抗凝與非抗凝血液標本對4項傳染性指標酶聯免疫吸附試驗影響的研究

馬紅 張珊珊 何美香 楊靖

[摘要]目的觀察并比較抗凝與非抗凝血液標本對4項傳染性指標酶聯免疫吸附試驗結果的影響效果。方法選擇2020年1月至2021年10月烏魯木齊市中醫醫院采血的患者264例血液標本進行研究，均為全血標本。每份血液標本均使用非抗凝管留取靜脈血，每支5 ml，并使用抗凝管（枸櫞酸-枸櫞酸鈉）留取靜脈血，每支2 ml。所有樣本均接受離心處理，按照試劑說明書操作步驟手工加樣后進行處理，獲得最終的檢測結果。結果經酶聯免疫吸附試驗初步檢測，抗凝標本與非抗凝標本在乙型肝炎病毒（HBV）、人類免疫缺陷病毒（HIV）、梅毒螺旋體（TP）檢測結果方面比較，差異有統計學意義（P<0.05）。264個樣本標本中，有5例初次檢測結果出現不一致，重復實驗后結果顯示，上述5例標本的復試結果趨于一致。初次檢測0.8≤ S/CO ≤1的抗凝標本共有22份，對其進行抗凝與非抗凝血各一孔的雙孔復試，22份標本經復試后，1份標本的結果為灰區，其余21份標本的結果為非反應性，最終的復試結果一致率為95.45%。結論在血液標本的檢測中，與非抗凝血液標本比較，應用枸櫞酸-枸櫞酸鈉抗凝血液標本會對4項傳染性指標酶聯免疫吸附試驗檢測結果產生一定的影響，導致一定假陽性的出現，但經復試后，可有效排除干擾。

[關鍵詞]血液標本;傳染性指標;酶聯免疫吸附試驗;抗凝標本;非抗凝標本

[中圖分類號] R446.6? [文獻標識碼] A?? [文章編號]2095-0616（2022）09-0146-04

Study on the effects of anticoagulated and non-anticoagulated blood specimens on the results of ELISA detected four infectious indicators

MAHongZHANGShanshanHE? MeixiangYANGJing

1.Department of Clinical Laboratory， Urumqi Hospital of Traditional Chinese Medicine， Xinjiang， Urumqi 830000， China;2.Department of Blood Transfusion， the Fourth Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University， Xinjiang， Urumqi 834000， China;3.Molecular Genetics Group of Clinical Laboratory Department， Xinjiang Purisaixin Medical Laboratory， Xinjiang， Urumqi 830000， China

[Abstract] Objective To observe and compare the effects of anticoagulated and non-anticoagulated blood specimens on the results of four infectious indicators detected by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. Methods A total of 264 blood specimens were selected for the study， all of which were whole blood specimens collected from patients in Urumqi Hospital of Traditional Chinese Medicine from January 2020 to October 2021. Venous blood in each blood specimen was retained using non-anticoagulated tubes of 5 ml each and anticoagulated tubes （citrate-sodium citrate） of 2 ml each. All specimens were subjected to centrifugation and processed after the manual addition of specimens according to the operating procedures of the reagent instructions to obtain the final test results. Results The preliminary detection by ELISA showed that there were some differences between anticoagulated and non-anticoagulated blood specimens in terms of the test results of hepatitis B virus （HBV）， human immunodeficiency virus （HIV） and treponema pallidum （TP）， with statistically significant differences （P <0.05）. Among the 264 specimens， there were 5 specimens with inconsistent initial test results， while the repeated test results of the above 5 specimens tended to be consistent. A total of 22 anticoagulated specimens with an initial test result of 0.8≤ S/CO ≤1 were double-well retested with one well each for anticoagulated and non-anticoagulated blood. The cumulative retest results revealed that after retesting 22 specimens， one specimen had the result distributed in the gray area， and the remaining 21 specimens had non-reactive results， with a final concordance rate of 95.45%. Conclusion Compared with non-anticoagulated blood specimens， the citrate-sodium citrate anticoagulated blood specimens can produce some influence on theresults of ELISA detected four infectious indicators， leading to the appearance of certain false positives， but after retesting， the interference can be effectively excluded.

