妊娠期糖尿病患者血清let-7、Irisin、Kisspeptin、SF水平變化及其相關性研究

褚 璐,任建華,于曉忠,李秋云

(開灤總醫院 1.趙各莊醫院 內分泌科;2.內分泌科,河北 唐山 063000)

妊娠期糖尿病(GDM)是指在懷孕期間首次發生或首次發現的任何程度的血糖異常，包括懷孕早期未確診為2型糖尿病的案例以及后期真正發展成GDM的案例[1-2]。GDM是全世界母親和嬰兒死亡和患有其他疾病的主要原因之一[3-5]，研究發現患有GDM的母親有發生妊娠期高血壓、子癇前期和剖腹產的風險[6]，GDM婦女所生的嬰兒可能會有巨嬰兒的危險，且會出現新生兒低血糖和發展成2型糖尿病的情況[7-9]。因此，盡早發現GDM并及時對孕婦進行診斷、治療，對妊娠母親和嬰兒具有重要的意義。近年來，隨著細胞生物學和分子免疫學的發展，有關因子在GDM發生、發展中起著重要作用[10-11]。Irisin是近年來新發現的一種肌肉因子，能夠改善葡萄糖耐量；Kisspeptin在妊娠過程中具有調節滋養層細胞浸潤作用；血清鐵蛋白(SF)是一種炎性反應蛋白，可能參與了胰島素抵抗的過程，與GDM發生、發展具有相關性；動物實驗表明let-7在正常組小鼠中表達水平低于高脂小鼠，對GDM早期預測有臨床意義[12]。本研究通過檢測GDM患者血清let-7、Irisin、Kisspeptin、SF水平，并分析其相關性，以期為GDM患者的干預提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料納入標準：(1)在妊娠12-18周期間就診于產科門診初診，并于妊娠 12-18周于內分泌實驗室行50 g葡萄糖耐量試驗(OGTT)；(2)妊娠 12-18周。排除標準：妊娠前糖耐量異常、嚴重脂代謝紊亂、妊娠期高血壓、多囊卵巢綜合征、甲狀腺疾病等內分泌疾病及妊娠期急慢性心臟、肝腎等臟器疾病。根據美國糖尿病協會制定的GDM標準[13]：各受試者進行50 g OGTT實驗，診斷標準為：空腹血糖(FPG)≥5.3 mmol/L、1 h餐后血糖(1 h PG)≥10.0 mmol/L、2 h餐后血糖(2 hPG)≥8.6 mmol/L，其中任意一項達標即可診斷為 GDM。根據以上標準選取2016年12月至2017年10月初次確診為妊娠糖尿病的100例孕婦為研究對象(GDM組)，孕婦年齡29.9±4.3歲，平均孕周15.2±1.2周。對照組(CG組)為同期入院體檢的OGTT實驗血糖正常的60例孕婦，孕婦平均年齡28.9±3.7歲，平均孕周16.1±0.9周。本研究經醫院醫學倫理委員會審核批準，所有研究對象對本研究知情同意并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1測量方法 采用醫院標準身高、體重測量儀對研究對象身高、體重進行測量，計算 BMI[BMI=體重(kg)/身高2(m)]。

1.2.2觀察指標 比較兩組孕婦一般情況，包括年齡、孕周、BMI、FPG、1hPG、2hPG、HbA1c、空腹胰島素；比較兩組孕婦血清let-7、Irisin、Kisspeptin、SF水平，分析各因子與GDM的相關性。

1.2.3血清生化指標檢測 受試者均在禁食12 h后，于OGTT試驗當日抽取孕婦靜脈血5 mL，于4℃條件下，3 000 rpm/min離心15 min后取上層血清保存于-80℃用于后續檢測。采用全自動生化分析儀對孕婦FPG、1hPG、2hPG、HbA1c、空腹胰島素(FINS)等進行檢測。

1.2.4血清各因子檢測 采用酶聯免疫吸附試劑盒(上海通蔚生物科技有限公司) 檢測血清中Kisspeptin，具體操作按試劑盒說明書進行。ELISA試劑盒檢測血清Irisin，試劑盒為人鳶尾素(Irisin)ELISA試劑盒(上海酶聯生物科技有限公司)，實驗步驟按說明書操作。采用實時熒光定量反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-qPCR)技術分析GDM組和CG組受試者let-7的mRNA表達水平，RT-qPCR試劑盒購自賽默飛世爾科技(中國)有限公司，提取總RNA后在260 nm與280 nm處測定其光密度值，具體操作按試劑盒說明書進行。血清SF采用電化學發光法檢測。

2 結果

2.1 一般資料比較GDM組和CG組的年齡、孕周比較，差異無統計學意義(P>0.05)；孕前、孕期BMI比較，差異有統計學意義(P<0.05)；GDM組孕期體質量增加值明顯高于CG組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 GDM組和CG組一般資料比較

2.2 生化指標比較GDM組FPG、1hPG、2hPG、HbA1c、FINS均高于CG組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 GDM組和CG組生化指標比較

2.3 血清中Irisin、Kisspeptin、SF和let-7因子水平比較Kisspeptin、SF和let-7在GDM組孕婦血清表達水平均高于CG組，差異有統計學意義(P<0.05)；而Irisin在GDM組孕婦血清表達水平低于CG組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 兩組孕婦4種因子表達水平比較

