海南省海口地區生殖道支原體感染及耐藥分析

周 芬, 張余彬, 肖美芳

(海南省婦女兒童醫學中心 檢驗科, 海南 海口, 570206)

支原體是生殖道感染中常見的微生物病原體，能引起泌尿生殖道感染的支原體主要有解脲支原體(Uu)和人型支原體(Mh)。治療生殖道支原體感染中抗菌藥物使用不得當會導致藥物耐藥率升高，給后續治療帶來一定困難，因此臨床在治療生殖道感染過程中對于抗菌藥物的選擇和劑量方面應慎重。為了解海口地區支原體生殖道感染及抗菌藥物的耐藥情況，本研究將就診于海南省婦女兒童醫學中心2016年1月—2020年12月10 109份支原體培養及藥敏結果進行回顧性統計分析，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月—2020年12月就診于海南省婦女兒童醫學中心疑似生殖道支原體感染患者的10 109份標本進行支原體培養及藥敏試驗，其中女性患者標本8 981份，男性患者標本1 128份。

1.2 標本采集

1.2.1 男性患者標本采集: ① 尿道分泌物采集。取材前先用生理鹽水清洗尿道口，用無菌棉球擦拭，用極細的無菌纖維棉拭子插入尿道內2～4 cm取出分泌物，放入無菌管立即送檢。② 前列腺液采集。取材前先用生理鹽水清洗尿道口，前列腺按摩后用無菌棉拭子取分泌物，放入無菌管立即送檢。③ 精液采集。禁欲7 d, 取材前先用生理鹽水清洗尿道口，采用手淫法射精于無菌杯，立即送檢。

1.2.2 女性患者標本: ① 陰道分泌物采集。取材前先清潔外陰部，用窺陰器擴開陰道后，采用無菌棉拭子采取陰道口內4 cm內側壁或后穹窿處分泌物，放入無菌管立即送檢。② 女性宮頸分泌物采集。取材前先清潔外陰部，采用窺陰器擴開陰道后，用無菌棉拭子插入宮頸口1～2 cm, 輕輕旋轉1圈，蘸取有柱狀上皮細胞的分泌物，放入無菌管立即送檢。

1.3 試劑與方法

支原體鑒定藥敏試劑盒采購于珠海美華醫療科技有限公司。試劑由支原體培養基和檢測卡組成。抗菌藥物相關信息如下: 四環素(低濃度4 mg/L、高濃度8 mg/L), 紅霉素(低濃度1 mg/L、高濃度4 mg/L), 強力霉素(低濃度4 mg/L、高濃度8 mg/L), 氧氟沙星(低濃度1 mg/L、高濃度4 mg/L), 交沙霉素(低濃度2 mg/L、高濃度8 mg/L), 阿奇霉素(低濃度0.12 mg/L、高濃度4 mg/L), 克拉霉素(低濃度1 mg/L、高濃度4 mg/L), 環丙沙星(低濃度1 mg/L、高濃度2 mg/L), 左氧氟沙星(低濃度1 mg/L、高濃度4 mg/L), 羅紅霉素(低濃度1 mg/L、高濃度4 mg/L), 司巴沙星(低濃度1 mg/L、高濃度4 mg/L), 美滿霉素(低濃度4 mg/L、高濃度8 mg/L), 地紅霉素(低濃度1 mg/L、高濃度4 mg/L)。先在空白孔中加入100 μL培養液，再將棉拭子插入培養液中旋轉攪拌混勻，在瓶口擠干拭子后取出，然后各加100 μL混有標本的培養基至剩余微孔中，放入(35±1) ℃培養箱培養, 24、48 h后分別記錄結果。

當有支原體Uu和(或)Mh生長時，培養基中的尿素和精氨酸分解, pH值上升，酚紅指示劑變紅，培養基由黃色變成紅色。Uu≥104孔呈紅色，判定為檢出解脲脲原體, Uu感染; Mh≥104孔呈紅色，判定為檢出人型支原體, Mh感染; Uu≥104孔與Mh≥104孔均呈紅色，判定為Uu合并Mh感染。

1.4 統計學處理

采用SPSS 25.0統計軟件進行數據分析，計數資料以百分率表示，組間比采用卡方檢驗,P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 近年生殖道支原體培養結果

2016年1月—2020年12月共收集男性生殖道標本1 128份和女性生殖道標本8 981份，共計10 109份，其中生殖道支原體培養陽性3 491例，總陽性率為34.53%, 其中Uu的陽性率為32.04%, 均高于Mh和Uu合并Mh, 差異有統計學意義(P<0.001)。生殖道支原體培養結果表明，女性陽性率為37.25%, 高于男性的12.94%, 差異有統計學意義(P<0.001), 見表1。

