透明質酸寡糖通過影響核因子E2相關因子2信號通路促進糖尿病皮膚潰瘍創面愈合的機制研究

胡鐘元 ，張秀華 ，李帥廣 ，3，邵華榮 ，劉飛 ，3*，郭斌

糖尿病是世界范圍內常見和嚴重的慢性疾病之一。根據《國際糖尿病聯合會》第10版報告，2021年全球20～79歲人群糖尿病患病率為10.5%（5.366億），預計2045年將上升至12.2%（7.832億）［1］。糖尿病皮膚潰瘍（diabetic cutaneous ulcer，DCU）是糖尿病嚴重的慢性并發癥之一，致殘率高、治療費用昂貴［2-3］。糖尿病狀態下氧化應激水平過高是DCU患者創面難愈的重要原因，影響創面愈合的各個階段，嚴重者發生感染，甚至截肢［3-5］。因此，調節機體氧化還原平衡、促進血管新生從而加速創面愈合是加快糖尿病創面愈合的潛在治療方法。

透明質酸（hyaluronan，HA）是細胞外基質（extracellular matrix，ECM）中的一種高分子糖胺聚糖，由重復的D-葡萄糖醛酸和N-乙酰葡萄糖胺二糖單元組成，其功能與其分子量直接相關［6］。目前已有研究證實透明質酸寡糖（hyaluronic acid oligosaccharide，o-HA）（相對分子質量＜10 kDa）可通過增強血管生成促進創面愈合，對急性創面有修復作用［7］。本課題組前期研究也證實o-HA可刺激血管生成、加速創面重新上皮化、促進糖尿病大鼠創面愈合［8］，但其促進糖尿病小鼠創面愈合的機制研究尚不深入。為促進o-HA的進一步開發，本研究擬建立DCU模型，探究o-HA對糖尿病小鼠創面愈合的作用及可能機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 90只雄性SPF級昆明小鼠，6周齡，體質量（22±2）g，購自濟南朋悅實驗動物繁育有限公司，許可證號：SCXK（魯）20190003。小鼠飼養溫度22～25 ℃，相對濕度40%～60%。經山東省藥學科學院-藥物安全評價中心實驗動物管理和使用委員會（Institutional Animal Care and Use Committee，IACUC）批準試驗（編號：IACUC-2021-004）。實驗時間為2021年4—12月。

1.2 藥物與試劑 o-HA由山東省藥學科學院自制［9］（重均分子量：2.7 kDa，批號：20201021）；鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ）（北京博愛港生物技術有限公司）；活檢穿孔器（Kai medical），黏合劑（Krazy，744-3514），RIPA裂 解 液（radioimmunoprecipitation lysis buffer，RIPA）和苯甲基磺酰氟（phenylmethanesulfonyl fluoride，PMSF）（上海碧云天生物技術有限公司，P0013B，ST506）；β-肌動蛋白（β-action）（Cell Signaling，8457）；核因子E2相關因子2（NF-E2-related factor 2，Nrf2）（Proteintech，16396-1-AP），血紅素加氧酶1（heme oxygenase-1，HO-1）（Cell Signaling，86806），NAD（P）H 醌 氧化 還 原酶 1〔NAD（P）H quinone oxidoreductase 1，NQO1〕（Cell Signaling，3187）；辣根酶標記山羊抗兔IgG（中杉金橋，ZB-2301），辣根酶標記山羊抗小鼠免疫球蛋白G（IgG）（中杉金橋，ZB-2305）；血糖儀（歐姆龍HGM-112型）；血糖試紙（歐姆龍AS1型）；超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、 丙 二 醛（malonic dialdehyde，MDA）檢測試劑盒（中國南京建成生物工程研究所）。

1.3 o-HA軟膏的制備 采用乳化法制備o-HA軟膏，即將6.0 g黃凡士林、6.3 g硬脂酸、4.8 g單硬脂酸甘油酯、7.5 g液狀石蠟75 ℃加熱至融化制成油相，將6.0 g甘油、0.60 g十二烷基硫酸鈉、0.075 g尼泊金甲酯、28.8 ml蒸餾水80 ℃加熱至融化制成水相Ⅰ，向水相Ⅰ中加入0.3 g o-HA（0.5%）/0.6 g o-HA（1%）/1.2 g o-HA（2%）制成水相Ⅱ，水相Ⅱ緩慢加入油相中分別制備低、中、高劑量o-HA軟膏，邊加邊攪拌，直至冷凝。

