痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者IL-22 基因位點(diǎn)rs2227473多態(tài)性與遺傳易感性的關(guān)系研究

葉路敏，陳云，應(yīng)婉倩，李池慧

痛風(fēng)是由于人體嘌呤代謝障礙，導(dǎo)致尿酸水平長(zhǎng)期過(guò)高，從而導(dǎo)致細(xì)胞外液中尿酸鈉結(jié)晶積累引起的晶體沉積性疾病，屬于關(guān)節(jié)炎的一種，并由最初的周圍關(guān)節(jié)滑膜炎的嚴(yán)重疼痛，最后發(fā)展為關(guān)節(jié)損傷和畸形[1]。其中尿酸鈉晶體是引起急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎發(fā)作的主要因素，痛風(fēng)是由于高尿酸血癥引起，但高尿酸血癥與痛風(fēng)是兩種不同疾病[2]。近年來(lái)，由于不良的生活習(xí)慣，如暴飲暴食、缺乏鍛煉等，高尿酸血癥和痛風(fēng)的發(fā)病率急劇上升。長(zhǎng)期痛風(fēng)會(huì)持續(xù)影響患者的日常生活，除間歇性發(fā)作和關(guān)節(jié)損傷外，高尿酸水平可能引起腎損傷、腎結(jié)石及尿毒癥等，嚴(yán)重影響患者的身體健康及工作生活[3-5]。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，白介素22（IL-22）在炎癥以及組織修復(fù)和傷口愈合中發(fā)揮作用，且有研究發(fā)現(xiàn)IL-22 參與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的發(fā)病過(guò)程，可誘導(dǎo)滑膜持續(xù)增生并發(fā)展為慢性炎癥，因此推測(cè)IL-22 在痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用[6]。本研究就IL-22 基因多態(tài)性與痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的相關(guān)性進(jìn)行探討，同時(shí)分析IL-22 基因多態(tài)性在痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者疾病發(fā)生與發(fā)展中的作用及其遺傳易感性，旨在為預(yù)防或阻斷痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生發(fā)展提供參考。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2019 年9 月至2021 年9 月在浙江省金華市人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科就診的87 例痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者為觀察組，另選取同期50 例健康體檢者為對(duì)照組，收集全部研究對(duì)象的基本信息。觀察組男59 例，女28 例；年齡19 ～75 歲，平均（54.4±17.3）歲；病程為1 ～19 d，平均（8.37±5.46）d。對(duì)照組男36 例，女14 例；年齡20 ～75 歲，平均（56.4±15.7）歲。兩組性別、年齡差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P ＞0.05）。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批通過(guò)。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎診斷標(biāo)準(zhǔn)，處于急性發(fā)病期；（2）免疫功能正常，無(wú)自身免疫病；（3）無(wú)智力障礙或者精神障礙。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）嚴(yán)重臟器功能障礙，并發(fā)其他惡性腫瘤疾病；（2）并發(fā)其他風(fēng)濕系統(tǒng)疾病；（3）并發(fā)其他引起血尿酸升高的疾病，如溶血性貧血、糖尿病酮癥酸中毒、乳酸酸中毒及甲狀旁腺功能亢進(jìn)等；（4）妊娠期或哺乳期。

1.3 方法

1.3.1 樣本采集 所有研究對(duì)象均在入院時(shí)抽取10 ml 靜脈血置于抗凝管內(nèi)，其中5 ml 用于提取全血DNA，另5 ml靜脈血于3500 r/min低溫離心8 min，分離血清，-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 血清IL-22 水平檢測(cè) 采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定血清IL-22 因子水平。取備用血清，采用酶標(biāo)儀（ELX800，伯騰儀器公司）嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書操作（IL-22 檢測(cè)試劑盒購(gòu)自英國(guó)Abcam 公司）。

1.3.3 基因多態(tài)性檢測(cè) SNP 位點(diǎn)選擇：利用NCBI-dbSNP數(shù)據(jù)庫(kù)和HaPMa-P數(shù)據(jù)庫(kù)，在人類基因庫(kù)中對(duì)12 號(hào)染色體q15 區(qū)域的IL-22 基因上的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行檢索并下載數(shù)據(jù)包；結(jié)合HaPloview 4.2 分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)包進(jìn)行IL-22 基因的tag SNPs 篩選，并根據(jù)既往文獻(xiàn)研究，選取rs2227473 位點(diǎn)進(jìn)行研究分析。

基因組DNA 提取：使用DNA 提取試劑盒（購(gòu)自上海生工生物工程有限公司）提取外周血中的DNA，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）擴(kuò)增DNA樣本，通過(guò)電泳與凝膠成像儀檢測(cè)目標(biāo)基因分型。

