肺癌病理大切片技術(shù)的應(yīng)用與價(jià)值研究

李成之

約有80%的肺癌為非小細(xì)胞肺癌，大多數(shù)肺癌患者在確診時(shí)已屬于晚期，已經(jīng)有了臨床或潛在的播散，一般生存期僅為8～10個(gè)月，5年生存率僅為10%～15%[1]。非小細(xì)胞肺癌早期臨床癥狀主要為咳嗽，其治療時(shí)間被延誤，缺乏典型性，增加了其臨床診斷的難度。因此，對(duì)于非小細(xì)胞肺癌的診治和早期病理診斷具有重要的臨床價(jià)值。而研究發(fā)現(xiàn)，在單一腫瘤中不同的腫瘤組織表現(xiàn)出差異性為異質(zhì)性，腫瘤在進(jìn)展過程中，多應(yīng)用病理組織大切片技術(shù)，對(duì)臨床治療工作的開展具有重要意義[2]。本研究選擇2019年5月—2020年2月在醫(yī)院接受診治的非小細(xì)胞肺癌患者的組織標(biāo)本，進(jìn)行病理組織大切片技術(shù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

臨床選擇2019年5月—2020年2月在醫(yī)院接受診治的非小細(xì)胞肺癌患者80例的組織標(biāo)本為觀察組，納入標(biāo)準(zhǔn)：符合中國抗癌協(xié)會(huì)肺癌專業(yè)委員會(huì)、中華醫(yī)學(xué)會(huì)腫瘤學(xué)分會(huì)肺癌學(xué)組的非小細(xì)胞肺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]；經(jīng)臨床實(shí)驗(yàn)室檢查、影像學(xué)資料、手術(shù)資料、病理檢查、臨床特征明確診斷。排除標(biāo)準(zhǔn)：其他惡性腫瘤者、免疫系統(tǒng)病變、精神疾患、妊娠期、哺乳期女性、肝腎功能異常、血液系統(tǒng)病變、急性感染性病變。年齡32～79歲，平均年齡（50.3±3.3）歲，其中男性42例，女性38例，全部研究對(duì)象均未接受過放療或化療治療。手術(shù)方式：肺葉切除術(shù)41例，全肺切除術(shù)39例。

1.2 方法

進(jìn)行手術(shù)治療時(shí)，在肺葉離體后，沿著氣管樹的方向，最大直徑切除腫瘤組織，后切面標(biāo)本厚度為3 mm，常規(guī)病理檢查其他標(biāo)本，在切面標(biāo)本取得后，進(jìn)行脫水、石蠟包埋、切片、蘇木素、染色等處理，10%福爾馬林予以12～24 h固定，80%酒精浸潤12～24 h，95%乙醇Ⅰ浸潤6～12 h；95%乙醇Ⅱ浸潤6～12 h，無水乙醇Ⅰ浸潤3～6 h；無水乙醇Ⅱ浸潤3～6 h；無水乙醇與二甲苯溶液按1∶1比例浸潤24 h；丁香油浸潤4～6 h；二甲苯1浸潤1～2 h，二甲苯2浸潤1～2 h；石蠟58℃浸潤2次，4～6 h/次；石蠟包埋，應(yīng)用Carl Zeiss平推切片機(jī)切片，6～10 μm切片厚度，置于載玻片內(nèi)（90 mm×120 mm），65℃烤箱內(nèi)進(jìn)行2～3 h烤片；HE染色步驟：二甲苯1浸泡半小時(shí)，二甲苯2浸泡半小時(shí)，95%酒精1浸泡15 min，95%酒精2浸泡5 min，80%酒精浸泡5 min，流水沖洗10 min，蘇木素染色6～10 min；1%鹽酸酒精浸泡半分鐘，流水沖洗半小時(shí)，0.25%伊紅染3 min；流水沖洗半分鐘，95%酒精1 10 s，95%酒精2 10 s，無水酒精半分鐘，二甲苯1 處理2 min，二甲苯2處理2 min，中性樹膠封片，蓋玻片封片（60 mm×80 mm）。二步法神經(jīng)內(nèi)分泌標(biāo)志物嗜鉻粒素A（chromogranin A，CgA）和神經(jīng)內(nèi)分泌標(biāo)志物突觸素（synaptophysin，Syn）免疫組織化學(xué)染色分析腫瘤有無神經(jīng)內(nèi)分泌性質(zhì)。

