血培養直接藥敏試驗對血流感染性疾病的臨床應用價值研究

劉少娟 彭湘明 巫楚媚 賴艷榕 鄧露露 劉瀚榆

[摘要]目的探討血培養直接藥敏試驗對血流感染性疾病的臨床應用價值。方法選取血培養陽性標本55例，運用 K-B 法進行直接藥敏試驗和標準藥敏試驗，統計血培養革蘭陽性球菌和革蘭陰性桿菌7 h 和16 h 直接藥敏試驗結果的標準符合率并進行比較。結果血培養革蘭陽性球菌7 h 和16 h 的直接藥敏試驗結果的標準符合率分別為78.261%和84.950%;血培養革蘭陰性桿菌7 h 和16 h 的直接藥敏試驗結果的標準符合率分別為81.066%和91.912%。經統計學處理，直接藥敏試驗結果兩個時間段之間差異有統計學意義，血培養革蘭陽性球菌和革蘭陰性桿菌16 h 藥敏試驗結果的標準符合率均高于7 h 藥敏試驗結果的標準符合率（ P <0.05）。結論血培養直接藥敏試驗耗時短，操作簡便，培養16 h 的結果標準符合率較高，臨床醫生可參考血培養直接藥敏結果為早期血流感染患者選取合適的抗生素治療。

[關鍵詞]血培養;直接藥敏試驗;標準藥敏試驗;紙片擴散法;菌液濃度

[中圖分類號] R446.1? [文獻標識碼] A?? [文章編號]2095-0616（2022）09-0142-05

Study on the clinical value of direct drug susceptibility testing of blood cultures for blood-borne infectious diseases

LIU 1Shaojuan??? PENG? Xiangming ??WU? Chumei（ 2）?? LAI 1Yanrong??? DENG? Lulu（ 1）?? LIU 1Hanyu

1. Department of Clinical Laboratory， Guangzhou Red Cross Hospital， Guangdong， Guangzhou 510220， China;2. Foshan Nanhai District Fifth People's Hospital， Guangdong， Foshan 528231， China

[Abstract] Objective To investigate the clinical value of direct drug susceptibility testing of blood cultures for blood-borne infectious diseases. Methods A total of 55 blood culture positive samples were selected for direct drug susceptibility testing and standard drug susceptibility testing by the K-B method. The standard coincidence rates of 7-hour and 16-hour direct drug susceptibility testing results for blood culture gram- positive cocci and gram-negative bacilli were counted and compared. Results The standard coincidence rates of 7-hour and 16-hour direct drug susceptibility testing results for blood culture gram-positive cocci were 78.261% and 84.950%， respectively; the standard coincidence rates of 7-hour and 16-hour direct drug susceptibility testing results for blood culture gram-negative bacilli were 81.066% and 91.912%， respectively. Upon statistical processing， there was a statistically significant difference between the two periods in the results of direct drug susceptibility testing. The standard coincidence rate of 16-hour drug susceptibility testing results for blood culture gram-positive cocci and gram-negative bacilli was higher than that of 7-hour drug susceptibility testing results （P <0.05）. Conclusion The direct drug susceptibility testing of blood cultures is less time- consuming and easy to operate. The standard coincidence rate of the results for the 16-hour culture is relatively high. Clinicians can refer to the direct drug susceptibility testing results of blood cultures to select appropriate antibiotic therapy for patients with early blood stream infection.

[Key words] Blood culture; Direct drug susceptibility testing; Standard drug susceptibility testing; Disk diffusion method; Bacterial solution concentration

血流感染是極易引起機體中毒、感染及全身炎癥反應的感染性疾病，起病急、病情兇險、病死率高[1-3]。對于嚴重的血流感染，早期明確病原菌并給予有效的抗菌藥物治療至關重要，可顯著降低患者病死率[4-5]。按照傳統的方法，血培養和藥敏試驗需要3～5 d 才得到結果以指導臨床用藥[6]。但是直接藥敏試驗用時較短，減少了細菌分離純化的步驟，縮短報告時間。本研究是通過計算直接藥敏試驗的標準符合率，比較兩個時間段標準符合率的差異，探討能否運用直接藥敏試驗在較短的時間內得出準確的藥敏結果，為臨床提供用藥參考依據。

