電子交叉配血技術在紅細胞不規則抗體陽性患者交叉配血中的應用研究*

劉學軍，劉金蓮，馬婷婷，黃寶甲，莫秋紅，李麗蘭

南寧輸血醫學研究所/南寧中心血站，廣西南寧 530007

電子交叉配血是指在血型鑒定和抗體篩查的基礎上，直接用計算機系統為患者選擇血型相容的血液[1]。電子交叉配血技術最早應用于瑞典的一家醫院，他們從1983年開始采用該技術為ABO/RhD血型抗原確認且紅細胞不規則抗體陰性的患者實施ABO/RhD相容的交叉配血，所發放血液超過25萬U[2]。目前該技術在國外的一些較發達的地區已廣泛應用[3]。在我國，香港CHAN等[4]于1996年報道了ABO/RhD相容的電子交叉配血在外科輸血的實施和應用，使香港成為亞洲最早實施電子交叉配血的地區。2008年，廣東省東莞市中心血站何子毅等[5]率先在我國大陸開展電子交叉配血的研究和臨床應用工作。目前，紅細胞相關電子交叉配血的報道主要集中在針對紅細胞不規則抗體陰性的患者實施ABO/RhD相容的電子交叉配血的應用中，而針對紅細胞不規則抗體陽性患者實施的電子交叉配血的相關報道還較少見。本研究主要針對紅細胞不規則抗體陽性且特異性明確的患者，在本實驗室已建立的紅細胞血型抗原/抗原基因型已知獻血者數據庫的基礎上，開展電子交叉配血的應用研究。現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2020年1月至2021年4月南寧市各醫院送檢的不規則抗體篩查陽性和(或)交叉配血不相合的137例患者的137份血液標本。137例患者中男68例，女69例，年齡2 d至99歲(新生兒溶血病案例4例，中位年齡為5.5 d，其余案例133例，中位年齡為51.5 歲) ，分別采集不抗凝靜脈血和乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝靜脈血各5 mL，用于血清學檢測。

1.2儀器與試劑 Eppendorf離心機(德國Eppendorf)；久保田KA-2200離心機(日本KUBOTA)；ID-Incubator 37SI(美國BIO-RAD)；ID-Centrifuge 12SⅡ離心機(美國BIO-RAD)；恒溫水槽DK-8B(上海精宏實驗設備有限公司)；抗球蛋白檢測卡(瑞士DiaMed，批號：50531.60.17)；抗-A、抗-B(上海血液生物，批號：20200202)；抗-D單克隆試劑(上海血液生物，批號：20201802)；抗球蛋白試劑(上海血液生物，批號：20195002)；聚凝胺介質試劑(珠海貝索,批號：A201203)；抗體鑒定譜細胞(上海血液生物，批號：20201113)；抗體篩查細胞(上海血液生物,批號：20210130)；抗體篩查細胞(江蘇力博，批號：202008013)；Makropanel16(荷蘭Sanquin，批號：8000452938)；各種抗血清試劑等。

1.3血型和不規則抗體鑒定方法 按照《全國臨床檢驗操作規程》中血型血清學檢查方法操作，應用鹽水法進行ABO、RhD血型和其他血型系統紅細胞抗原檢測，應用鹽水法、聚凝胺法、抗球蛋白法和(或)微柱凝膠卡法、酶法、吸收放散法等進行紅細胞不規則抗體的檢測和鑒定。

1.4電子交叉配血 針對不規則抗體檢測陽性且特異性明確的患者，應用已建立的免疫血液學實驗室臨床檢測綜合管理系統實施電子交叉配血。電子交叉配血基本條件：(1)患者ABO和RhD血型確定；(2)患者標本不規則抗體陽性且特異性明確；(3)實驗室建立的紅細胞血型抗原/抗原基因已知型獻血者數據庫包含有患者不規則抗體所對應抗原的血型系統及該抗原為陰性的供者數據。電子交叉配血的原則：為患者找尋其體內不規則抗體所對應抗原陰性，且ABO和RhD血型相容的血液產品或獻血者。

1.5血清學實驗驗證 應用鹽水法、聚凝胺法和抗球蛋白法對電子交叉配血相容血液進行血型血清學交叉配血。

2 結 果

2.1不規則抗體分布情況 納入本研究的137份標本中，紅細胞不規則抗體特異性分布情況見表1。主要涉及Rh、MNS、Lewis、Kidd和Duffy等5個血型系統。