[Key words] Blood specimens; Infectious indicators; Enzyme-linked immunosorbent assay; Anticoagulated specimens; Non-anticoagulated specimens

目前，在醫療機構的日常工作中，為確保臨床診斷準確，需要對患者的血液標本進行一定的檢測，檢測相關的傳染性指標，如梅毒等[1]。在檢測過程中，酶聯免疫吸附試驗是應用較多的方法[2-3]。檢測結果的準確性容易受到多種因素的影響，其中，標本的抗凝血處理是一個十分重要的因素。根據上述情況，本研究選擇納入264例血液標本進行分組比較研究，對收集到的血液標本分別實施非抗凝管留取血樣以及抗凝管（枸櫞酸-枸櫞酸鈉）留取血樣，并進行酶聯免疫吸附試驗。通過對相關傳染性指標檢測結果的比較，分析抗凝血處理血液標本對最終檢測結果的影響情況，以期為臨床血液標本檢測方案的制訂提供一定的參考依據。

1材料與方法

1.1材料

選擇2020年1月至2021年10月烏魯木齊市中醫醫院采血的患者264例血液標本進行研究，均為全血標本。非抗凝管留取血樣容量為每支5 ml，并使用抗凝管（枸櫞酸-枸櫞酸鈉）留取血樣，每支2 ml。 1.2試劑與儀器

本研究所使用試劑與儀器類型、所提供的廠家以及試劑和儀器的具體情況見表1。

1.3方法

非抗凝管血液標本保持靜置，對枸櫞酸-枸櫞酸鈉抗凝管中的血液標本來回顛倒，混勻5～8次[4]。一個酶標板88個樣本，三板共264個樣本。應用離心機對全部血液標本進行處理，離心時間均為5 min。離心處理完畢后，手工進行加樣，應用酶標分析儀進行后處理，經處理獲得最終的檢測結果[5-6]。對系統處理后的數據結果進行完整的收集和整理，得出檢測所得不同血液標本 A 值結果，均為初次檢測的數據結果。按照初次檢測結果進行篩選，得出初次檢測結果不一致的血液標本。對篩選得出的血液標本進行復試，方法與上述步驟保持一致。對復試后的數據結果進行統計，計算出一致率。

1.4觀察指標

統計不同血液標本初次檢測傳染性指標 A 值數據，統計初次檢測結果不一致的標本數量，對其進行復試。統計初次檢測0.8≤ S/CO ≤1的抗凝標本進行復試，并計算一致率。

1.5統計學處理

使用 SPSS 19.00統計學軟件對數據結果進行處理，不同標本的初次檢測傳染性指標 A 值平均數據結果以均數±標準差（ x ±s）表示，組間差異檢驗采用 t 檢驗，P <0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1不同血液標本初次檢測傳染性指標A值數據結果比較

對不同標本的初次檢測傳染性指標 A 值平均數據結果進行比較，乙型肝炎病毒（HBV）、人類免疫缺陷病毒（HIV）、梅毒螺旋體（TP）檢測結果方面，抗凝全血標本均高于非抗凝全血標本（P <0.05），在丙型肝炎病毒（HCV）檢測數據結果方面，非抗凝全血標本低于抗凝全血標本，但差異無統計學意義（ P >0.05），見表2。

2.2初次檢測結果不一致標本情況分析

264個樣本標本中，有5例初次檢測結果出現不一致，均表現為抗凝標本初次檢測出現反應性或灰區值。針對這5例標本，再次用抗凝與非抗凝標本各做一孔復試，上述5例標本的復試結果趨于一致。

