冠狀動脈粥樣硬化性心臟病患者血漿微小RNA-34a水平對冠狀動脈病變程度的影響

叢琳強

(濱州醫學院煙臺附屬醫院 心內科, 山東 煙臺, 264100)

冠狀動脈粥樣硬化心臟性疾病(CHD)是嚴重威脅人類生命安全與生活質量的世界性健康問題，致殘率與致死率均極高[1]。CHD的病理表現為冠狀動脈管腔形成斑塊，出現鈣化和淀粉樣變，造成管腔狹窄與血管壁毛糙，嚴重時甚至引發管腔完全閉塞并形成血栓，阻礙冠狀動脈血流灌注，導致冠狀動脈病變，引發心肌細胞凋亡、壞死以及心肌纖維化[2]。冠狀動脈慢性完全閉塞病變(CTO)作為典型的CHD病變，冠狀動脈病變相對復雜且病變時間更長，是近年來心血管疾病臨床治療的難點與重點之一[3]。微小RNA(miRNA)作為內源性的非編碼單鏈RNA, 具有重要的生物學性質與作用，且不同的miRNA可能參與多種調控基因的表達[4]。相關研究[5]顯示，微小RNA-34a(miR-34a)表達水平與CHD的病理生理過程密切相關。本研究分析CHD患者血漿miR-34a水平與其冠狀動脈病變程度的相關性，以期確定miR-34a能否作為新型生物學標志物對CHD患者冠狀動脈病變程度進行評估，現報告如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2019年12月—2020年12月入住濱州醫學院煙臺附屬醫院心血管內科的93例患者作為研究對象。根據冠狀動脈介入造影檢查結果，將93例患者分為對照組(非CHD患者)20例與實驗組(CHD患者)73例，并根據病變是否為CTO將實驗組患者分為CTO組18例與非CTO組55例。CHD患者納入標準: ① 符合CHD的臨床診斷標準者; ② 一般資料完整者; ③ 心肌損傷標志物水平升高者; ④ 冠狀動脈造影檢查提示血管病變者。非CHD患者納入標準: 同期體檢的各項指標正常的患者。排除標準: ① 合并嚴重肝腎功能不全或腦卒中者; ② 合并急性肺栓塞、心肌炎等疾病者; ③ 血液系統疾病及自身免疫性疾病患者; ④ 使用類固醇藥物或消炎鎮痛藥治療者。本研究經濱州醫學院煙臺附屬醫院倫理委員會審核批準，且所有患者簽署知情同意書。

1.2 方法

血漿miR-34a水平檢測: ① 采集患者靜脈血(6 mL), 使用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管保存并進行2次離心處理。② 將離心后的血漿移至無菌EP管，并標注操作時間及患者所屬組別。③ 采用血漿microRNA快速提取試劑盒Ⅲ型進行基因提取，具體操作嚴格按照試劑盒說明書[6]進行，并將收集到的純miRNA保存于-80 ℃環境待用。④ 采用紫外分光光度法[7]進行miRNA濃度測量，并將獲得的血漿miR-34a濃度轉化為相對定量值。

冠狀動脈病變程度評估: 采用SYNTAX評分和Gensini評分對CHD患者的冠狀動脈病變程度進行評估，并以此為基礎進一步分析血漿miR-34a水平與CHD患者冠狀動脈病變程度的相關性。SYNTAX系統作為衡量冠狀動脈病變風險的工具，可通過SYNTAX評分的高低評估術前風險與預后。Gensini評分法是對冠狀動脈狹窄程度進行評分的方法，各病變血管評分為病變部分系數與其冠狀動脈狹窄基本評分的乘積，總評分為各病變血管評分的總和[8]。

1.3 評分標準

對實驗組73例CHD患者實施冠狀動脈造影術，并結合造影結果評估SYNTAX評分和Gensini評分。SYNTAX評分按照評分高低可分為高評分(>32分)、中評分(>22～32分)和低評分(0～22分)。Gensini評分標準: 狹窄直徑<25%, 1分; 狹窄直徑25%～<50%, 2分; 狹窄直徑50%～<75%, 4分; 狹窄直徑75%～<90%, 8分; 狹窄直徑90%～<99%, 16分; 狹窄直徑99%～<100%, 32分。

1.4 統計學分析

2 結 果

2.1 各組患者臨床資料及血漿miR-34a表達水平比較

非CTO組、CTO組的年齡、收縮壓、舒張壓和白細胞、血漿miR-34a水平均高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05); CTO組有高血壓病史者、有糖尿病史者占比和血小板水平均高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05); CTO組血漿miR-34a水平高于非CTO組，差異有統計學意義(P<0.05); 3組體質量指數、性別和甘油三酯、總膽固醇、空腹血糖水平比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 各組患者臨床資料及血漿微小RNA-34a表達水平比較

