miR-125b、miR-29a、miR-425-5p在子宮內膜癌患者血清中表達水平變化及臨床意義

邱 菊,嚴 婭,龔凈嫻,田春艷

1.電子科技大學醫學院附屬綿陽醫院/綿陽市中心醫院婦產科，四川綿陽 621000;2.四川大學華西醫院消化內科/四川大學華西護理學院，四川成都 610000

子宮內膜癌為婦科常見疾病之一，發病原因目前尚未完全明確，但如未及時診斷及干預可促使病情發生進展，難以進行根治性治療，影響患者生命安全及生命質量。子宮內膜癌的發生和發展與多種分子生物學指標的變化密切相關，微小核糖核苷酸(miRNA)是一種重要的非編碼RNA，長度為19～24 nt，可參與基因水平調控、細胞的增殖及死亡等多種過程，誘導抑癌基因及癌基因的表達失常，最終導致腫瘤的發生。其中miR-125b的前體分別位于11號和21號染色體，可通過調節上游及下游多個靶標活性，進而促進或抑制腫瘤的發生和發展；miR-29a位于7號染色體，可通過調控脫氧核糖核苷酸(DNA)甲基化、細胞凋亡控制參與腫瘤細胞的周期調節；miR-425-5p位于染色體的1p13.3，可調節多種生物學過程，在多種疾病的發生發展中發揮作用，但目前miR-125b、miR-29a、miR-425-5p在子宮內膜癌發生及發展中的意義尚未完全明確[1-3]。本研究旨在探究miR-125b、miR-29a、miR-425-5p在子宮內膜癌患者血清中相對表達水平變化及臨床意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2019年5月至2021年3月綿陽市中心醫院收治的124例子宮內膜癌患者作為子宮內膜癌組，另選擇同期體檢的124例健康女性作為健康對照組。子宮內膜癌組年齡23～74歲，平均(50.11±7.23)歲；體質量指數(BMI)21～28 kg/m2，平均(24.25±1.43)kg/m2。健康對照組年齡22～77歲，平均(49.68±7.75)歲；BMI 20～28 kg/m2，平均(24.12±1.52)kg/m2。兩組年齡、BMI等一般資料比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。納入標準：(1)子宮內膜癌診斷符合《子宮內膜癌診斷與治療指南(第4版)》[4]中相關診斷標準；(2)臨床資料完整；(3)此前未接受腫瘤相關治療；(4)簽署知情同意書。排除標準：(1)合并子宮內膜結核、宮腔積液、內分泌功能失調者；(2)妊娠期及哺乳期女性；(3)合并其他惡性腫瘤、肝腎功能不全者；(4)合并嚴重感染、風濕性免疫疾病者。本研究經本院醫學研究倫理委員會審核通過。

1.2方法

1.2.1檢測指標 觀察并比較兩組血清miR-125b、miR-29a、miR-425-5p相對表達水平，采用Pearson相關分析其與腫瘤臨床分期、淋巴結轉移的關系。根據FIGO標準[5]將子宮內膜癌患者分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期，根據患者組織分化程度分為低、中、高分化，分析不同腫瘤臨床分期(Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期)、分化程度(中高分化、低分化)血清miR-125b、miR-29a、miR-425-5p相對表達水平。觀察子宮內膜癌患者淋巴結轉移、肌層浸潤情況，分析不同淋巴結轉移、肌層浸潤情況患者血清miR-125b、miR-29a、miR-425-5p相對表達水平。采用Pearson相關分析了解miR-125b、miR-29a、miR-425-5p的相關性。