1.4 糖尿病小鼠模型及創面模型的建立 參考文獻［10］構建糖尿病小鼠模型，所有小鼠于造模前1 d禁食不禁水16 h，次日上午尾部采血測空腹血糖（fasting blood glucose，FBG）后，以150 mg/kg劑量一次性腹腔注射STZ以誘發糖尿病。所有小鼠每周檢測FBG水平（禁食6 h），2次或2次以上FBG≥16.7 mmol/L判定為造模成功。

高血糖狀態持續6周后造成慢性糖尿病狀態，所有小鼠利用全層皮膚切除環形夾板法建立創面模型［11-13］（圖1）。小鼠腹腔注射1%戊巴比妥鈉（40 mg/kg）進行麻醉，將小鼠脊柱兩側皮膚的毛發去除干凈，使用75%酒精對造模處皮膚進行消毒，以脊柱為中線捏起小鼠背部皮膚，使用直徑6 mm的皮膚活檢打孔器按壓形成兩個對稱的圓形全層皮膚切除創口，用黏合劑將硅膠夾板固定在創面周圍，用5-0縫合線縫合后用無菌透明敷料覆蓋創面。實驗中共80只小鼠注射STZ，10只因血糖過低或過高死亡，5只造模未成功，2只出現并發癥，3只體質量過輕，均未納入分組。

圖1 創面模型的建立Figure 1 Establishment of the wound model

1.5 實驗分組及給藥 未注射STZ（注射同等劑量枸櫞酸-枸櫞酸鈉緩沖液）的血糖正常的10只小鼠作為正常對照組（normal control，NC組）。糖尿病模型建造成功的小鼠按照隨機數字表法分為6組：糖尿病模型組（diabetic model，DM組）、重組人表皮生長因子陽性對照組（recombinant human epidermal growth factor，rhEGF組）、空白基質陰性對照組（matrix組）、低劑量o-HA治療組（0.5% o-HA組）、中劑量o-HA治療組（1% o-HA組）、高劑量o-HA治療組（2% o-HA組），每組10只。NC組和DM組小鼠創面不做任何處理，其他各組每日創面及創周常規消毒后，均勻涂抹o-HA軟膏于創面及創周，rhEGF組給藥1次/d，0.5%、1%、2%o-HA組給藥2次/d，連續給藥14 d。

1.6 指標測定

1.6.1 創面愈合分析 第1、7、14天用相機對創面閉合區域進行追蹤，用Image J對創面愈合面積進行量化，得到創面愈合率，公式為：創面愈合率（%）=（原始創面面積-未愈合創面面積）/原始創面面積×100%。

1.6.2 創面組織蘇木素-伊紅（Hematoxylin and eosin，HE）染色、馬松三色（Masson trichrome，Masson）染色和CD34免疫組化染色觀察 連續給藥14 d后，取小鼠創面及創周皮膚組織，置于4%多聚甲醛中固定，石蠟包埋進行HE染色、Masson染色和免疫組化染色，于光鏡下進行觀察。通過HE染色觀察創面肉芽組織形態學變化，通過Masson染色觀察創面組織真皮層膠原纖維沉積情況，通過CD34免疫組化染色觀察o-HA對創面新生血管的影響。CD34多用于標記血管內皮細胞，血管腔內一層連續或不連續的陽性著色帶，即為染色的內皮細胞。利用CD34免疫組化染色對小鼠創面新生血管密度進行評估，采用Image-Pro Plus 6.0軟件計算免疫組化切片照片的陽性細胞數，除以細胞總數，即為每張免疫組化切片的陽性細胞率。

1.6.3 血清MDA、SOD水平分析 末次給藥后各組小鼠分別摘眼球取全血，室溫靜置1 h，4 ℃，3 000 r/min離心10 min，離心半徑8.6 cm，取上層血清，使用相應的試劑盒檢測血清SOD、MDA水平。