2.3初次檢測0.8≤S/CO≤1的抗凝標本復試結果分析

初次檢測0.8≤ S/CO ≤1的抗凝標本共有22份，對其進行抗凝與非抗凝血各一孔的雙孔復試，22份標本經復試后，1份標本的結果為灰區，其余21份標本的結果為非反應性。最終的復試結果一致率為95.45%。

3討論

在對血液標本進行檢測的過程中，酶聯免疫吸附試驗的應用十分廣泛。這一方法操作簡單，靈敏度很高，便于進行結果分析判定[7-8]。但是，這一檢測方法的最終結果也容易受到一些因素的影響，如各種抗凝劑的使用等[9-10]。本研究結果顯示，經酶聯免疫吸附試驗初步檢測，抗凝標本與非抗凝標本在 HBV、HIV、TP 檢測結果方面差異有統計學意義（ P <0.05）。提示在最終獲得的初次檢測結果方面，抗凝與非抗凝血液標本之間存在一定的差異。對這一結果進行分析，在血液標本的檢測中，對血液標本應用一定的抗凝劑后進行酶聯免疫吸附試驗，最終獲得的數據結果會出現一定的偏差，造成一些檢測干擾。研究中經檢測發現，有5例初次檢測結果出現不一致，進行一孔復試后結果顯示，上述5例標本的復試結果趨于一致。在一定程度上表明，抗凝劑對于酶聯免疫吸附試驗確實存在干擾，但關于其具體機制，尚不十分清楚。另外，通過研究也發現，初次檢測0.8≤ S/CO ≤1的抗凝標本共有22份標本，對其進行復試并對復試結果進行統計和分析發現，22份標本經復試后，1份標本的結果為灰區，其余21份標本的結果為非反應性。最終的復試結果一致率為95.45%。由此可知，如果對相關的假陽性反應實施復試，則基本上可以解決這一問題。對這一過程中一過性假陽性出現的原因進行分析，可能與以下一些操作不規范等因素相關，如在檢測過程中，洗板不夠徹底，則可能會影響到最終的檢測結果準確性;如在進行加樣操作的時候對血清進行吹吸時產生一定的氣泡，或者扣干不完全，導致孔內出現液體過量殘留等問題，均可能影響到最終的檢測結果準確性，導致一過性假陽性問題的出現[11-12]。另外，血液來源情況也可能會導致最終檢測結果出現不夠精確的情況。如果相應血液標本對應患者的血清中非特異性 IgG 濃度過高，則極易導致檢測結果出現假陽性。檢測時，在制作酶聯免疫吸附試驗板時，如果在包被操作中蛋白質未能對聚苯乙烯表面予以完全覆蓋，那么便會導致添加到血清標本中的免疫球蛋白被部分吸附在包被抗原表面，或者出現酶結合物中的蛋白質部分吸附于包被抗原表面的情況[13-14]。上述情況的出現會導致本底增加，進而導致假陽性結果的出現。另外，檢測過程中需要使用各種試劑，從試驗中所使用的試劑角度進行分析，目前國內所普遍應用的試劑標本存在不夠統一的問題，試劑質量控制情況不同，從而極易對最終的試驗結果準確性產生一定的影響[15-16]。對上述研究結果進行綜合分析也可以得到一定的啟示，在醫療機構的日常血液標本檢測工作中，需要綜合考慮不同因素可能會對檢測結果產生的影響。在檢測時，針對抗凝血液標本初次檢測結果為陽性的標本，需要及時進行復試，得出相應結果，并進行科學分析和判定后，方可得出最終的檢測結果，以保證血液標準檢測質量。

綜上所述，在血液標本的檢測中，與非抗凝血液標本檢測結果進行比較，應用抗凝血液標本進行檢測時，經酶聯免疫吸附試驗檢測所得傳染性指標結果會出現假陽性，但通過復試可有效排除干擾。

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（收稿日期：2021-11-29）