1.2.2檢測miR-125b、miR-29a、miR-425-5p方法 應用實時熒光定量聚合酶鏈式反應(PCR)檢測兩組血清miR-125b、miR-29a、miR-425-5p相對表達水平。取研究者空腹靜脈血5 mL，離心(3 500 r/min，10 min)取上清液備用，按總RNA試劑盒(德國QIAGEN公司)操作說明書提取血清總RNA，以miRNA反轉錄試劑盒(日本TaKaRa公司)將2 μL純凈無降解總RNA反轉錄為互補脫氧核糖核酸(cDNA)，按照SYBR Green PCR Mastermix試劑(日本TaKaRa公司)說明加配反應體系，引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。體系加配完成后放入CFX96實時熒光定量PCR儀(美國BIO-RAD公司)反應，收集數據，采用2-ΔΔCt計算血清miR-125b、miR-29a、miR-425-5p相對表達水平，以U6作為內參基因；miR-125b正向引物5′-3′TCC CTG AGA CCC TAA CTT GT，反向引物5′-3′CAA GTT AGG GTC TCA GGG A；miR-29a正向引物5′-3′CTG AGT TTC TAT TTA GAC ACT ACA ACA，反向引物5′-3′ACA ATT TGA CAT GTG GCA TTA ACG；miR-425-5p正向引物5′-3′GGG GAG TTA GGA TTA GGT C，反向引物5′-3′TGC GTG TCG TGG AGT C；U6正向引物5′-3′ CTG GCT TCG GCA GCA CA，反向引物5′-3′ AAC GCT TCA CGA ATT TGC GT。

2 結 果

2.1兩組血清miR-125b、miR-29a、miR-425-5p相對表達水平比較 子宮內膜癌組miR-425-5p相對表達水平明顯高于健康對照組，miR-125b、miR-29a相對表達水平明顯低于健康對照組(P<0.05)。見表1。

表1 兩組血清miR-125b、miR-29a、miR-425-5p相對表達水平

2.2不同腫瘤臨床分期、分化程度患者血清miR-125b、miR-29a、miR-425-5p相對表達水平比較 Ⅰ～Ⅱ期子宮內膜癌患者miR-125b、miR-29a相對表達水平高于Ⅲ～Ⅳ期患者，miR-425-5p相對表達水平低于Ⅲ～Ⅳ期患者(P<0.05)；中高分化子宮內膜癌患者miR-125b、miR-29a相對表達水平高于低分化患者，miR-425-5p相對表達水平低于低分化患者(P<0.05)。見表2。

表2 不同腫瘤臨床分期、分化程度患者血清miR-125b、miR-29a、miR-425-5p相對表達水平比較

2.3不同淋巴結轉移、肌層浸潤患者血清miR-125b、miR-29a、miR-425-5p相對表達水平比較 淋巴結轉移的子宮內膜癌患者miR-125b、miR-29a相對表達水平高于無淋巴結轉移患者，miR-425-5p相對表達水平低于無淋巴結轉移患者(P<0.05)；淺肌層浸潤的子宮內膜癌患者miR-125b、miR-29a相對表達水平高于深肌層浸潤患者，miR-425-5p相對表達水平低于深肌層浸潤患者(P<0.05)。見表3。

表3 不同淋巴結轉移、肌層浸潤患者血清miR-125b、miR-29a、miR-425-5p相對表達水平比較

2.4子宮內膜癌患者血清miR-425-5p與miR-125b、miR-29a的相關性分析 Pearson相關分析結果顯示，子宮內膜癌患者miR-425-5p與miR-125b、miR-29a均呈負相關(r=-0.419、-0.436，P<0.05)。

3 討 論

有研究表明，我國子宮內膜癌的發病率、病死率均呈上升趨勢，5年生存率低于30%，且患者的整體發病年齡趨向年輕化，分析子宮內膜癌發病機制、尋找疾病診斷及治療的新靶點對改善患者預后具有重要意義[6]。miRNA可在轉錄后發揮對靶基因的調控作用，影響相關蛋白表達，進而參與疾病的發生及發展。目前，子宮內膜癌患者miRNA的差異性表達，以及其功能變化為臨床研究的重點和熱點。