2.2 CHD患者SYNTAX評分與Gensini評分的相關性分析

相關性分析顯示, CHD患者SYNTAX評分與Gensini評分呈顯著正相關(r=0.361,P<0.001), 表明SYNTAX評分與Gensini評分的一致性較好，見圖1。

圖1 CHD患者SYNTAX評分與Gensini評分的相關性分析圖

2.3 不同SYNTAX評分組CHD患者血漿miR-34a水平及病變血管分布情況比較

根據SYNTAX評分將實驗組73例患者分為低評分組(0～22分)33例、中評分組(>22～32分)20例和高評分組(>32分)20例。高評分組多血管病變、CTO者占比和病變血管為左主干、左旋支、右冠狀動脈者占比均高于低評分組，中評分組多血管病變、CTO者占比和病變血管為左主干者占比均高于低評分組，高評分組CTO者占比高于中評分組，差異有統計學意義(P<0.05); 低評分組、中評分組、高評分組CHD患者的血漿miR-34a表達水平呈梯度上升趨勢，組間差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同SYNTAX評分組患者血漿微小RNA-34a水平及病變血管分布情況比較

2.4 不同Gensini評分組CHD患者血漿miR-34a水平及病變血管分布情況比較

根據Gensini評分將實驗組73例患者分為G1組(0～32分)29例、G2組(>32～68分)21例、G3組(>68～110分)13例和G4組(>110～256分)10例。G4組病變血管為左主干、左旋支者占比高于G1組, G2組、G3組、G4組多血管病變者占比高于G1組，差異有統計學意義(P<0.05); G3組、G4組CTO者占比均高于G1組、G2組，差異有統計學意義(P<0.05); G1組、G2組、G3組、G4組CHD患者血漿miR-34a表達水平呈梯度上升趨勢，組間差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 不同Gensini評分組患者血漿微小RNA-34a水平及病變血管分布情況比較

2.5 CHD患者血漿miR-34a水平診斷冠狀動脈病變的ROC曲線及與SYNTAX評分、Gensini評分的相關性

ROC曲線顯示，血漿miR-34a水平診斷冠狀動脈病變(SYNTAX評分)的曲線下面積(AUC)為0.786, 95%CI為0.739～0.829, 敏感度為0.533, 特異度為0.892, 見圖2A; ROC曲線顯示，血漿miR-34a水平診斷冠狀動脈病變(Gensini評分)的AUC為0.793, 95%CI為0.745～0.835, 敏感度為0.739, 特異度為0.746, 見圖2B; 相關性分析顯示, CHD患者血漿miR-34a表達水平與SYNTAX評分、Gensini評分均呈顯著正相關(r=0.084、0.076,P<0.001), 見圖2C、圖2D。

A: 血漿miR-34a水平診斷冠狀動脈病變(SYNTAX評分)的ROC曲線; B: 血漿miR-34a水平診斷冠狀動脈病變(Gensini評分)的ROC曲線; C: 血漿miR-34a水平與SYNTAX評分的相關性; D: 血漿miR-34a水平與Gensini評分的相關性。圖2 CHD患者血漿miR-34a水平診斷冠狀動脈病變的ROC曲線及相關性分析圖

3 討 論

CHD具有極高的致殘率與致死率，不僅嚴重威脅患者的生命安全與生活質量，而且會對社會經濟等造成重大負面影響[9]。miRNA作為內源性的非編碼單鏈RNA, 具有重要的生物學性質與作用[10]。研究[11-13]表明，血漿miR-34a作為小分子非編碼RNA, 對多種心血管疾病具有重要的診斷價值[14]。鑒于此，作者猜想血漿miR-34a與CHD患者冠狀動脈病變程度存在正相關性，并在此基礎上展開研究。本研究結果顯示，對照組、非CTO組、CTO組患者血漿miR-34a水平呈梯度上升趨勢，組間差異有統計學意義(P<0.05)。miR-34a在動脈粥樣硬化斑塊中的表達水平較高，故血管病變更為嚴重的CHD患者體內血漿miR-34a表達水平顯著更高[15-16], 這也解釋了非CTO組與CTO組患者血漿miR-34a表達水平的差異性。

本研究發現, CHD患者血漿miR-34a水平隨著SYNTAX評分、Gensini評分的升高呈現梯度上升趨勢，且血漿miR-34a水平與SYNTAX評分、Gensini評分均呈顯著正相關性(P<0.001)。由此表明，通過SYNTAX評分、Gensini評分判斷血漿miR-34a水平與CHD患者冠狀動脈病變程度的相關性，可驗證本研究的猜想，即血漿miR-34a與CHD患者冠狀動脈病變程度密切相關[17-18]。但由于樣本收集時間較短且樣本量較少，本研究的樣本統計分析結果可能存在誤差，未來還需要擴大樣本量進一步深入研究。

綜上所述，血漿miR-34a水平與CHD患者冠狀動脈病變程度呈正相關，有望作為評估CHD患者冠狀動脈病變程度的新型生物學指標，建議臨床人員繼續深入研究。