損傷可以發(fā)生在WD的任何時(shí)期[13]。WD患者的腎臟銅沉積損傷以近端腎小管上皮細(xì)胞最明顯, 遠(yuǎn)端腎小管及腎小囊也可受損[14]。由于過(guò)量的銅沉積于腎臟,引起腎小管上皮細(xì)胞扁平、基底膜增厚, 隨著銅沉積的進(jìn)一步加重可引起腎臟再吸收障礙而出現(xiàn)氨基酸尿、高鈣尿癥、高磷酸鹽尿和蛋白尿等[15]。

1.1.2 應(yīng)用研究 Chen等[16]在用200 mg/kg劑量的青霉胺治療4月齡TX小鼠3 d后發(fā)現(xiàn)，小鼠血清和大腦中游離銅濃度升高而大腦中蛋白質(zhì)結(jié)合銅濃度降低，持續(xù)給藥10和14 d，總銅水平隨之下降。游離銅的增加與皮質(zhì)和基底神經(jīng)節(jié)中氧化應(yīng)激的增加有關(guān)，這揭示了在開(kāi)始螯合治療后WD患者神經(jīng)系統(tǒng)癥狀有時(shí)出現(xiàn)惡化的原因。唐露露等[17]通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，與模型組比較，肝豆扶木湯高、中劑量組和青霉胺組血清ALT、AST明顯降低，Alb升高，表明肝豆扶木湯具有保護(hù)肝細(xì)胞損傷的作用，并且能有效地改善肝纖維化TX小鼠的肝組織病理。Zhang等[18]研究結(jié)果表明有絲分裂與WD小鼠的神經(jīng)損傷也有關(guān)，并發(fā)現(xiàn)肝豆靈可能通過(guò)調(diào)節(jié)pink1/parkin通路抑制海馬的有絲分裂，從而對(duì)TX小鼠腦神經(jīng)保護(hù)起重要作用。在另一個(gè)應(yīng)用TX小鼠模型的實(shí)驗(yàn)中，Buck等[19]對(duì)TX小鼠進(jìn)行了骨髓干細(xì)胞移植，并證明了5個(gè)月后銅代謝紊亂被部分糾正。然而，這種最初的反應(yīng)并沒(méi)有長(zhǎng)期保持下去，9個(gè)月后未再觀察到銅代謝和肝組織學(xué)的顯著改善。由于TX小鼠與WD患者突變基因相同且肝損傷表現(xiàn)突出，目前已廣泛應(yīng)用于WD研究。

1.2 TX-J小鼠

TX-J小鼠，又被稱(chēng)為Jackson毒乳小鼠，是在1987年緬因州巴爾港杰克遜實(shí)驗(yàn)室的C3H/HeJ動(dòng)物資源群體中發(fā)現(xiàn)的一種新的常染色體隱性突變體，其遺傳缺陷源于Atp7b基因外顯子8中2135位的一個(gè)自發(fā)隱性點(diǎn)突變，導(dǎo)致G712D錯(cuò)義，這與TX小鼠稍有差異。馬薩諸塞州大學(xué)Harold Rauch教授通過(guò)等位基因測(cè)試表明，TX-J突變與原始的TX突變是等位基因[20]。

1.2.1 病理生理改變 肝臟病理表現(xiàn)與TX-J小鼠月齡有密切關(guān)聯(lián)，純合子TX-J小鼠在3周齡時(shí)肝臟銅水平開(kāi)始升高，在3～5月齡時(shí)達(dá)到對(duì)照組的100倍。3月齡時(shí)TX-J小鼠線粒體嵴頂端發(fā)生囊性擴(kuò)張，這WD患者的病理表現(xiàn)相同。5月齡時(shí)，線粒體復(fù)合物檢測(cè)顯示復(fù)合物IV活性降低25%。6月齡TX-J小鼠線粒體中可見(jiàn)多形性變化、基質(zhì)密度增加和電子致密包體，此時(shí)肝臟細(xì)胞的細(xì)胞核也發(fā)生變化，出現(xiàn)核增大和核內(nèi)包涵體。肝臟結(jié)節(jié)在8～12個(gè)月時(shí)形成，此時(shí)肝臟大體形態(tài)相對(duì)正常，銅含量高而金屬硫蛋白含量低。Jończy等[21]用羅丹寧染色肝臟切片發(fā)現(xiàn)TX-J中的銅不僅在肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞中積累，也可沉積在非實(shí)質(zhì)細(xì)胞中。