miR-425-5p廣泛表達于人體的多個組織，靶基因功能包括蛋白去磷酸化、神經元分化信號轉導負調控、調節轉移酶活性、控制氮化合物反應等生物學過程，可能與CTNNA3 3′非翻譯區結合，進而降低其對Akt信號通路的抑制作用，最終使細胞周期抑制劑p21的表達降低，難以發揮抑癌作用[7]。GU等[8]研究結果顯示，miR-425-5p/RIP1軸可介導細胞凋亡及炎癥信號級聯反應；XIAO等[9]研究表明，miR-425-5p/可能通過介導PTEN表達，促進腫瘤細胞增殖和遷移，并參與乳腺癌組織的發展，可能作為其預后判斷指標。本研究結果顯示，子宮內膜癌組miR-425-5p相對表達水平明顯高于健康對照組，Ⅰ～Ⅱ期子宮內膜癌患者miR-425-5p相對表達水平低于Ⅲ～Ⅳ期患者，中高分化子宮內膜癌患者miR-425-5p相對表達水平低于低分化患者，有淋巴結轉移及深肌層浸潤的子宮內膜癌患者miR-425-5p相對表達水平均較無淋巴結轉移及淺肌層浸潤患者的子宮內膜癌患者更高，提示miR-425-5p可能作為提示子宮內膜癌發生及發展的靶因子，其水平升高與疾病進展密切相關。LU等[10]研究結果顯示，胰腺癌組織中miR-425-5p的表達水平與白細胞介素-23水平呈正相關，且胰腺癌患者腫瘤組織中miR-425-5p的表達水平與淋巴結轉移、臨床分期、分化程度相關，提示miR-425-5p的過表達與胰腺癌的發生與發展密切相關，與本研究結果相互印證。

有研究表明，miR-125b可下調BAK1的表達，從而抑制癌細胞轉移與增殖[11]。LIU等[12]研究顯示，miR-125b對PI3K/AKT通路有抑制作用，可誘導膀胱癌細胞凋亡，miR-125b可發揮抑癌基因作用。CHEN等[13]研究也證實，miR-125b的低表達與上皮性卵巢癌的發生、進展和轉移有關，還可降低化療的敏感性。本研究結果顯示，子宮內膜癌組miR-125b相對表達水平明顯低于健康對照組，Ⅰ～Ⅱ期子宮內膜癌患者miR-125b相對表達水平高于Ⅲ～Ⅳ期患者，中高分化子宮內膜癌患者miR-125b相對表達水平高于低分化患者，淋巴結轉移的子宮內膜癌患者miR-125b相對表達水平高于無淋巴結轉移患者，深肌層浸潤的子宮內膜癌患者miR-125b相對表達水平高于深肌層浸潤患者，與上述研究結果類似。有研究結果顯示，miR-29a在腫瘤的發生與發展中具有雙重作用[14-15]。本研究中子宮內膜癌組miR-29a相對表達水平明顯低于健康對照組，Ⅰ～Ⅱ期、中高分化子、有淋巴結轉移、深肌層浸潤的子宮內膜癌患者miR-29a相對表達水平較Ⅲ～Ⅳ期、低分化、無淋巴結轉移、淺肌層浸潤的子宮內膜癌患者更高，提示miR-29a低表達可促進子宮內膜癌的發生。miR-29a能與DNA甲基轉移酶3A中結構互補，進而控制遺傳基因的復制，miR-29a對基因組的異常甲基化具有調節作用，可增強抑癌基因的表達，miR-29a還可抑制磷脂酰肌醇激酶調節亞基p85a活性，從而促進細胞凋亡，并控制細胞周期蛋白E減少，使細胞周期停滯，最終直接發揮抑癌作用[16-18]。此外，本研究中Pearson相關分析結果顯示，子宮內膜癌患者miR-425-5p與miR-125b、miR-29a均呈負相關，提示miR-125b、miR-29a、miR-425-5p表達可能存在一定聯系，miR-425-5p表達上調、miR-125b及miR-29a表達下調可能具有類似的上游調節因素，或三者表達存在直接相互促進或抑制作用，尚待進一步研究予以證明。

miR-425-5p在子宮內膜癌患者血清中相對表達水平升高，miR-125b、miR-29a在子宮內膜癌患者血清中相對表達水平降低，miR-425-5p與miR-125b、miR-29a呈負相關，且三者水平與臨床分期、淋巴結轉移密切相關，可能作為子宮內膜癌診斷、治療的新型靶點，值得臨床進一步研究應用。