1.1儀器與試劑

BACTEC FX 全自動血培養儀（美國 BD 公司），比濁儀（美國 BD 公司），血培養標準需氧瓶（美國 BD 公司，批號：9239513），厭氧瓶（美國 BD 公司，批號：9281699），血平板（江門凱林，批號：200320），營養瓊脂培養基（杭州濱和，批號：210302），MH 平板（廣州迪景，批號： MHP-200301D），藥敏紙片（英國 OXOID，批號：青霉素3184404，利奈唑胺2490427，四環素3230868，氯霉素3247319，萬古霉素3195888，哌拉西林/他唑巴坦3190129，替考拉寧2203197，利福平2942763，左氧氟沙星3195900，慶大霉素2972738，復方磺胺3270612，克林霉素2972599，紅霉素2866326，頭孢西丁3001688，頭孢哌酮2422371，頭孢呋辛3250444，頭孢唑林3195880，美洛培南3207311，亞胺培南2993932，阿米卡星2968034，頭孢吡肟3184467，頭孢他啶2961052，環丙沙星3242763，氨芐西林2499343，氨曲南2897396）。

1.2操作方法

1.2.1鏡檢血培養瓶報陽之后，首先將血瓶顛倒搖勻，然后用注射器抽取血瓶血液滴一滴在有磨砂玻璃玻片上，固定烘干之后進行快速革蘭染色，在顯微鏡下觀察判斷為革蘭陽性球菌還是革蘭陰性桿菌。

1.2.2直接藥敏試驗直接用1 ml 注射器抽取血培養儀報警陽性瓶中的血液4滴（約50μl）滴在 MH 平板上，用無菌棉簽蘸取無菌生理鹽水后，再將血液均勻涂布在 MH 藥敏平板，用紙片分配器貼上相應的革蘭陽性球菌或者革蘭陰性桿菌藥敏紙片，置35℃培養箱培養，在培養后的6～8 h 和16～18 h 分別量取抑菌環直徑。

1.2.3標準藥敏試驗按照常規操作程序進行，用血平板先進行菌種的分離純化，培養后選取單個菌落配制為0.5個麥氏濃度，用無菌棉簽蘸取菌液后，均勻涂布在 MH 藥敏平板上，并貼上相應的革蘭陽性球菌或者革蘭陰性桿菌藥敏紙片，置35℃培養箱18～24 h 培養后量取抑菌環直徑。

1.2.4藥敏結果判斷標準[7] 按美國臨床實驗室標準協會標準，①標準符合率（CA）：標準藥敏和直接藥敏結果一致;②嚴重錯誤（VME）：標準藥敏耐藥 R，直接藥敏敏感 S;③重大錯誤（ME）：標準藥敏敏感 S，直接藥敏耐藥 R;④一般錯誤（MIE）：標準藥敏敏感 S 或耐藥 R，直接藥敏中度敏感 I，標準藥敏中度敏感 I，直接藥敏敏感 S 或耐藥 R。

采用 SPSS 20.0統計學軟件進行統計分析，計數資料用[n （%）]表示，采用χ2檢驗， P <0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1藥敏試驗中病原菌的種類

本實驗菌株均來自臨床患者，共55例，革蘭陽性球菌23例，革蘭陰性桿菌32例;其中革蘭陽性球菌分別為金黃色葡萄球菌18例、凝固酶陰性葡萄球菌5例;革蘭陰性桿菌分別為大腸埃希菌20例、肺炎克雷伯菌5例、銅綠假單胞菌7例。

2.2藥敏結果標準符合率統計

血培養革蘭陽性球菌7 h 和16 h 直接藥敏試驗結果標準符合率分別為78.261%、84.950%，差異有統計學意義（χ2=4.456， P <0.05），見表1～2，可認為16 h 的直接藥敏試驗結果標準符合率更高，結果更可靠;革蘭陰性桿菌7 h 和16 h 藥敏試驗結果標準符合率分別為81.066%、91.912%，差異有統計學意義（χ2=27.380， P <0.001），見表3～4，可認為16 h 的直接藥敏試驗結果標準符合率更高，結果更可靠。

