宮頸癌患者病理特征與循環(huán)腫瘤細(xì)胞的關(guān)系

文/羅健

宮頸癌是生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，接受早期手術(shù)或放療等局部治療后可改善患者預(yù)后情況，然而仍有部分患者術(shù)后出現(xiàn)腫瘤的復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致患者的預(yù)后死亡。此前臨床關(guān)于宮頸癌的預(yù)后研究主要集中在病因?qū)W、病理參數(shù)、病理資料等。隨著分子生物技術(shù)的不斷進(jìn)展，越來(lái)越多的研究側(cè)重于探索相關(guān)分子生物學(xué)指標(biāo)。宮頸癌患者的復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移與腫瘤細(xì)胞淋巴或血行轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTC）與癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，多數(shù)CTC 釋放入血液循環(huán)后可被機(jī)體的免疫監(jiān)視系統(tǒng)吞噬、殺滅，少數(shù)轉(zhuǎn)移能力較強(qiáng)，可發(fā)生免疫逃逸，定植于遠(yuǎn)處器官，導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)或進(jìn)展。故監(jiān)測(cè)CTC 細(xì)胞對(duì)評(píng)估腫瘤的病情意義重大。CTC 具有檢測(cè)方便、穩(wěn)定性高的特點(diǎn)，與傳統(tǒng)的穿刺活檢相比，創(chuàng)傷更輕。本文以CTC 為切入點(diǎn)，分析其與宮頸癌患者病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以2019 年2 月至2021 年2 月收治的100 例宮頸癌患者為對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）確診為宮頸癌；（2）年齡18 周歲以上；（3）TNM 分期低于III 期；（4）入組前接受放化療治療者；（5）患者對(duì)本研究知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者；（2）參與其他研究者；（3）存在手術(shù)禁忌證；（4）合并其他部位原發(fā)腫瘤者；（5）合并嚴(yán)重精神障礙性疾病者；（6）患有認(rèn)知功能障礙或語(yǔ)言溝通能力障礙者。100 例患者中年齡28~60 歲，平均（38±6）歲，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移55 例，脈管瘤栓71 例，神經(jīng)侵犯17 例，TNM 分期：0~I 期32 例，II~III 期68 例。

1.2 方法

采集空腹靜脈血5 mL，配置紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞，將剩余細(xì)胞懸于PBS 液（含4%）5 min。轉(zhuǎn)移細(xì)胞懸液至過(guò)濾管，真空泵抽濾。用三色RNA 原位雜交技術(shù)檢測(cè)，條件：42℃下雜交2 h，未結(jié)合的探針通過(guò)1000 μL 洗滌液緩慢洗滌3 次。后加入100 μL 預(yù)擴(kuò)增溶液，42℃下20 min。待膜冷卻后，用1000μL 的洗滌液洗滌3 次，再用100 μL 擴(kuò)增液孵育，加入Alexa Fluor 594/488/647 三種探針，后在42℃孵育20 min，洗滌，利用DAPI 染色剩余細(xì)胞5 min，利用熒光顯微鏡觀察，進(jìn)行CTC 計(jì)數(shù)。血液中標(biāo)本CTC 數(shù)≥2 個(gè)記為CTC 陽(yáng)性。檢測(cè)糖類抗原125（CA125）、糖類抗原153（CA153）、癌胚抗原（CEA）（酶聯(lián)免疫法）。制作石蠟標(biāo)本，按照常規(guī)免疫組織化學(xué)流程，用SP 法檢測(cè)，加入一抗，以磷酸鹽緩沖液（PBS）為陰性對(duì)照，加二抗過(guò)夜。二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色，顯微鏡下觀察，Ki-67 陽(yáng)性指數(shù)≤14%為低復(fù)發(fā)，≥15%為高復(fù)發(fā)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 21.0 軟件。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)（%）表示，采用x檢驗(yàn)。計(jì)量資料以x ±s 表示，采用t 檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CTC 檢測(cè)結(jié)果

100 例宮頸癌患者中，CTC 陽(yáng)性率為81.00%（81/100），陰性率為19.00%（19/100）。

2.2 CTC 表達(dá)情況與患者臨床特征的關(guān)系

CTC 陽(yáng)性組與陰性組在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管瘤栓、TNM 分期、T 分期、N 分期方面比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 CTC 表達(dá)情況與患者臨床特征關(guān)系n（%）

