急性呼吸道腺病毒感染患兒混合感染臨床特征分析

蔣福亮 潘萬貴 林毅輝

急性呼吸道感染屬于鼻腔、咽、喉部位急性炎癥反應的總稱，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)的病毒感染中以腺病毒、鼻病毒、流感病毒、冠狀病毒等為主[1-3]。目前根據(jù)該病病原學檢測研究結(jié)果顯示，急性呼吸道腺病毒（acute respiratory adenovirus，ADV）感染是嬰幼兒急性呼吸道感染中最為常見的一種，主要引發(fā)發(fā)熱、咳嗽、呼吸困難等癥狀，嚴重者可因呼吸衰竭進而死亡[4]。考慮到該病具有發(fā)作急、進展快等特點，因此，臨床針對該病的早期發(fā)現(xiàn)尤為重要，應及時明確病原體種類，進而有利于臨床醫(yī)師給予對癥處理。國內(nèi)外對ADV感染的流行病學研究得到廣泛重視，但有關該病混合感染及單一感染的臨床特征比較尚無文獻支持，因此，本研究旨在探究ADV感染患兒混合感染的臨床特征，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2019年1-9月于泉州市婦幼保健院·兒童醫(yī)院接受治療的63例ADV感染患兒的臨床資料。（1）納入標準：①符合文獻[5]《諸福棠實用兒科學（第7版）》中有關ADV感染診斷標準；②年齡≤12歲；③鼻咽拭子實時熒光聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR）測試其腺病毒為陽性或血清樣本測試其腺病毒-lgM抗體陽性。（2）排除標準：①肝、腎功能異常；②病歷記錄不清楚；③標本不合格。根據(jù)其病原體檢出情況分為混合感染組及單一感染組。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 按照文獻[6]《臨床護理實踐指南（2011版）》中關于呼吸道咽拭子標本的采集步驟進行操作。操作步驟：用壓舌板輕壓舌部，迅速用棉簽擦拭患者口腔兩側(cè)腭弓及咽、扁桃體的分泌物，避免咽拭子觸及其他部位；將拭子頭浸入采樣液中（含有阻止細菌和真菌生長的抗生素緩沖液），在采樣液中壓拭子頭部數(shù)次，棄去尾部，旋緊管蓋，以防干燥。將采集好的樣本注明編號、樣本類型、采集時間。樣本提取前，將采集管（外螺旋扣、耐-80 ℃凍存）旋渦震蕩1 min后混合均勻，再進行核酸提取，樣本采集后應及時檢測，2 ℃～8 ℃保存3 d內(nèi)完成檢測。

1.2.2 試劑準備 從試劑盒中取出qRT-PCR反應液、qRT-PCR酶混合液、管-引物探針，室溫融化，充分振蕩混勻后瞬間離心。試劑使用份數(shù)N=樣本數(shù)+1管陽性對照+1管陰性對照，配置反應體系，加入離心管中，充分振蕩混勻后瞬間離心，按20 μl分裝至PCR反應管中，并轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。

1.2.3 樣本處理 待測樣本按照核酸提取試劑盒說明書進行操作核酸提取，并在上述準備好的PCR反應管中分別加入待測樣本核酸、陽性對照和陰性對照各5 μl，終體積為25 μl/管，蓋緊管蓋，瞬時離心。

1.2.4 PCR擴增檢測 將PCR管置ABI-7500熒光定量PCR儀（美國應用生物系統(tǒng)公司）擴增檢測，設置其逆轉(zhuǎn)錄溫度為50 ℃，時間10 min，循環(huán)數(shù)為1 cycle，而預變性及變性溫度均設置為95 ℃，預變性時間控制為5 min，循環(huán)數(shù)為1 cycle，變性時間10 s，循環(huán)數(shù)為40 cycles，退火/延伸/檢測熒光溫度設置為55 ℃，時間40 s，循環(huán)數(shù)為40 cycle。

1.2.5 結(jié)果分析 根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)Baseline的Start值、End值及Threshold的Value值（Start值建議設在3～15、End值建議設在5～20，同時調(diào)整陰性對照的擴增曲線平直或低于閾值線），點擊Analysis自動獲得分析結(jié)果，在Report界面察看結(jié)果，利用受試者工作特征（receiver operating characteristic curve，ROC）曲線確定本試劑盒病原體臨界Ct值均為35。

1.3 觀察指標

比較兩組患兒臨床癥狀、流行病學、住院時間及轉(zhuǎn)歸情況，并重點分析混合感染組患兒輔助檢查（病原學檢查、實驗室檢查、胸部影像學檢查）情況。

1.4 統(tǒng)計學處理

2 結(jié)果

2.1 分組結(jié)果

63例ADV感染患兒鼻咽拭子實時熒光PCR檢測中單一感染組12例，單一感染率為19.05%，均為腺病毒感染，而混合感染組51例，混合感染率為80.95%。

2.2 兩組臨床癥狀比較

臨床癥狀分析顯示，混合感染組臨床癥狀主要表現(xiàn)為咳嗽（100%）、發(fā)熱（82.35%）及咳痰（72.55%），而單一感染組主要表現(xiàn)為咳嗽（100%）、發(fā)熱（100%）及咳痰（50.00%），兩組各項癥狀比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表1。