表1 10 109份生殖道支原體培養結果

2.2 生殖道支原體感染在不同年齡段的分布情況

生殖道支原體感染患者可分為≤20歲、21～30歲、31～40歲、41～50歲、≥51歲5個不同年齡段人群，其中≤20歲年齡段人群陽性率最高(42.86%)，與其他年齡段比較，差異有統計學意義(P<0.05), 見表2。

表2 不同年齡段人群生殖道支原體培養陽性分布情況

2.3 生殖道支原體藥敏結果分析

生殖道支原體藥敏試驗結果表明, Uu耐藥率從低到高依次為交沙霉素、阿奇霉素、克拉霉素、美滿霉素、強力霉素、四環素、羅紅霉素、左氧氟沙星、司巴沙星、紅霉素、地紅霉素、氧氟沙星、環丙沙星。Mh耐藥率從低到高依次為交沙霉素、強力霉素、美滿霉素、四環素、司巴沙星、左氧氟沙星、環丙沙星、氧氟沙星、克拉霉素、阿奇霉素/地紅霉素/羅紅霉素(藥物Mh耐藥率相同)、紅霉素。Uu合并Mh耐藥率從低到高依次為交沙霉素、美滿霉素、強力霉素、四環素、左氧氟沙星、司巴沙星、氧氟沙星、阿奇霉素、地紅霉素/環丙沙星(Uu合并Mh耐藥率相同)、羅紅霉素/克拉霉素(Uu合并Mh耐藥率相同)、紅霉素，見表3。

表3 3 491例生殖道支原體培養陽性菌株藥敏試驗結果分析

3 討 論

支原體是一類缺乏細胞壁、形態上呈高度多形性，能通過除菌濾器，能在無生命培養基中生長繁殖的最小原核細胞型微生物。生殖道支原體感染可引起多種疾病，如輸卵管慢性炎癥、子宮內膜炎癥、妊娠的不良結局、胚胎停育、反復自然流產、不孕不育和部分新生兒疾病等[1-6]。

本研究發現，生殖道支原體感染以單純Uu感染為主，其次為Uu合并Mh感染，單純Mh感染較少見。本研究進一步對泌尿生殖道支原體感染的性別和年齡進行了分析，結果顯示，陽性患者年齡段主要集中于21～40歲的女性感染者，原因可能與女性生理解剖結構、內分泌激素調節有關[7]。同時對不同年齡段人群支原體感染情況進行分析發現, ≤20歲年齡段人群感染率最高，這可能與該年齡段人群衛生意識和健康性生活意識較差有關，應加強該年齡段人群相關知識教育。

本研究藥敏試驗結果顯示, Uu對環丙沙星等喹諾酮類藥物耐藥率較高，這可能與Uu編碼II型拓撲異構酶的基因喹諾酮耐藥決定區(QRDR)突變有關[8]。Uu對交沙霉素、阿奇霉素、克拉霉素的耐藥率普遍較低，但相關報道對比不同性別克拉霉素治療生殖道支原體感染的研究顯示，男性患者的治療效果更好，但不良反應也更多[9], 臨床在選擇克拉霉素治療生殖道支原體感染時應引起重視，在保障療效的同時也要重視不良反應的發生。Mh對14、15元環大環內酯類抗菌藥物耐藥率較高，這可能與其23S RNA V區G2057A變異相關[10]。本研究Mh感染患者的藥敏試驗中未發現交沙霉素耐藥菌株，與臨床上使用較少相關，待后續試驗進一步明確。Mh長期接觸低劑量喹諾酮類藥物會出現耐藥情況，臨床在選擇喹諾酮類藥物治療Mh感染的患者時應注意療程和劑量,gyrA、parE基因中的點突變可能是導致這種耐藥機制的一部分原因[11]。Uu合并Mh與Mh單獨感染相同，均對喹諾酮類和14元環、15元環的大環內酯類藥物具有較高的耐藥率，而對16元環大環內酯類藥物較敏感。本研究顯示，生殖道支原體中單獨Mh感染、Uu合并Mh感染患者藥敏試驗結果表明，多種大環內酯類抗菌藥耐藥率達90%以上，臨床應引起重視。Uu合并Mh感染時耐藥率高于單純Uu、單純Mh的感染，與國外報道[12]的支原體混合感染中更容易出現藥物交叉耐藥相符。交沙霉素、強力霉素、美滿霉素近年來多地區報道[13-15]的耐藥率均較低，可作為生殖道支原體感染的推薦用藥。

綜上所述，本研究中的生殖道支原體感染以Uu為主，感染者主要為21～40歲女性。本研究藥敏試驗分析結果表明，交沙霉素、強力霉素、美滿霉素可作為本地區生殖道支原體感染的推薦用藥。不同類型的支原體感染表現出的耐藥性不同，因此臨床醫生在選擇抗生素治療生殖道支原體感染時應重視藥物的選擇，避免濫用抗生素造成菌株多重耐藥現象。