3討論

血流感染，是一種威脅生命的全身性感染疾病，用藥必須及時才能最大程度控制感染，所以，臨床醫生對血流感染往往首先考慮經驗用藥。但隨著抗生素的不規范使用，細菌對抗菌藥物的耐藥性日趨嚴重，使感染性疾病的治療受到巨大挑戰[8-10]。為避免盲目使用抗生素，盡快有效控制感染，快速的直接藥敏試驗的應用價值越來越多被研究。采用直接藥敏試驗能縮短患者住院時間，降低罹患難辨梭菌相關腹瀉的風險、降低患者平均病死率與感染相關病死率[11]。直接藥敏試驗跟傳統的標準藥敏試驗相比，減少了第一步的菌種分離純化的步驟，但是由于血流感染多數情況下是單一菌種的感染，因此直接選用血培養瓶報警陽性后的血液進行 K-B 法藥敏試驗也是可取的。相關研究[12-14]顯示，血培養直接藥敏試驗比傳統的標準藥敏試驗耗時短，兩種方法對抗菌藥物的敏感性和耐藥性方面無明顯差距，本研究也認同此觀點。本研究革蘭陽性球菌和革蘭陰性桿菌16 h 的直接藥敏試驗結果比7 h 的結果標準符合率更高，結果更可靠，主要原因可能是培養時間的不足，傳統的標準藥敏試驗都是過夜培養18～24 h，細菌有充分時間進行傳代、與藥物作用，而細菌只培養7 h 傳代次數不足、細菌生長不好、與藥物未能充分作用，因此很多藥敏紙片的抑菌環直徑顯示不清晰，容易造成判讀結果時的誤差，出現較為嚴重的錯誤。

革蘭陽性球菌的直接藥敏試驗中，培養7 h 和16 h，青霉素、利奈唑胺、四環素和氯霉素的標準符合率高達90%以上，但是也發現萬古霉素、替考拉寧、頭孢西丁和左氧氟沙星標準符合率不太高，可能由于藥敏規則中萬古霉素是培養24 h 才能判讀結果，另外，學者普遍認為采用紙片擴散法對萬古霉素的藥物敏感性進行測定是不可靠的[15]，因為其對某些金黃色葡萄球菌對萬古霉素是敏感還是中介無法區分，應該常規采用肉湯稀釋法來提高萬古霉素藥物敏感度的準確性。頭孢西丁跟萬古霉素一樣，某些葡萄球菌也必須培養24 h 才能判讀抑菌環直徑大小，培養時間短、藥物未充分作用、菌種生長不好，可能是導致兩個時間段藥敏符合率偏低的主要原因。另外，革蘭陽性球菌還需要注意 D 試驗陽性的菌種，D 試驗用于觀察葡萄球菌對紅霉素誘導克林霉素的耐藥情況[16]。在本研究直接藥敏試驗中，發現有4例 D 試驗陽性，說明進行直接藥敏試驗也可發現 D 試驗陽性菌株，所以要特別注意紅霉素和克林霉素的藥敏結果，一旦發現 D 試驗陽性，盡管紅霉素和克林霉素藥敏試驗中抑菌環大小顯示其為敏感，報告臨床時均改為耐藥。

革蘭陰性桿菌的直接藥敏試驗中，培養16 h，美洛培南、復方新諾明、亞胺培南和慶大霉素的標準符合率高達100%，另外多種藥物的標準符合率也高達90%以上;培養7 h，頭孢呋辛、左氧氟沙星、復方新諾明、慶大霉素和氨芐西林的標準符合率也高達90%以上，某些藥物7 h 和16 h 的標準符合率相差不是較大，分析原因可能因為革蘭陰性桿菌的傳代間隔時間較短，傳代次數較多，在7 h 判讀結果時已經出現明顯的抑菌環直徑，提高肉眼判讀結果的準確性。但是還存在有個別藥物的符合率相差甚遠，如哌拉西林/他唑巴坦、亞胺培南、頭孢西丁和頭孢他啶等藥物，原因可能也與細菌生長周期和藥物的相互作用有關。

綜上所述，直接藥敏試驗比標準藥敏試驗耗時短，操作簡便，革蘭陰性桿菌16 h 的直接藥敏試驗結果在臨床上具有較高的參考價值，革蘭陽性球菌仍有幾類藥物（如利奈唑胺、四環素、氯霉素、慶大霉素、左氧氟沙星和復方磺胺等）符合率較高，臨床醫生可以直接藥敏試驗結果作為參考，及時給患者使用抗生素，降低患者病死率和避免抗生素的濫用造成細菌耐藥性的變異。

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（收稿日期：2021-09-30）