1.6.4 Western-blotting法檢測創面組織Nrf2、HO-1、NQO1蛋白表達 連續給藥14 d后，取小鼠創面及創周皮膚組織，置于1.5 ml凍存管中，液氮速凍后-80 ℃深低溫冰箱保存。實驗時將創面組織于-80 ℃取出，冰上解凍并稱重，剪碎后放于EP管中，按照每20 mg組織加入100 μl裂解液（含1% PMSF）的比例加入RIPA裂解液。功率400 W，冰水浴超聲5 s，間隔30 s，次數4次。充分勻漿后，4 ℃，12 000 r/min離心10 min，離心半徑8.6 cm。吸取上清液，BCA法測定蛋白濃度。聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白，并將其轉移到聚偏二氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜上，脫脂奶粉中封閉1 h，TBST緩沖液（TBS with Tween-20，TBST）清洗3次，加入一抗（Nrf2按1∶2 000稀釋，HO-1、NQO1、β-actin按1∶1 000稀釋），4 ℃孵育過夜，TBST清洗3次。隨后，加入1：20 000稀釋的山羊抗兔或山羊抗鼠二抗，在室溫下孵育1 h，TBST清洗3次，增強型化學發光（enhanced chemiluminescence，ECL）試劑進行顯色。Image J軟件對條帶進行定量分析，以目的蛋白灰度值/內參蛋白灰度值的比值作為該蛋白的相對表達量，對結果進行歸一化后進行統計分析。

1.7 統計學方法 采用GraphPad prism 8.4.2.679軟件進行統計分析，計量資料以（±s）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 糖尿病小鼠造模情況 第0周時，正常對照小鼠和糖尿病模型小鼠體質量、FBG比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）；第2、4、6、8周時，糖尿病模型小鼠體質量低于正常對照小鼠，FBG高于正常對照小鼠，差異均有統計學意義（P＜0.05），見表1、2。每周檢測糖尿病模型小鼠FBG均＞16.7 mmol/L，且體質量增長緩慢，出現多飲、多食、多尿、毛發暗黃的表現，認定糖尿病模型構建成功。體內實驗時間線見圖2。

圖2 DCU體內實驗時間線Figure 2 Timeline of in vivo experiments for diabetic cutaneous ulcer

表1 兩組小鼠不同時間點體質量比較（±s，g）Table 1 Comparison of weight level between two groups of mice at different time

表1 兩組小鼠不同時間點體質量比較（±s，g）Table 1 Comparison of weight level between two groups of mice at different time

組別 只數 第0周 第2周 第4周 第6周 第8周正常對照小鼠 10 25.06±0.58 35.07±0.63 42.58±0.53 46.84±1.10 48.96±0.78糖尿病模型小鼠 60 26.63±0.51 25.72±0.83 25.67±0.58 25.57±0.80 24.82±0.90 t值 2.04 8.96 21.54 15.59 20.29 P 值 ＞0.05 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01

2.2 o-HA對DCU小鼠創面愈合的影響 給藥第7、14天，各組小鼠創面愈合率比較，差異均有統計學意義（P＜0.05）；其中給藥第7天，DM組、matrix組創面愈合率低于NC組，rhEGF組、1% o-HA組創面愈合率高于DM組，0.5% o-HA組、2% o-HA組創面愈合率低于NC組、高于DM組；給藥第14天，DM組、matrix組創面愈合率低于NC組，rhEGF組、0.5% o-HA組、1%o-HA組、2% o-HA組創面愈合率高于DM組，差異均有統計學意義（P＜0.05），見表3、圖3。

圖3 創傷后各組小鼠創面愈合情況比較Figure 3 Comparison of wound healing in each group after trauma

表3 各組小鼠創傷后不同時間創面愈合率比較（±s，%）Table 3 Comparison of wound healing rate in each group of mice at different time points after trauma

表3 各組小鼠創傷后不同時間創面愈合率比較（±s，%）Table 3 Comparison of wound healing rate in each group of mice at different time points after trauma

注：NC組=正常對照組，DM組=糖尿病模型組，rhEGF組=重組人表皮生長因子陽性對照組，matrix組=空白基質陰性對照組，o-HA=透明質酸寡糖；a表示與NC組相比P＜0.05，b表示與DM組相比 P＜0.05

