MTHFR、PAI-1基因多態性與反復性流產的關系研究

張年寶 趙夢嵐

反復性流產患者發病因素復雜，研究認為反復性流產發生與甲狀腺功能低下、黃體功能不全、子宮疾病等因素有關[1]。隨著現代分子生物學研究的進展，遺傳因素在不良妊娠中的作用已逐漸引起臨床重視。亞甲基四氫葉酸還原酶(methylene tetra hydro folate reductase，MTHFR)、纖溶酶原激活劑抑制物-1(plasminogen activator inhibitor-1，PAI-1)基因多態性與代謝及凝血有關[2,3]。而代謝及凝血異常可影響胚胎發育，被證實在反復性流產中發揮重要作用[4]。由此推測MTHFR、PAI-1基因多態性與反復性流產有關，但目前現有研究報道筆者所見較少。基于此，本研究觀察MTHFR、PAI-1多態性與反復性流產的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年1月至2020年1月在我院接受檢查的338例孕婦，年齡19～43歲，平均年齡(29.25±5.65)歲；孕前體重指數(body mass index，BMI)17～21 kg/m2，平均(19.13±1.37)kg/m2；停經時間30～67 d，平均(45.18±7.59)d；孕次0～4次，平均(2.59±0.77)次。醫院醫學倫理委員會批準本研究，孕婦及家屬簽署知情同意書。

1.2 納入與排除標準

1.2.1 納入標準：①孕婦懷孕期間飲食及運動適宜，無不良嗜好；②經檢查，孕婦生殖系統解剖結構正常；③均為自然妊娠。

1.2.2 排除標準：①患有感染的孕婦；②合并甲狀腺功能異常(甲狀腺功能亢進或甲狀腺功能減退)孕婦；③孕婦或其配偶染色體、生殖抗體異常；④合并妊娠期糖尿病、妊娠期高血壓等并發癥孕婦。

1.3 方法

1.3.1 基線資料:收集孕婦基線資料，包括年齡、孕前BMI、停經時間、孕次、孕期每天睡眠時間(分為≤8 h、>8 h)、孕期有無性生活(分為有、無)。

1.3.2 MTHFR、PAI-1基因多態性檢測:抽取患者空腹肘靜脈血3 ml，將滅菌注射用水與氯化鈉溶液(北京華夏時代基因科技發展有限公司)按照9∶1的比例混合，制成工作液。取血液標本200 μl，與1 ml工作液混合，以3 500 r/min的速度、10 cm的離心半徑離心5 min，去除上清，向管中加入20 μl耀金保試劑(北京華夏時代基因科技發展有限公司)，制成白細胞保存液。取1.5 μl白細胞保存液，加入耀金分試劑(北京華夏時代基因科技發展有限公司)，置入檢測儀。采用西安天隆科技有限公司L998A熒光檢測儀檢測MTHFR、PAI-1基因型頻率分布，檢測技術為原位雜交熒光染色分析技術，采用分析系統自動判讀熒光信號值，獲取熒光曲線圖，進行C677T、1298、4G/5G基因型分型，并行陽性質控。

1.3.3 反復性流產評估:參照《婦產科學》[5]，以患者有連續≥2次自然流產為反復性流產，將患者分為反復性流產組與與非反復性流產組，比較2組基線資料及基因型頻率分布，分析基因多態性與反復性流產的關系。

2 結果

2.1 孕婦反復性流產情況及基線資料 338例孕婦中，反復性流產108例(31.95%)，非反復性流產230例(68.05%)；2組年齡、孕前BMI、停經時間、孕次、孕期每天睡眠時間、孕期有無性生活比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 2組基線資料比較

2.2 2組PAI-1基因型頻率分布 2組PAI-1基因型頻率分布差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 2組PAI-1基因型頻率分布 例(%)

2.3 2組MTHFR基因型頻率分布 2組MTHFR基因C677T基因型頻率分布比較，差異有統計學意義(P<0.05)；2組MTHFR基因A1298C基因型頻率分布，差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 2組MTHFR基因型頻率分布 例(%)

2.4 2組等位基因頻率分布 反復性流產組總突變T等位基因頻率高于非反復性流產組，4G等位基因頻率高于非反復流產組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 2組等位基因頻率分布 例(%)