與TX小鼠相同，在TX-J小鼠的神經(jīng)系統(tǒng)中也發(fā)現(xiàn)了銅的沉積。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)TX-J小鼠在3個(gè)月大的時(shí)候就表現(xiàn)出丘腦和豆?fàn)詈说你~過(guò)載。在小鼠12月齡時(shí)，其大腦紋狀體、海馬體和小腦中的銅濃度增加，但此時(shí)大腦皮層中的銅濃度沒(méi)有變化[22]。隨著銅的不斷沉積，大腦皮層中的銅濃度也有所升高[23]。當(dāng)對(duì)其行為進(jìn)行分析時(shí)發(fā)現(xiàn)，TX-J小鼠的行為也有輕微異常，其中包括偏好使用前肢及動(dòng)作笨拙等。

1.2.2 應(yīng)用研究 盡管TX-J小鼠發(fā)現(xiàn)較晚，但一些重要的WD干預(yù)和治療研究已經(jīng)廣泛使用該模型并取得了很好的效果。如一項(xiàng)描述銅螯合劑青霉胺對(duì)腦銅代謝影響的研究就是在TX-J小鼠中進(jìn)行的，該研究使用青霉胺對(duì)TX-J小鼠灌胃14 d后發(fā)現(xiàn)小鼠體內(nèi)游離銅的含量增加而蛋白質(zhì)結(jié)合銅濃度的含量降低。另外，Mordaunt等[24]發(fā)現(xiàn)與野生型小鼠相比，TX-J小鼠的胚胎肝臟中Txn1基因的表達(dá)顯著更高，在對(duì)母體補(bǔ)充四周的膽堿飲食后，表達(dá)可恢復(fù)到野生型水平。綜上所述，TX-J小鼠是一種較理想的WD模型，由于銅沉積出現(xiàn)較早，因此較適合進(jìn)行銅代謝等方面研究。

1.3 ATP7B-/-小鼠

近年來(lái)隨著基因工程的快速發(fā)展，利用同源重組技術(shù)敲除ATP7B基因第2外顯子的轉(zhuǎn)基因小鼠也越來(lái)越多的被用于WD研究。

1.3.1 病理生理改變 ATP7B-/-小鼠主要表現(xiàn)有低銅藍(lán)蛋白血癥、尿銅增加及肝臟銅沉積，與其他模型相比發(fā)病較早且肝損傷更嚴(yán)重。ATP7B-/-小鼠的肝臟病理?yè)p傷程度取決于銅暴露的時(shí)間和細(xì)胞內(nèi)銅的分布。肝損傷包括早期超微結(jié)構(gòu)改變、脂肪變性和輕度炎癥(1.5月齡時(shí))，隨后出現(xiàn)肝炎、發(fā)育不良和晚期壞死性炎癥(3～5月齡時(shí))。這些變化伴隨的是膽管增生、纖維化的發(fā)展，甚至是后期(9月齡)的腫瘤增生。然而，大多數(shù)小鼠在嚴(yán)重肝炎中存活下來(lái)，并在肝臟的大部分區(qū)域表現(xiàn)出顯著的再生。因此，ATP7B-/-小鼠不僅是研究銅中毒病理的有效模型，而且為研究銅中毒的代償機(jī)制和防御機(jī)制提供了途徑。此外，有關(guān)研究[25]表明在小鼠11月齡時(shí)腦實(shí)質(zhì)中的銅積累增加了2倍。目前對(duì)于ATP7B-/-小鼠神經(jīng)系統(tǒng)表現(xiàn)的研究還相對(duì)較少，有學(xué)者推測(cè)ATP7B-/-小鼠明顯缺乏神經(jīng)系統(tǒng)異常表現(xiàn)可能是由ATP7A的功能代償所致，有關(guān)機(jī)制有待進(jìn)一步研究探索。