表1（續(xù)）

2.3 兩組流行病學比較

混合感染組，男29例（56.86%），女22例（43.14%），男女比例為1.32∶1；好發(fā)年齡段為0～4歲（70.59%）；臨床診斷為重癥肺炎有24例（47.06%），肺炎27例（52.94%）；發(fā)病主要集中于4～9月（84.31%）。單一感染組男6例（50.00%），女6例（50.00%），男女比例為1∶1；好發(fā)年齡段為0～4歲（66.67%）；臨床診斷為重癥肺炎有5例（41.67%），肺炎6例（50.00%），急性胃腸炎1例（8.33%）；發(fā)病主要集中于4～6月（91.67%）。兩組性別、年齡、臨床診斷比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；兩組發(fā)病季節(jié)分布情況比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表2。

表2 兩組流行病學比較[例（%）]

表2（續(xù)）

2.4 兩組轉(zhuǎn)歸及住院時間比較

所有患兒均痊愈出院，無死亡病例。混合感染組住院時間為5～46 d，平均（34.59±4.28）d，單一感染組住院時間為3～22 d，平均（17.42±3.25）d。混合感染組住院時間長于單一感染組，差異有統(tǒng)計學意義（t=13.010，P=0.000）。

3 討論

近年來，急性呼吸道感染發(fā)病率逐年上升，現(xiàn)已成為我國兒童主要威脅疾病之一。研究調(diào)查顯示，90%以上的上呼吸道感染患兒屬于病毒感染，而在已知的病毒感染病例中，腺病毒占主要部分，較易在局部暴發(fā)流行，因此，針對該病的臨床特征及流行病學研究對臨床診療具有顯著意義[7-8]。本研究將ADV感染患兒分為混合感染組及單一感染組，旨在通過分析其混合感染發(fā)病率及臨床特征，提高對該病的認知，以便臨床針對性給予處理措施。以往研究顯示，ADV感染在不同季節(jié)不同年齡其發(fā)病率存在顯著差異[9-10]，而本研究通過分析患兒性別、年齡、臨床診斷及發(fā)病季節(jié)，發(fā)現(xiàn)兩組患兒性別比例均接近1∶1，提示該病患病率與性別無明顯關系，與以往研究報道的男性易感結(jié)果不同[11]。可能是因為本研究樣本量過少，需進一步研究。而兩組患兒好發(fā)年齡段為0～4歲，與王和平等[12-14]研究結(jié)果一致。可能是因為該年齡段的兒童免疫系統(tǒng)發(fā)育未完善，較易受到外界細菌及病毒感染，其抵抗力較低，且考慮到ADV感染具有交叉感染的特點，該年齡段兒童大部分集中在幼兒園，給病毒感染創(chuàng)造一定的優(yōu)越環(huán)境，因此較易暴發(fā)流行，且單一感染后較易為二次感染做基礎，以致混合感染。本研究通過對ADV感染患兒的病種分析，結(jié)果顯示兩組患兒臨床診斷主要以重癥肺炎及肺炎為主，其中單一組患兒可能是因為腺病毒主要引起下呼吸道感染，以肺炎及支氣管炎為主，而扁桃體炎等上呼吸道感染率較低。肺炎是小兒常見的感染性疾病之一，而隨著近年來抗生素的廣泛使用，細菌性肺炎發(fā)病率逐漸降低，而病毒感染及支原體所致的肺炎發(fā)生率呈現(xiàn)顯著升高的趨勢，其中腺病毒及呼吸道合胞病毒感染占主要。研究結(jié)果還顯示單一感染患兒主要在4～6月發(fā)病，而混合感染主要于4～9月發(fā)病，兩者發(fā)病時間分布差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），可能與單一感染患兒樣本量少有關，其發(fā)病主要為春、夏季，與以往研究得出的秋冬季結(jié)果不一致[15]。可能是因為本研究觀察時間較短，未涉及全年，且不同地區(qū)其季節(jié)氣候不同，但ADV活性確與氣候存在密切關系。研究中將混合感染患兒作為研究重點，發(fā)現(xiàn)混合感染以腺病毒混合肺炎鏈球菌及肺炎支原體為主，與其臨床癥狀對應，具體原因尚不明確，而患兒在ADV感染的基礎上伴有不同種類不同數(shù)量的其他病毒感染，表明不同病毒之間存在一定的親和性，可能是因為患兒機體遭受第1種病毒感染后，其呼吸道黏膜結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，為其他病毒的侵入打下基礎，進而導致混合感染，增加臨床治療困難度[16-17]。因此，可通過發(fā)放健康知識宣傳手冊提高患兒家屬認知度，進而預防性辨別臨床癥狀，盡早入院治療，以避免出現(xiàn)多種病毒感染的情況。另外單一感染患兒住院時間明顯短于混合感染（P<0.05），證實混合感染患兒隨著病情發(fā)展以致多重感染，在治療方面難度系數(shù)更高，因此住院時間相對延長，應做好防備。

綜上所述，ADV患兒混合感染的主要表現(xiàn)為咳嗽、發(fā)熱及咳痰，男女比例為1.32∶1，好發(fā)年齡段為0～4歲，主要以腺病毒混合肺炎鏈球菌及肺炎支原體為主。