皖南地區MTHFR 和PAI-1 基因多態性分布及與不良妊娠相關性研究*

葉 鳴，方 佳，趙 磊，愛 琳，汪思敏，朱和平

（安徽省蕪湖市中醫醫院，安徽 蕪湖 241000）

育齡婦女葉酸缺乏可導致胎兒神經管畸形、胎盤早期剝離、早產等風險。近年來，對葉酸代謝相關基因5，10 - 亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）C677T 和MTHFR A1298C的研究較多，根據不同基因型個體化給予葉酸，可有效減少不良妊娠事件［1-2］。血漿纖溶酶原激活物抑制劑-1（PAI-1）是多功能線性糖蛋白，可調節纖溶酶活性，與不明原因流產有相關性［3］。本研究中以皖南地區育齡婦女為研究對象，探討了MTHFR 和PAI- 1 基因多態性的分布特征，以及與不良妊娠的相關性。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入標準：漢族；相互無血緣關系；年齡22～45歲，平均（31.00 ± 4.25）歲；要求備孕的婦女或妊娠期（孕周不超過20 周）。本研究經我院醫學倫理委員會批準，患者簽署知情同意書。

排除標準：糖尿病等基礎疾病；異位妊娠；血栓栓塞性疾病及家族遺傳史；明確原因流產。

對象選擇與分組：選取我院2020年10月至2021年8月收治的育齡婦女196 例，最終納入122 例。根據既往妊娠史分為正常組（無不良妊娠史）和研究組（有不良妊娠史，包括胚胎停育、自然流產、生化妊娠、畸胎），各61 例。兩組研究對象年齡、體質量指數、吸煙史、飲酒史等一般資料比較，差異均無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。另選擇天津［4］、寧夏［5］、廊坊［6］、貴州［7］已服用葉酸的育齡婦女各150例、383例、922例、236例。

1.2 方法

采集兩組對象外周靜脈血2～3 mL，取200 μL，加入1 mL 氯化銨，混勻，靜置5 min，采用Scilogex D1008E型離心機（廣州碩普生物科技有限公司）室溫下離心（轉速為3000 r/ min）5 min，吸凈上層透明紅色液體，向富集白細胞的離心管中加入30～50 μL 耀金保（北京華夏時代基因科技發展有限公司），靜置30 min；向相應編號的耀金分試劑盒（北京華夏時代基因科技發展有限公司）中加入1.5 μL 處理后的白細胞樣本，采用Fluotec 48E 型微量熒光檢測儀（西安天隆科技有限公司）檢測；運用數字熒光分子雜交技術分析MTHFR C677T（rs1801133）、MTHFR A1298C（rs1801131）、PAI-1（rs1799889）基因分型。

1.3 統計學處理

采用SPSS 18.0統計學軟件分析。計數資料以率（%）表示，行χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 基因型符合Hardy-Weinberg 平衡定律

MTHFR C677T，MTHFR A1298C，PAI-1 基因分布均符合Hardy - Weinberg 平衡定律（P＞0.05），數據來自同一孟德爾群體。詳見表1。

表1 Hardy-Weinberg平衡定律分析［例（%），n=122］Tab.1 Analysis of Hardy-Weinberg equilibrium law［case（%），n=122］

2.2 基因型分布特點

122例皖南地區育齡婦女的MTHFR C677T，MTHFR A1298C，PAI-1基因型分布見表2。皖南地區PAI-1基因多態性與天津、寧夏比較，無顯著差異（P=0.40，0.80），詳見表3。根據MTHFR C677T 和MTHFR A1298C 基因型將育齡婦女的MTHFR 酶活性分為正常（677CC/1298AA）、低風險（677CT/ 1298AA、677CC/ 1298AC、677CC/ 1298CC）、中風險（677TT/ 1298AA、677TT/1298AC、677CT/ 1298CC、677CT/ 1298AC）、高 風 險（677TT/1298CC）［8］。與廊坊比較，低風險、中風險數有顯著差異（P＜0.05）；與貴州比較，正常及中風險數有顯著差異（P＜0.05）。詳見表4。MTHFR 酶活性正常占比由高到低依次為貴州（24.15%）、皖南地區（8.20%）、廊坊（7.48%）。

表2 皖南地區育齡婦女MTHFR C677T，MTHFR A1298C，PAI-1基因型分布［例（%），n=122］Tab.2 Distribution of MTHFR C677T，MTHFR A1298C and PAI-1 genotypes of childbearing-aged women in Southern Anhui［case（%），n=122］