1.3.2 應(yīng)用研究 肝臟中的銅含量較高使ATP7B-/-小鼠成為有價(jià)值的療效評(píng)估模型。Roybal等[26]在另一份報(bào)告中指出，妊娠早期肝細(xì)胞移植可顯著改善ATP7B-/-小鼠的銅濃度并降低肝臟病理?yè)p傷。同時(shí)，此研究也為WD子宮內(nèi)基因治療的有效性提供了依據(jù)。目前ATP7B基因敲除小鼠的研究重點(diǎn)是針對(duì)小鼠銅和脂質(zhì)代謝受損的藥物治療，但其制備復(fù)雜導(dǎo)致目前應(yīng)用尚不廣泛。但隨著分子生物學(xué)和基因工程技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展, ATP7B-/-小鼠將成為WD動(dòng)物模型研究的新方向。

2 大鼠模型

2.1 LEC大鼠

LEC大鼠是從Long-Evans大鼠群體中分離出來(lái)的突變大鼠的自交系,其與人類(lèi)基因同源性達(dá)80%以上。LEC大鼠主要表現(xiàn)出自發(fā)性肝銅異常積聚伴隨低血清銅和低銅藍(lán)蛋白，由于此與WD的表現(xiàn)類(lèi)似，因而被應(yīng)用于WD的研究。LEC大鼠約4月齡時(shí)出現(xiàn)暴發(fā)性肝炎或暴發(fā)性肝衰竭、轉(zhuǎn)氨酶和膽紅素升高及部分或大量肝細(xì)胞壞死，病死率>30%～40%，存活下來(lái)的大鼠多在12月齡時(shí)發(fā)生纖維化并伴有肝細(xì)胞癌和膽管癌。

2.1.1 病理生理改變 LEC大鼠的肝臟病理變化突出最早被應(yīng)用于肝炎和肝癌的研究，后發(fā)現(xiàn)其具有與WD相似的生化特征和臨床表現(xiàn)而廣泛應(yīng)用于WD的研究[4]。在大鼠6周齡時(shí)，肝組織學(xué)顯示細(xì)胞核大小發(fā)生改變，肝細(xì)胞膨脹，核分裂象增多；在黃疸出現(xiàn)之前的疾病早期階段，可出現(xiàn)細(xì)胞凋亡、Kupffer細(xì)胞和多形核白細(xì)胞數(shù)量增加；嚴(yán)重黃疸和膽紅素升高時(shí)，肝臟病理表現(xiàn)出膽汁淤積、肝細(xì)胞壞死和紅細(xì)胞吞噬。微陣列分析[27]表明，LEC大鼠肝疾病的進(jìn)展和肝銅積累與細(xì)胞色素P450相關(guān)的基因轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)、氧化應(yīng)激、DNA損傷和凋亡相關(guān)。其中氧化應(yīng)激機(jī)制主要包括：超氧化物歧化酶活性增加，谷胱甘肽比(GSH/GSSG)降低，以及肝臟硫代巴比妥酸活性物質(zhì)水平顯著升高[28]。Sternlieb等[29]發(fā)現(xiàn)電鏡下大鼠線粒體基質(zhì)密度明顯變化，嵴出現(xiàn)延伸、擴(kuò)張、堆積或消失，基質(zhì)內(nèi)含物有電子致密沉積。蛋白質(zhì)組學(xué)分析也證實(shí)了線粒體基質(zhì)蛋白表達(dá)水平的升高[30]。線粒體是銅中毒的主要靶點(diǎn)，銅中毒導(dǎo)致線粒體膜交聯(lián)和解體，最終導(dǎo)致肝細(xì)胞死亡[31]；12周齡時(shí)LEC大鼠表現(xiàn)出甘油三酯、游離膽固醇和膽固醇酯升高，有研究[32]顯示肝臟病理和肝銅積累與脂代謝的改變也有關(guān)聯(lián)。

與肝臟病理學(xué)相比，LEC大鼠的神經(jīng)系統(tǒng)表現(xiàn)和腦病理學(xué)研究較少。Hayashi等[33]發(fā)現(xiàn)大腦中的脫氧核糖核酸單鏈在24周時(shí)出現(xiàn)斷裂，銅在LEC大鼠的所有大腦區(qū)域積累，并在大約24周齡達(dá)到峰值。