1.3 觀察指標(biāo)

分析非小細(xì)胞肺癌的病理類型腺鱗癌、鱗癌、腺癌標(biāo)本中NSE陽性、CgA陽性、Syn陽性比例；與病理檢查結(jié)果比較，分析非小細(xì)胞肺癌的病理大切片診斷結(jié)果神經(jīng)元特異性烯醇化酶（neuron specific enolase，NSE）、突觸素（Syn）、嗜鉻素 A（CgA）的診斷符合率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

全部數(shù)據(jù)傳輸至SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理分析，計(jì)量資料表示為（），采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料表示為（n，%），采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 非小細(xì)胞肺癌的病理類型

非小細(xì)胞肺癌患者80例中，腺鱗癌14例（17.5%），鱗癌17例（21.3%），腺癌49例（61.3%），其中多種組織類型者37例（46.3%），單一組織類型表現(xiàn)者43例（53.8%）；其中腺癌標(biāo)本的NSE陽性、CgA陽性、Syn陽性指標(biāo)顯著高于腺鱗癌、鱗癌，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 非小細(xì)胞肺癌的病理類型特征分析 [例（%）]

2.2 分析非小細(xì)胞肺癌病理大切片診斷結(jié)果

非小細(xì)胞肺癌病理大切片神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）、突觸素（Syn）、嗜鉻素A（CgA）診斷符合率與病理結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2 分析非小細(xì)胞肺癌病理大切片診斷結(jié)果 [例（%）]