2.5 MTHFR、PAI-1基因多態性與反復性流產的關系 將MTHFR基因C677T基因型及PAI-1基因4G/5G基因型頻率、等位基因頻率作為自變量；將反復性流產作為因變量(1=反復性流產，0=非反復性流產)，Logistic回歸分析顯示，MTHFR基因C677T基因型及PAI-1基因4G/5G基因型頻率、等位基因頻率與反復性流產的發生密切相關，基因型TT、CT、4G4G，C677T等位基因T，4G/5G等位基因4G是反復性流產發生的風險因子(OR>1，P<0.05)。見表5、6。

表5 自變量賦值情況

表6 MTHFR、PAI-1基因多態性與反復性流產關系的Logistic回歸分析

3 討論

反復性流產使生育年齡夫妻承受巨大的心理壓力，除已知的多項因素外，部分反復性流產患者尚無明確病因，涉及到基因位點突變[6]。研究報道，MTHFR、PAI-1基因突變包括較多位點，C677T、A1298C及4G/5G基因型仍然是其中最為常見的突變位點[7]。

研究進一步證實，MTHFR、PAI-1基因突變與流產發生密切相關[8]。本研究結果顯示，338例孕婦中，有108例(31.95%)為反復性流產。在排除反復性流產的多項相關因素后，比較2組基線資料證實差異無統計學意義。進一步分析MTHFR、PAI-1基因多態性與反復性流產的關系，結果顯示，2組MTHFR基因C677T基因型頻率及PAI-1基因型頻率分布比較差異有統計學意義(P<0.05)，反復性流產組總突變T等位基因頻率高于非反復性流產組，4G等位基因頻率高于非反復流產組。

Logistic回歸分析顯示，MTHFR基因C677T基因型及PAI-1基因4G/5G基因型頻率、等位基因頻率與反復性流產的發生密切相關，基因型TT、CT、4G4G是反復性流產發生的風險因子。分析MTHFR基因C677T基因型及PAI-1基因4G/5G基因型頻率與反復性流產的關系在于：MTHFR參與機體代謝過程，可將同型半胱氨酸轉變為S-腺苷蛋氨酸，蛋氨酸是重要甲基供體，可影響DNA甲基化，進而影響血管形成及胚胎生長發育[9,10]。在孕期前3個月內，胚胎處于高蛋氨酸、低同型半胱氨酸狀態，而在MTHFR基因C677T基因型為TT或CT的患者中，酶活性較高，MTHFR基因可發揮強效催化作用，促使5，10-亞甲基四氫葉酸還原成5-甲基四氫葉酸，加速同型半胱氨酸轉變為S-腺苷蛋氨酸，增加流產風險[11]。PAI-1位于7號染色體上，可經滋養層入侵，控制蛋白質水解[12]。而在PAI-1基因4G/5G基因型為4G4G的患者中，4G4G純合子基因攜帶者體內PAI-1濃度最高，PAI與纖溶酶原激活物動態平衡被打破，纖溶酶原激活物與PAI-1的結合減少，進一步造成PAI-1高濃度，而高濃度的PAI-1可促使纖維蛋白溶解凝固，促使高凝狀態形成[13,14]。而高凝狀態可能損害靜脈的血液流動，進一步形成胎盤血栓、深靜脈血栓，引起胎兒生長受限，增加流產風險[15]。

Nair等[16]研究結果顯示，攜帶T等位基因的女性患不明原因重復性流產的危險性明顯增加。王曉慧等[17]研究指出，4G等位基因是引發習慣性流產的主導因素。本研究Logistic回歸分析顯示，MTHFR基因及PAI-1基因等位基因頻率與反復性流產的發生密切相關，C677T等位基因T，4G/5G等位基因4G是反復性流產發生的風險因子與上述研究結論一致，分析可能的原因為，MTHFR被作為代謝中的關鍵酶，攜帶T等位基因的女性，酶活性較高，更易通過相關機制[18]。等位基因4G與基因啟動密切相關，參與PAI-1基因的轉錄，可增加PAI-1基因表達，對提高PAI-1濃度有更為顯著的作用[19]。針對此情況，臨床可對攜帶T等位基因及4G等位基因的患者應用適當的抗凝藥物治療，并結合葉酸，以期改善胎盤血供，降低流產風險。而因本研究未能觀察，反復性流產患者HLA-C、KiSS-1、ACE基因多態性，結論尚有局限，未來還應納入更多基因多態性研究，以期為反復性流產的合理防治提供可參考的意見。

綜上所述，MTHFR、PAI-1基因多態性與反復性流產的發生密切相關，臨床可根據患者基因型及等位基因頻率分布，對患者實施針對性治療。