2.1.2 應(yīng)用研究 LEC大鼠模型目前在國(guó)內(nèi)外已經(jīng)得到了廣泛應(yīng)用。有學(xué)者通過(guò)實(shí)驗(yàn)[34]證實(shí)灌胃青霉胺12周可以改善LEC大鼠的肝轉(zhuǎn)氨酶和組織學(xué)，從而預(yù)防肝炎的發(fā)生。早期應(yīng)用曲恩汀螯合銅可預(yù)防肝炎的發(fā)生，顯著改善肝組織學(xué)，并在長(zhǎng)期內(nèi)減少肝細(xì)胞癌和膽管纖維化的發(fā)生。急性肝炎發(fā)作后早期給予大鼠四硫鉬酸鹽可以減輕肝損傷[35]。與空白對(duì)照組相比，鋅可以預(yù)防LEC大鼠肝炎的發(fā)展，并提高其存活率，有學(xué)者猜測(cè)其潛在機(jī)制可能與金屬硫蛋白的肝轉(zhuǎn)錄水平增加和氧化應(yīng)激降低有關(guān)。

近些年在LEC大鼠上進(jìn)行的研究闡明了基于肝細(xì)胞和干細(xì)胞移植以及基因技術(shù)治療WD的可能性。臨床上許多WD患者需要進(jìn)行肝移植，但由于供體器官短缺限制了此治療手段的應(yīng)用，因此通過(guò)細(xì)胞或基因治療來(lái)永久治愈患者就成為WD治療的一大突破。Jaber等[36]研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞治療是可行的，移植的肝細(xì)胞可整合到肝實(shí)質(zhì)并能恢復(fù)缺乏的功能。有關(guān)研究[37]表明，通過(guò)門(mén)靜脈向LEC大鼠肝臟注入ATP7B轉(zhuǎn)導(dǎo)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與ATP7B表達(dá)增加、銅藍(lán)蛋白水平升高、肝臟銅濃度降低、AST和ALT水平降低相關(guān)，且在門(mén)靜脈輸注干細(xì)胞前進(jìn)行放療預(yù)處理和缺血再灌注，可獲得最佳的肝移植和再增殖效果。綜上所述，LEC大鼠是一種銅快速積累模型，在4月齡時(shí)由于嚴(yán)重肝炎和之后的肝細(xì)胞癌導(dǎo)致病死率很高。由于其肝病進(jìn)展迅速，因此特別適合用于進(jìn)行干預(yù)研究。

2.2 LPP大鼠

為了消除非ATP7B突變對(duì)表型的影響，Ahmed等[38]將LEC大鼠與PVG大鼠雜交，后者為野生型，具有NAT(N-乙酰基轉(zhuǎn)移酶)、ATP7B基因和正常毛色，這一過(guò)程產(chǎn)生了具有野生型大鼠NAT和毛色但ATP7B發(fā)生突變的新鼠種，稱(chēng)為L(zhǎng)PP大鼠。LPP大鼠自出生后肝銅逐漸積累，并在90天左右出現(xiàn)肝生化異常，一旦肝疾病迅速進(jìn)展，未經(jīng)治療的LPP大鼠可在30天內(nèi)死亡[39]。

2.2.1 病理生理改變 與LEC大鼠相似，LPP大鼠的主要特征是肝硬化、嚴(yán)重黃疸，并經(jīng)常在4月齡死亡[38]。Lichtmannegger等[40]研究發(fā)現(xiàn)LPP肝臟的顯微外觀與WD患者相似，表現(xiàn)出進(jìn)行性肝纖維化和線粒體異常。

2.2.2 應(yīng)用研究 有研究[40]表明甲烷氧化菌素作為一種長(zhǎng)期螯合劑在治療LPP大鼠急性肝衰竭方面有效，通過(guò)每天注射兩次持續(xù)1周可恢復(fù)肝臟銅水平、肝功能和肝質(zhì)量，并可防止大鼠死亡。

3 其他大型哺乳動(dòng)物模型

一些大型哺乳動(dòng)物在銅代謝方面也存在遺傳缺陷，均表現(xiàn)出銅在肝臟中積累和銅毒性，例如犬(杜賓犬、拉布拉多尋回犬、Bedlington犬)和北羅納德賽羊等。然而其潛在的遺傳缺陷與WD不同，故作為WD模型的作用是有限的。下面以Bedlington犬、拉布拉多尋回犬及北羅納德賽羊進(jìn)行舉例。