組別 只數 第7天 第14天NC組 10 56.52±1.55 93.57±3.15 DM 組 10 29.89±5.27a 75.56±5.12a rhEGF 組 10 55.91±0.83b 90.17±1.12b matrix組 10 36.92±0.53a 82.91±0.98a 0.5% o-HA組 10 43.92±0.86ab 88.02±1.60b 1% o-HA 組 10 51.79±1.48b 92.92±1.39b 2% o-HA 組 10 47.50±2.64ab 88.17±1.08b F值 16.81 6.29 P值 ＜0.01 ＜0.05

表2 兩組小鼠不同時間點FBG比較（±s，mmol/L）Table 2 Comparison of fasting blood glucose level between two groups of mice at different time

表2 兩組小鼠不同時間點FBG比較（±s，mmol/L）Table 2 Comparison of fasting blood glucose level between two groups of mice at different time

組別 只數 第0周 第2周 第4周 第6周 第8周正常對照小鼠 10 7.69±0.24 10.71±0.56 8.16±0.28 8.77±0.38 8.61±0.36糖尿病模型小鼠 60 7.24±0.22 28.15±0.71 30.75±0.36 30.08±0.64 29.57±0.89 t值 1.36 19.23 49.10 28.59 21.70 P值 ＞0.05 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01

2.3 o-HA對DCU小鼠創面肉芽組織形成、膠原纖維沉積的影響 HE染色結果顯示，DM組小鼠創面直徑最寬，與DM組相比，o-HA和rhEGF處理的小鼠創面直徑顯著減小，不同劑量o-HA處理創面直徑無顯著差別，matrix組創面相對較寬；NC組小鼠創面上皮細胞結構正常，真皮層膠原纖維排列整齊；與DM組和matrix組相比，rhEGF組新生肉芽組織幾乎取代所有壞死組織，0.5% o-HA組新生血管逐漸閉合，炎性細胞浸潤減少，1% o-HA組和2% o-HA組新生表皮較厚，成纖維細胞與纖維細胞數量增多，膠原纖維生成較多（圖4）。

圖4 創傷后14 d各組小鼠創面組織HE染色Figure 4 Wound tissue of mice in each group was stained with H&E on day 14 after trauma

Masson染色結果顯示，DM組創面藍染少、著色淺，膠原纖維分布稀疏，排列紊亂；不同劑量的o-HA組藍染多，著色深，創面膠原纖維排列規則有序，2% o-HA組藍染較0.5% o-HA組和1% o-HA組淺，膠原纖維生成情況較差。組織形態學分析顯示o-HA治療后肉芽組織、膠原纖維生成增多，表皮結構趨于完整（圖5）。

圖5 創傷后14 d各組小鼠創面組織Masson染色Figure 5 Wound tissue of mice in each group was stained by Masson on day 14 after trauma

2.4 o-HA對DCU小鼠創面組織新生血管密度的影響

NC組棕色CD34陽性細胞率為（13.40±0.47）%，DM組為（6.34±0.37）%，rhEGF組為（12.62±0.70）%，matrix組 為（6.01±1.35）%，0.5% o-HA組 為（11.56±0.30）%，1% o-HA組為（14.28±2.26）%，2%o-HA組為（12.68±1.83）%，各組棕色CD34陽性細胞率比較，差異有統計學意義（F=7.162，P=0.001）。其中DM組、matrix組CD34陽性細胞率低于NC組，rhEGF組、0.5% o-HA組、1% o-HA組、2% o-HA組CD34陽性細胞率高于DM組，差異有統計學意義（P＜0.05）。

各給藥組新生血管排列規律，管腔狹長，呈梭形，1% o-HA組新生血管較為明顯；DM組及matrix組血管雜亂，零星分布，且大部分新生血管較細。免疫組化結果顯示o-HA對創面周圍血管、毛細血管有明顯的刺激作用，見圖6。

圖6 各組小鼠創面組織CD34免疫組化染色Figure 6 Immunohistochemical staining of CD34 in wound tissue of mice in each group

2.5 o-HA對DCU小鼠的抗氧化作用 各組小鼠MDA、SOD水平比較，差異均有統計學意義（P＜0.05）。其中DM組、matrix組MDA水平高于NC組、SOD水平低于NC組；rhEGF組MDA水平低于DM組，SOD水平低于NC組、高于DM組；0.5% o-HA組MDA水平高于NC組、低于DM組，SOD水平高于DM組；1% o-HA組MDA水平低于DM組，SOD水平高于DM組；2% o-HA組MDA水平高于NC組、低于DM組，SOD水平低于NC組、高于DM組，差異均有統計學意義（P＜0.05），見表4。