2.3 2 組患者腫瘤標(biāo)志物水平

CTC 陽(yáng)性組CEA、CA153 水平高于CTC 陰性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組腫瘤標(biāo)志物水平比較（x±s）

2.4 CTC 與CEA、CA153 及Ki-67 蛋白的相關(guān)性

Spearman 相關(guān)性分析顯示，CTC 與CEA、CA153 呈正相關(guān)（rs=0.517、0.492，P＜0.001）。關(guān)聯(lián)性卡方分析顯示，CTC 與Ki-67 蛋白無(wú)相關(guān)性（x=0.510，P=0.471）。見表3。

表3 CTC 與Ki -67 蛋白表達(dá)相關(guān)性

3 討論

腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者復(fù)發(fā)、預(yù)后死亡的主要元兇，CTC 在癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移過(guò)程發(fā)揮重要作用。國(guó)外進(jìn)行的一項(xiàng)大樣本研究發(fā)現(xiàn)，在1679 例早期乳腺癌患者中約23%的患者CTC 陽(yáng)性，CTC 陽(yáng)性患者總生存率為75%，低于陰性患者。本文探究CTC 與宮頸癌患者的病理特征關(guān)系，結(jié)果顯示CTC 陽(yáng)性宮頸癌患者T期、N期及II~III 期占比高于CTC 陰性，提示CTC 與宮頸癌患者的病理分期存在聯(lián)系，隨病理分期的增加其陽(yáng)性表達(dá)越高。同時(shí)筆者發(fā)現(xiàn)CTC 陽(yáng)性患者合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管瘤栓的人數(shù)高于陰性組，提示CTC 的表達(dá)情況與宮頸癌患者預(yù)后關(guān)系密切。CTC在血液中單獨(dú)存在時(shí)，隨血液循環(huán)可被免疫系統(tǒng)吞噬，合并脈管瘤栓后可對(duì)CTC 形成保護(hù)，促進(jìn)CTC 向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。本文結(jié)果顯示CTC 與年齡、分化程度、神經(jīng)侵犯等無(wú)明顯相關(guān)，其原因可能為CTC 反映腫瘤的轉(zhuǎn)移性質(zhì)，而上述特征與腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移無(wú)緊密關(guān)系。

CEA、CA125、CA153 均為常規(guī)的腫瘤標(biāo)志物，文獻(xiàn)指出CEA、CA153 表達(dá)情況與腫瘤的病理分析關(guān)系密切，腫瘤分期增加，其表達(dá)水平增加。鄭星等課題組發(fā)現(xiàn)CEA、CA153 與乳腺癌患者骨轉(zhuǎn)移存在聯(lián)系。本文結(jié)果顯示CTC 與CEA、CA153 呈正相關(guān)，證實(shí)CTC 與宮頸癌患者的轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。Ki-67 是宮頸癌常見的分析指標(biāo)，其為增殖細(xì)胞核抗原，細(xì)胞分析學(xué)研究發(fā)現(xiàn)Ki-67 mRNA 在細(xì)胞周期中周期性變化，在S 期達(dá)峰值，可對(duì)細(xì)胞DNA 的復(fù)制造成阻礙，監(jiān)測(cè)其表達(dá)情況可評(píng)價(jià)腫瘤細(xì)胞增殖狀態(tài)。Ki-67 表達(dá)升高提示腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移活性增加。此外有研究指出，Ki-67 可用于預(yù)測(cè)輔助化療患者的預(yù)后情況，術(shù)后Ki-67表達(dá)升高患者接受化療后獲益較多。目前臨床關(guān)于Ki-67 蛋白表達(dá)情況與CTC 之間的關(guān)系尚無(wú)明確定論，部分學(xué)者認(rèn)為Ki-67 高表達(dá)與腫瘤類型存在聯(lián)系，然而主流觀點(diǎn)認(rèn)為CTC 與Ki-67 蛋白的表達(dá)情況無(wú)明顯相關(guān)。本文結(jié)果顯示CTC 與Ki-67 蛋白表達(dá)無(wú)明顯相關(guān)，與上述描述相符。

綜上所述，CTC 與宮頸癌患者病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、CEA、CA153 等存在聯(lián)系，其陽(yáng)性表達(dá)升高，提示腫瘤病情進(jìn)展或轉(zhuǎn)移。鑒于本文樣本量較少并且為單中心研究，CTC 與宮頸癌患者臨床病理特征的關(guān)系尚需進(jìn)一步驗(yàn)證。