3.1 Bedlington犬 Bedlington犬最早也曾被當(dāng)作Wilson病的動(dòng)物模型。由于肝銅的聚集引起肝損傷和繼發(fā)性溶血并表現(xiàn)出與Wilson病患者相似的肝纖維化和肝硬化的肝銅中毒跡象而曾被用作Wilson病動(dòng)物模型進(jìn)行銅負(fù)荷的相關(guān)研究[41]。然而，其潛在的遺傳缺陷是在COMMD1基因中發(fā)現(xiàn)的而非ATP7B基因[42]。雖然其肝臟銅的積聚和肝臟病理與WD相似，但與嚙齒動(dòng)物模型一樣，不存在明顯的神經(jīng)系統(tǒng)缺陷且銅藍(lán)蛋白濃度正常，故目前該模型較少被使用。

3.2 拉布拉多尋回犬 2016年，一項(xiàng)關(guān)于拉布拉多尋回犬銅中毒的全基因組關(guān)聯(lián)(GWAS)研究[43]表明，C端ATP7B的精氨酸至谷氨酰胺突變與肝臟銅含量增加有關(guān)聯(lián)，從而將其確立為進(jìn)一步的Wilson病動(dòng)物模型。

3.3 北羅納德賽羊 北羅納德賽羊是另一個(gè)有趣的哺乳動(dòng)物肝臟和神經(jīng)系統(tǒng)銅積累模型。然而，與犬類(lèi)模型一樣，其在臨床上和遺傳學(xué)上與WD不同[44]。其潛在的基因缺陷目前仍然未知。然而，該模型對(duì)于研究銅在大腦中的積累等方面有一定的重要性[42]。此外，這種動(dòng)物模型可能有助于識(shí)別能夠抑制肝星狀細(xì)胞激活和增殖的藥物，這已被認(rèn)為是治療肝纖維化的潛在靶點(diǎn)[45]。

以上幾種大型哺乳動(dòng)物對(duì)于WD的研究有一定價(jià)值，為WD的潛在模型，有待進(jìn)一步探索發(fā)掘。

每種動(dòng)物模型都有其特定的屬性。一方面，大多數(shù)WD動(dòng)物模型表現(xiàn)出肝臟和腦組織銅含量增加、脂質(zhì)代謝異常、銅藍(lán)蛋白水平低、金屬硫蛋白水平增加，這些表型與WD患者相同或相似。但另一方面，有些表型與WD患者也有差異。現(xiàn)將一些常見(jiàn)動(dòng)物模型的特點(diǎn)進(jìn)行總結(jié)(表1)。

表1 常見(jiàn)WD動(dòng)物模型特點(diǎn)

4 結(jié)語(yǔ)

一種理想的疾病動(dòng)物模型對(duì)疾病的基礎(chǔ)和臨床研究意義重大，上述列舉的動(dòng)物模型各有優(yōu)劣，其大多顯示出與人類(lèi)肝臟很好的相似性。從TX小鼠的輕度肝病到ATP7B-/-小鼠更明顯的病理，再到LEC大鼠的暴發(fā)性肝衰竭和死亡, 為學(xué)者們提供了一系列肝病模型，有助于提高對(duì)WD肝臟病理生理的認(rèn)識(shí)，但其與WD患者的表現(xiàn)也有明顯的差異，如大多缺乏令人信服的神經(jīng)癥狀、特定的大腦病理以及K-F環(huán)。由于神經(jīng)系統(tǒng)病變?cè)谠S多WD患者均能觀察到，顯然需要在這個(gè)領(lǐng)域進(jìn)行更多的研究，需要更為理想的動(dòng)物模型來(lái)用于WD相關(guān)研究。一個(gè)穩(wěn)定可靠、易于復(fù)制、經(jīng)濟(jì)易得且能夠準(zhǔn)確反映WD患者的所有臨床表型特征動(dòng)物模型，將為WD的深入研究提供強(qiáng)力支持。

利益沖突聲明：所有作者均聲明不存在利益沖突。

作者貢獻(xiàn)聲明：楊玉龍、魏濤華負(fù)責(zé)課題設(shè)計(jì)，撰寫(xiě)論文；郝文杰、楊?lèi)偂㈠X(qián)南南、李祥、江海林參與收集數(shù)據(jù)，修改論文；楊文明負(fù)責(zé)擬定寫(xiě)作思路，指導(dǎo)撰寫(xiě)文章并最后定稿。