表4 各組小鼠血清SOD、MDA水平比較（±s）Table 4 Comparison of SOD and MDA levels in serum of each group

表4 各組小鼠血清SOD、MDA水平比較（±s）Table 4 Comparison of SOD and MDA levels in serum of each group

注：a表示與NC組相比P＜0.05，b表示與DM組相比P＜0.05；MDA=丙二醛，SOD=超氧化物歧化酶

組別 只數 MDA（nmol/ml） SOD（U/ml）NC 組 10 4.13±0.86 163.40±2.65 DM 組 10 15.00±0.29a 61.34±1.73a rhEGF 組 10 8.85±0.96b 110.10±1.62ab matrix組 10 12.67±0.38a 80.51±3.23a 0.5% o-HA 組 10 10.22±1.19ab 120.90±8.05b 1% o-HA組 10 6.18±0.10b 136.30±11.15b 2% o-HA組 10 10.35±0.65ab 105.70±2.05ab F值 34.22 37.23 P 值 ＜0.01 ＜0.01

2.6 o-HA對DCU小鼠創面組織Nrf2、HO-1、NQO1蛋白表達的影響 各組小鼠Nrf2、HO-1、NQO1蛋白表達水平比較，差異均有統計學意義（P＜0.01）。其中DM組Nrf2、NQO1蛋白表達水平低于NC組；rhEGF組、1% o-HA組Nrf2、HO-1、NQO1蛋白表達水平均高于NC組和DM組；0.5% o-HA組Nrf2、NQO1蛋白表達水平高于DM組，HO-1蛋白表達水平高于NC組和DM組；2% o-HA組HO-1蛋白表達水平高于NC組和DM組，NQO1蛋白表達水平高于DM組，差異均有統計學意義（P＜0.05），見表5、圖7。o-HA促進DCU小鼠創面愈合的機制見圖8。

圖7 各組小鼠創面組織Nrf2、HO-1、NQO1蛋白表達Figure 7 Expression of Nrf2，HO-1 and NQO1 proteins in wound tissue of each group

圖8 o-HA影響Nrf2信號通路促進糖尿病小鼠創面愈合Figure 8 o-HA affects Nrf2 signaling pathway and promote wound healing in diabetic mice

表5 各組小鼠創面組織Nrf2、HO-1、NQO1蛋白相對表達量（±s）Table 5 The relative expression of Nrf2，HO-1 and NQO1 protein in wound tissue of each group

表5 各組小鼠創面組織Nrf2、HO-1、NQO1蛋白相對表達量（±s）Table 5 The relative expression of Nrf2，HO-1 and NQO1 protein in wound tissue of each group

注：a表示與NC組相比P＜0.05，b表示與DM組相比P＜0.05；Nrf2=核因子E2相關因子2，HO-1=血紅素加氧酶1，NQO1=NAD（P）H醌氧化還原酶1

組別 只數 Nrf2 HO-1 NQO1 NC 組 10 1.10±0.11 1.06±0.10 1.08±0.07 DM 組 10 0.81±0.04a 1.11±0.04 0.67±0.03a rhEGF 組 10 1.41±0.05ab 2.47±0.13ab 2.13±0.05ab matrix組 10 0.88±0.01 1.40±0.15 0.90±0.05 0.5% o-HA 組 10 1.23±0.11b 1.83±0.02ab 1.16±0.10b 1% o-HA 組 10 1.42±0.03ab 2.49±0.06ab 1.77±0.09ab 2% o-HA 組 10 0.89±0.04 2.34±0.06ab 1.20±0.04b F值 14.32 47.61 58.30 P 值 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01

3 討論

目前，治療糖尿病難愈創面的方法主要是在控制血糖的基礎上預防感染，減輕創面炎性反應。對于一些新興療法如生長因子療法、干細胞治療，雖然效果顯著，但是存在治療成本高、具有誘導炎癥和免疫原性的局限性，因此，對于DCU的治療，亟需更安全、有效的藥物。o-HA由HA經酶解而成，具有促進血管新生的生物活性，從而可以促進創面愈合［14］。雖然文獻已報道o-HA可通過增加創面處細胞酪氨酸激酶（steroid recep-tor coactivator，Src）、細胞外信號調節激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）磷酸化以及轉化生長因子 -β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）的表達，促進糖尿病創面愈合［8］，但是關于o-HA在DCU創面愈合抗氧化作用及氧化應激的機制研究很少。