3 討論

本研究觀察非小細(xì)胞肺癌病理大切片技術(shù)的臨床應(yīng)用與價(jià)值分析，結(jié)果顯示：非小細(xì)胞肺癌患者80例中，腺鱗癌14例（17.5%），鱗癌17例（21.3%），腺癌49例（61.3%），其中多種組織類型者37例（46.3%），單一組織類型表現(xiàn)者43例（53.8%）；其中腺癌標(biāo)本的NSE陽性、CgA陽性、Syn陽性指標(biāo)顯著高于腺鱗癌、鱗癌，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；觀察組血清神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）、突觸素（Syn）等指標(biāo)變化顯著高于對(duì)照組，而嗜鉻素A（CgA）指標(biāo)顯著低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與劉奕[4]的研究結(jié)果大體一致，非小細(xì)胞肺癌是全球發(fā)病率、死亡率最高的惡性腫瘤之一，隨著環(huán)境的惡化，非小細(xì)胞肺癌的發(fā)病率持續(xù)升高，非小細(xì)胞肺癌需要有明確、科學(xué)、準(zhǔn)確的診斷結(jié)果，選擇適宜患者的手術(shù)、化療、放療方案[5-6]。因患者的體質(zhì)、病變嚴(yán)重程度均具有一定的差異，采取治療方式也存在一定的差異[7-8]。對(duì)于非小細(xì)胞肺癌患者進(jìn)行病理組織學(xué)檢查時(shí)，需確認(rèn)檢查結(jié)果的準(zhǔn)確性和全面性[9-10]。在本研究中，病理組織大切片技術(shù)應(yīng)用于非小細(xì)胞肺癌患者進(jìn)行病理診斷中，可準(zhǔn)確清晰顯示患者的腫瘤細(xì)胞的狀態(tài)，提高其診斷符合率。但在實(shí)際的操作過程中，取材方案、樣本大小等多方面均可對(duì)診斷結(jié)果產(chǎn)生一定的影響。血清神經(jīng)元特異性烯醇化酶是神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞核神經(jīng)元細(xì)胞所特有的一種酸性蛋白酶[11-12]，神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的特異性標(biāo)志，可用于評(píng)估復(fù)發(fā)、臨床效果、監(jiān)測病情、鑒別診斷等。在非小細(xì)胞肺癌的病情緩解期，約有80%～96%患者的神經(jīng)元特異性烯醇化酶濃度正常，而當(dāng)病情復(fù)發(fā)時(shí)，其濃度則顯著增高；部分病例在1～4月潛伏期中期神經(jīng)元烯醇化酶指標(biāo)升高，與生存期密切相關(guān)[13-14]。研究[15]表明，NSE可用于評(píng)估小細(xì)胞肺癌患者的相關(guān)病因、治療有效性和預(yù)后情況。嗜鉻粒蛋白A屬于48 kD的親水性、酸性分泌蛋白，位于神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的嗜鉻性顆粒內(nèi)，在鱗癌、大細(xì)胞癌、肺腺癌等非小細(xì)胞肺癌中也會(huì)出現(xiàn)神經(jīng)內(nèi)分泌分化，CGA與III期非小細(xì)胞肺癌的神經(jīng)內(nèi)分泌密切相關(guān)，可作為評(píng)估神經(jīng)內(nèi)分泌活化指標(biāo)[16]。嗜鉻粒蛋白A屬于前體肽，可在不同的組織中分解成不同的片段，對(duì)機(jī)體的內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定起到維持作用，如對(duì)胃腸道的動(dòng)力維持和緩解疼痛、參與組織修復(fù)、對(duì)機(jī)體的炎性因子的反應(yīng)抑制，對(duì)兒茶酚胺的釋放起到抑制作用，同時(shí)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)外的鈣離子的平衡，對(duì)于機(jī)體能量代謝進(jìn)行調(diào)節(jié)[17]；同時(shí)可對(duì)腫瘤細(xì)胞的凋亡起到促進(jìn)作用，對(duì)成纖維細(xì)胞的聚集、黏附起到抑制作用，對(duì)于腫瘤細(xì)胞的生長及多瘤生長模式起到抑制作用，屬于對(duì)外來微生物（包括酵母菌、真菌、細(xì)菌）的侵襲起到第一道防御作用。同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)[18]，嗜鉻粒蛋白A的蛋白水解作用具有組織特異性，該蛋白在甲狀腺組織、腸道內(nèi)分泌組織、中樞和神經(jīng)組織、胰腺、心肌等組織中均有分泌。患者的生存期與血漿中CGA高表達(dá)水平呈正相關(guān)。Syn（突觸素）也稱為主要突觸囊泡蛋白p38，是一種在人類中由SYP基因編碼的蛋白質(zhì)。它與基本的突觸囊泡蛋白相互作用，但當(dāng)在動(dòng)物身上實(shí)驗(yàn)性地滅活時(shí)，它們?nèi)哉１磉_(dá)和發(fā)揮功能。Syn與人體的腎上腺髓質(zhì)、頸動(dòng)脈、皮膚、腦垂體、甲狀腺、肺、胰腺和胃腸道黏膜的神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)[19]。這種抗體能識(shí)別正常的神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞和神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤。Syn不與其他神經(jīng)鑒別標(biāo)記一起表達(dá)，可被用作腫瘤診斷的鑒別標(biāo)記[20]。本研究發(fā)現(xiàn)，非小細(xì)胞肺癌中肺腺癌標(biāo)本的NSE陽性、CgA陽性、Syn陽性指標(biāo)顯著增高，且與病理檢查結(jié)果比較，病理組織大切片檢查準(zhǔn)確性均較高，說明非小細(xì)胞肺癌進(jìn)行病理組織大切片檢查可為非小細(xì)胞肺癌的檢查確診和后續(xù)治療方案的選擇提供科學(xué)依據(jù)[21]。綜上所述，對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者進(jìn)行病理組織大切片檢查，可對(duì)腫瘤組織的狀態(tài)進(jìn)行全面監(jiān)測，分析腫瘤細(xì)胞的異質(zhì)性有助于為后續(xù)治療及病理診斷提供準(zhǔn)確的依據(jù)。