表1 137份標本紅細胞不規則抗體特異性分布情況

2.2電子交叉配血和血型血清學交叉配血驗證結果 應用電子交叉配血成功為本研究的137例紅細胞不規則抗體陽性的患者找到相合的供者或血液制品，血型血清學交叉配血驗證結果與電子交叉配血結果一致，均為相容137例，不相容0例。

3 討 論

對于紅細胞不規則抗體陽性的患者，當需要輸血治療時，為其找到與之體內抗體所對應的抗原為陰性的供者，是為患者提供相配合的血液和實施有效輸血治療的關鍵。電子交叉配血在紅細胞不規則抗體陽性且特異性明確患者中的成功實施，其先決條件是實驗室已建立適應當地臨床輸血的紅細胞血型抗原/抗原基因型已知的獻血者數據庫，且所建立的數據庫包含與患者紅細胞不規則抗體所對應的紅細胞抗原陰性的供者。在前期工作中，本課題組針對劉金蓮等[6]報道的南寧地區疑難輸血患者紅細胞不規則抗體分布情況初步建立了南寧紅細胞血型抗原/抗原基因型已知的獻血者數據庫，目前該數據庫主要涵蓋Rh、MNS、Lewis、Kidd和Duffy 等5個血型系統，以固定獻血者為主要對象，在血站常規檢測ABO和RhD血型的基礎上，采用血清學方法和(或)分子生物學檢測方法對所涵蓋的5個血型系統進行血型檢測。目前本血站已建立的獻血者數據庫中，包含Rh血型系統DCcEe已知型供者23 754人，其中RhD陰性供者1 781人，ccdee供者934人，CCDee供者2 444人，ccDEE供者576人；包含MNS系統供者482人，其中NN供者210人，MM供者62人，ss供者19人，Mur陰性供者191人；包含Lewis系統供者335人，其中Lea-b+供者179人，Lea+b-供者90人，Lea-b-供者66人；包含Kidd系統供者304人，其中Jka-b+供者215人，Jka+b-供者89人；包含Duffy系統供者80人，均為Fya+b-供者。在本研究的137份紅細胞不規則抗體特異性明確的標本中，Rh系統抗體占比最高，為56.93%(78/137)，其次為MNS系統抗體，占18.25%(25/137)。以目前本實驗室已建立的南寧市紅細胞血型抗原/抗原基因型已知的獻血者數據庫為基礎，通過電子交叉配血，均成功為這些患者找到其抗體所對應抗原陰性的相配合的血液，血清學交叉配血驗證結果與電子交叉配血結果完全一致，血液輸注后，對患者進行電話回訪，無患者發生溶血性輸血反應，顯示了其安全性和可靠性。

應用電子交叉配血為紅細胞不規則抗體陽性患者成功實施交叉配血的另一必要條件是患者的抗體特異性鑒定明確且無臨床有意義抗體的漏檢。由于血型抗原具有人群多態性，不同地區人群紅細胞血型系統不規則抗體的分布亦有所差異。例如，Dia抗原表達幾乎限制在蒙古族人群中，土著美洲人、南美印第安人的表達頻率約為36%，日本人的表達頻率約為12%，中國人的表達頻率約為5%，高加索人和黑種人表達頻率約為0.01%[7]。因此，實驗室應根據當地抗原的人群多態性特征和輸血患者抗體分布情況制訂相應檢測策略，以確保抗體鑒定準確，避免臨床有意義抗體的漏檢情況發生。隨著檢測技術和實驗室管理水平的不斷提高，抗體漏檢率越來越低。英國NEQAS的室間質量評價數據中，抗體漏檢率從1984-1985年的6.65%下降到1996-1997年的0.07%[8]。據GARRATTY等[9]估算，具有潛在臨床意義抗體的漏檢率約為1∶17 000。英國BCSH 《輸血實驗室血液相容性檢測程序編制指南》根據具有臨床意義抗體的相關數據，對抗體篩檢細胞所應涵蓋的抗原及抗原組合標準作出詳細規定，如遵照該指南操作，抗體篩檢的敏感性高于交叉配血試驗[10]。

電子交叉配血能為血型抗原確認和(或)抗體特異性明確的患者，特別是針對稀有血型抗原或具有稀有血型抗體的患者能夠快速找到相匹配的供者，使患者能夠得到及時有效的治療。相較于傳統的血清學交叉配血，電子交叉配血已被證實具有很多優點[11]，其最大的優勢是檢測時間比血型血清學交叉配血縮短[12-13]。電子交叉配血或將是輸血事業未來發展的趨勢，電子交叉配血的實施和應用有望為輸血的安全有效提供保障。