表3 皖南地區與其他地區育齡婦女PAI-1基因多態性比較［例（%）］Tab.3 Comparison of PAI-1 gene polymorphism of childbearingaged women in Southern Anhui and other regions［case（%）］

表4 皖南地區與其他地區育齡婦女MTHFR酶活性比較［例（%）］Tab.4 Comparison of MTHFR enzyme activity of childbearingaged women in Southern Anhui and other regions［case（%）］

2.3 MTHFR 和PAI-1 基因型與不良妊娠史的相關性

122 例育齡婦女中，61 例既往有不良妊娠史，61 例無不良妊娠史，兩組MTHFR C677T CC、TT 基因型比較，正常組CC型較研究組多，研究組TT型較正常組多，有顯著差異（P＜0.05）；兩組MTHFR C677T C 和T 等位基因分布比較，有顯著差異（P＜0.05）。兩組PAI - 14G4G、5G5G 基因型比較，正常組5G5G 型較研究組多，研究組4G4G 型較正常組多，有顯著差異（P＜0.05）；兩組PAI - 14G 和5G 等位基因分布比較，有顯著差異（P＜0.05）。MTHFR A1298C AA、AC、CC 基因型兩組間無顯著差異（P＞0.05）。詳見表5。

3 討論

本研究結果表明，MTHFR 基因C677T 和PAI-1 多態性與不良妊娠有相關性，MTHFR酶活性與廊坊、貴州地區有差異，PAI-1與天津、寧夏地區無差異。

MTHFR 是葉酸代謝的關鍵作用酶，但人類MTHFR基因呈多態性分布，其中C677T（rs 1801133）和A1298C（rs 1801131）為常見突變位點。基因突變會影響酶的活性，導致葉酸代謝障礙，進而增加胎兒畸形發生率［9-10］。據報道，MTHFR 677TT 基因型婦女在孕前及孕早期未服用葉酸，唇腭裂兒的發生風險將增加5.9 倍；而677TT 純合子突變會使神經管缺陷兒的發生風險增加2 倍［11］。一項Meta 分析結果顯示，MTHFR A1298C 會增加非綜合性唇腭裂發生風險［12］。MTHFR 677T 等位基因是發生習慣性流產及胎兒神經管發育缺陷的高危因素，習慣性流產與MTHFR 1298A 突變為C 有關［13］，故C677T與A1298C共同影響MTHFR 酶的活性。育齡婦女MTHFR 677T 型等位基因頻率在緯度上呈“南低北高”趨勢［11］，葉酸利用風險存在民族差異［14］，故選取北方地區的廊坊和少數民族眾多的貴州進行對比，結果與文獻［11，14］報道相似。本研究中葉酸利用風險皖南地區優于廊坊，較貴州差。可能是由于南方和北方人群的生活環境不同，存在遺傳差異，也可能與本研究中主要選擇漢族人群有關。后續需進一步研究MTRR A66G 皖南地區多態性特點，為育齡婦女合理利用葉酸提供科學指導。由表5可知，與正常組相比，研究組育齡婦女的MTHFR 基因C667T位點CC和TT基因型，以及C和T等位基因頻率有顯著差異（P＜0.05）；MTHFR A1298C 位點AA 和CC 基因型及A 和C 等位基因頻率無顯著差異（P＞0.05），與文獻［8］的報道相似。A1298C 多態性對酶活性的影響小于C677T多態性。

表5 兩組研究對象MTHFR和PAI-1基因型頻率分布［例（%），n=61）Tab.5 Frequency distribution of MTHFR and PAI-1 genotypes between the two groups［case（%），n=61］

PAI-1為纖溶酶原激活物抑制基因，4G等位基因會升高血漿PAI-1水平，使體內凝血-纖溶系統失去平衡，導致胚胎供血不足，引發自然流產［15］。本研究中，兩組育齡女性的PAI-1基因多態性差異顯著（P＜0.05），且研究組4G4G高于正常組。寧夏主要分布少數民族，天津與皖南地區PAI-1基因型分布有差異，但基因分布頻率無顯著差異（P＞0.05），這可能與地區差異、種族差異無關。

綜上所述，皖南地區育齡婦女的葉酸利用風險較貴州高，MTHFR C677T和PAI-1基因多態性與不良妊娠有相關性，需在全市育齡婦女中重點推廣葉酸的補充，以及進行PAI-1基因篩查，以降低不良妊娠風險。后續將對122例被調查對象進行個體化葉酸用藥指導，并全程跟蹤調查，監測血壓、尿常規、凝血等指標，進行個體化藥學服務。