DCU的發病機制比較復雜，高血糖引發的氧化應激水平升高是其中重要方面，而Nrf2通路是重要的抗氧化應激信號通路，本研究采用腹腔注射STZ的方法誘導糖尿病，建立全層皮膚缺損環形夾板模型，研究o-HA對DCU創面愈合的作用及氧化應激的影響。該模型將環形硅膠夾板緊緊貼附在小鼠創面周圍皮膚上，以減少創面皮膚收縮的影響，使小鼠創面最大程度通過肉芽組織生成均勻閉合，從而使創面愈合更接近糖尿病患者創面愈合方式。本研究結果證實o-HA可加速創面肉芽組織生成、增加膠原纖維沉積、加快新生血管生成從而促進糖尿病小鼠創面愈合，改善DCU。此外，本研究結果顯示中劑量o-HA軟膏對糖尿病創面愈合的治療效果最佳，和rhEGF凝膠治療糖尿病小鼠創面愈合的愈合率幾乎相同，低劑量與高劑量o-HA軟膏治療效果均不如中劑量組，分析原因可能是給藥前需對創面進行消毒清洗，而o-HA濃度越大，越容易在創面部位形成干膏，清洗不到位，影響藥物的二次吸收，清洗過度，創面容易撕裂，造成二次創傷；另一方面，高劑量組軟膏覆蓋在創面表面，可能導致創面透氣性不理想。總之，本研究結果表明，o-HA對糖尿病創面具有較好的促愈合作用，表現為明顯減小創面面積，顯著提高創面愈合率，促進創面肉芽組織形成、膠原沉積以及增加毛細血管密度。

氧化應激在糖尿病各系統并發癥中普遍存在，過高的氧化應激水平會對機體中的蛋白質、脂質和DNA造成損傷，最終導致細胞死亡和組織功能障礙［15］。MDA是脂質過氧化物的最終產物，可作為氧化應激的生物標志物［16］。本研究發現，DM組MDA水平升高，經o-HA處理后含量降低。SOD是機體抗氧化損傷酶系統的重要部分，SOD通過催化超氧自由基生成分子氧和過氧化氫來減輕氧化應激［16］。本研究中DM組活力降低，o-HA治療后逆轉了糖尿病引起的總抗氧化能力下降。Nrf2信號通路在維持細胞內氧化平衡方面起著重要作用，是糖尿病、阿爾茨海默病、心血管疾病、DCU、糖尿病腎病等疾病的藥物靶點［5］。Nrf2通過調節NQO1、HO-1等基因維持細胞氧化還原平衡。研究表明，Nrf2活化劑SFN可導致Nrf2的核轉移以及積累，并增加HO-1和NQO1在糖尿病視網膜病變中的表達［17］。在糖尿病創面愈合中，創面中的活性氧（ROS）導致DNA雙鏈斷裂、脂質過氧化、蛋白質變性以及糖尿病創面愈合受損，Nrf2及其下游抗氧化基因明顯減少。本研究進一步證實o-HA在抗氧化應激方面的重要性，其可降低機體氧化應激水平，升高Nrf2、HO-1、NQO1的蛋白表達水平，影響Nrf2信號通路促進糖尿病小鼠創面愈合。然而，DCU發病機制復雜，本研究下一步將從能量代謝角度深入探討o-HA改善DCU的作用機制。

綜上所述，本研究證實o-HA可促進糖尿病創面愈合，其機制可能與影響Nrf2信號通路，加速創面閉合和再上皮化，刺激血管新生有關，具有開發為治療DCU藥物的重要潛力。

作者貢獻：胡鐘元負責實驗設計的實施、實驗指標的檢測以及撰寫論文，并進行數據處理、統計學分析、繪制圖表；張秀華、李帥廣負責進行動物造模以及論文的修訂；邵華榮負責最終版本的修訂以及論文內容的審校；劉飛、郭斌負責確定文章選題，指導實驗設計及論文撰寫。

本文無利益沖突。