2.4 GDM影響因素的Logistic回歸分析

采用Logistic回歸分析以判斷Kisspeptin、Irisin、SF和let-7是否為GDM發生的危險因素，以是否發生GDM為因變量(以患病為1，未患病為0)，將影響GDM 發生的相關因素進行Logistic 回歸分析，納入變量標準α=0.05，剔除變量標準β=0.05，結果顯示Irisin為GDM發生的保護因素，let-7、SF、Kisspeptin為GDM發生的危險因素，具體見表4。

表4 Kisspeptin、Irisin、SF和let-7與GDM Logistic回歸分析

3 討論

妊娠期糖尿病是最常見的妊娠代謝并發癥，主要表現為妊娠前各項糖代謝指標正常，而妊娠后才出現的一種糖尿病，發病率占妊娠總數的10%-15%[14]，具體發病機制尚不明確，一般認為主要與年齡、肥胖、不良產科病史以及糖尿病家族史等因素有關[15]。妊娠糖尿病對母親和胎兒都有風險，GDM可增加流產、早產、感染等發生率，順利出生的嬰兒后期發展成肥胖、糖尿病和心血管疾病的概率也大大增加。故早期發現妊娠糖尿病，有效控制妊娠患者血糖對母親和保證胎兒正常生長發育非常重要。近年來，有關妊娠糖尿病的發病機制研究逐漸成為科學家關注的焦點，也為妊娠糖尿病的治療提供新思路。

鐵是細胞發揮功能的必需金屬元素之一，可以確保胎兒的正常生長發育。一般認為，鐵與氧化應激相關，而氧化應激反應是GDM的危險因素。因此，評價妊娠糖尿病患者血清SF水平與GDM的相關性，并探索高血清鐵蛋白對孕婦的負面影響對妊娠高血糖婦女和嬰兒都非常重要。有研究發現，與非GDM孕婦相比，GDM女性患者血漿鐵蛋白、孕前BMI、Hb和血糖水平都較高[16]。當SF>200 ng/mL時，孕婦不需要再補充鐵制劑[17]。本研究通過電化學發光法檢測血清中SF水平，結果表明GDM患者血清SF水平明顯高于CG組，與以往研究結果一致[17]。多因素回歸分析顯示，受試者血清SF與妊娠糖尿病呈正相關關系(P<0.01)。因此，檢測妊娠期婦女血清SF水平可以實現對GDM的提前預防。

胰島素抵抗是指機體攝取利用葡萄糖率下降，機體為維持血糖穩態會分泌更多的胰島素，易導致代謝綜合征和糖尿病。Irisin是研究者新發現的一類棕色脂肪以及轉化脂肪類型的新激素。有研究發現Irisin在妊娠糖尿病患者血清中水平明顯低于正常孕婦，Irisin與胰島素抵抗具有相關性，其水平的降低是胰島抵抗的原因之一[18]。有研究發現懷孕初期血清Irisin降低，其水平降低與GDM風險增加有關[17]。也有研究發現，Irisin水平在糖尿病和非糖尿病母親之間或在超重/肥胖和正常體重的母親之間沒有顯著性差異[19]。本研究利用ELISA試劑盒檢測血清中Irisin，結果發現GDM組Irisin水平低于正常組孕婦Irisin水平，相關性分析顯示受試者Irisin水平與妊娠糖尿病呈負相關關系(P<0.05)，為GDM發生的保護因素。因此，Irisin在妊娠糖尿病發展中起到的具體作用以及作用機制需要進一步研究。

Kisspeptin最先被鑒定為各類腫瘤的轉移抑制因子，屬于神經肽家族，能夠調節哺乳動物生殖的關鍵因子。而目前越來越多研究表明，Kisspeptin表達位置主要集中于大腦和胎盤組織，表達在胎盤組織的Kisspeptin能在人類早期妊娠過程中作為潛在的生物標志物檢測受試者生理病理情況[20]。本研究結果顯示，血清Kisspeptin與GDM呈正相關關系，為GDM發生的危險因素[21-22]。綜合以前結果可知，Kisspeptin可作為妊娠早期新發現標志物的潛在作用和作為妊娠相關疾病的診斷或治療目標，但Kisspeptin在妊娠早期或胎盤相關疾病中的診斷效用和治療靶點尚未完全證實。因此，還存在許多未解決的問題需要闡明。

let-7屬于microRNAs家族成員，在多種腫瘤組織中表達水平呈下降趨勢，因此也被認為是腫瘤抑制基因。近年來發現，let-7是糖代謝和胰島素敏感性調控的關鍵因素，且能生物放大。馬敬等[12]通過對比正常組小鼠和高脂組小鼠H19、let-7、LPL以及INSR-β、IRS-2和INSR相對表達水平發現，let-7參與妊娠糖尿病的發展，臨床上檢測let-7可以實現對GDM的早期預防。本研究利用實時熒光定量PCR技術檢測妊娠糖尿病患者血清let-7表達水平，結果發現GDM組孕婦let-7水平明顯高于CG組孕婦，差異有統計學意義。相關性分析也顯示let-7與GDM具有正相關關系，為GDM發生的危險因素。臨床上可以增加對let-7因子的檢測，對妊娠糖尿病進行早期預防并干預治療。

綜上所述，let-7、Irisin、Kisspeptin、SF 4個因子從不同的途徑對妊娠糖尿病的發生發展發揮著不同的作用，可作為GDM檢測的輔助指標，早期監測其水平對妊娠糖尿病預測、預防至關重要。這些因子也可能成為GDM治療的新靶標，有待進一步收集數據補充研究。