引物設(shè)計(jì)：使用PrimerPremier5 自主設(shè)計(jì)引物序列，并由上海生工生物工程有限公司合成，rs2227473 基因位點(diǎn)上游引物序列為5’-ACGTTGGATGACACTCAATTTAGCCATTCC-3'，下游序列為 5’-ACGTTGGATGATCCATCCATCTGTGGATAC-3’；GAPDH 基因上游引物序列為5’-TGCAC-CACCAACTGCTTAGC-3’，下 游 序 列 為 5’-GGCATG-GACTGTGGTCATGAG-3’。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法 采用 GraphpadPrism 7.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用2檢驗(yàn)；使用SHEsis進(jìn)行遺傳平衡分析，分析SNP 位點(diǎn)基因型及等位基因頻率分布是否滿足哈迪-溫伯格平衡（HWE）。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清IL-22 水平比較 觀察組血清IL-22 水平為（8.13±1.23）ng/L，對(duì)照組為（5.41±2.57）ng/L，對(duì)照組IL-22 水平低于觀察組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.557，P ＜0.05）。

2.2 SNP 位點(diǎn)基因型分布遺傳平衡情況 兩組IL-22 基因位點(diǎn)rs2227473 實(shí)際基因型分布與Hardy-Weinberg 平衡狀態(tài)下的理論分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（2=1.018，P ＞0.05），符合Hardy-Weinberg 遺傳平衡定律，抽取人群符合隨機(jī)性原則，具有群體代表性。

2.3 兩組IL-22 基因位點(diǎn)rs2227473 基因型及等位基因頻率比較 兩組rs2227473 基因位點(diǎn)TT 基因型分布與T、C等位基因頻率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P ＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩組IL-22 基因位點(diǎn)rs2227473 基因型及等位基因頻率比較 例（%）

2.4 不同性別rs2227473 基因多態(tài)性的基因型分布情況 兩組不同性別rs2227473 基因多態(tài)性分布差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P ＞0.05），見(jiàn)表2。

表2 不同性別rs2227473 基因多態(tài)性的基因型分布 例（%）

2.5 不同年齡段rs2227473 基因多態(tài)性的基因型分布情況 對(duì)照組不同年齡段等位基因T、C 分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05），觀察組不同年齡段TT基因型分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05），見(jiàn)表3。

表3 不同年齡段rs2227473 基因多態(tài)性的基因型分布 例（%）

3 討論

痛風(fēng)是一種尿酸鹽結(jié)晶沉積在關(guān)節(jié)，導(dǎo)致關(guān)節(jié)紅腫熱痛的疾病，可造成患者反復(fù)發(fā)作關(guān)節(jié)炎和軟組織損傷，其致死率不高，但疼痛等級(jí)較高，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量。近年來(lái)，痛風(fēng)的患病率越來(lái)越高，患病人群逐漸向年輕化發(fā)展[7]。痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病率男性多于女性，反復(fù)發(fā)作，致殘率高，治療手段多治標(biāo)不治本，甚至常規(guī)的治療方法有可能造成嚴(yán)重的二次傷害，只能依靠患者進(jìn)行早期診斷并誘導(dǎo)疾病緩解[8]。痛風(fēng)是一種典型的慢性代謝疾病，會(huì)給患者帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)，其與高尿酸血癥直接相關(guān)[1]。尿酸是嘌呤代謝的最終代謝產(chǎn)物，當(dāng)人體攝入嘌呤水平過(guò)高，或嘌呤代謝出現(xiàn)故障，尿酸就會(huì)在體內(nèi)積聚，當(dāng)尿酸鹽的濃度達(dá)到較高水平后，尿酸鹽晶體的形成風(fēng)險(xiǎn)便會(huì)增加[9]。痛風(fēng)的發(fā)展過(guò)程可分為四個(gè)階段：高尿酸血癥期、尿酸鹽結(jié)晶沉淀期、痛風(fēng)發(fā)作期和慢性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎。

IL-22 是由激活的Th17 淋巴細(xì)胞、先天淋巴樣細(xì)胞等細(xì)胞產(chǎn)生，可通過(guò)與上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞表面的IL-22 受體結(jié)合而作用，促進(jìn)機(jī)體的細(xì)胞增殖和組織修復(fù)，但在不同的疾病中，起到的作用也不盡相同[10]。有研究發(fā)現(xiàn)，急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者外周血IL-22 水平升高，其IL-22 濃度高于健康對(duì)照組，這提示IL-22 與急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎存在相關(guān)性，患者體內(nèi)滑液和組織中的IL-22 可能存在過(guò)表達(dá)，也可能是炎癥部位的IL-22游離所導(dǎo)致，但其具體機(jī)制仍需進(jìn)一步研究[11]。目前研究認(rèn)為，單核苷酸多態(tài)性（SNP）與復(fù)雜性疾病發(fā)病密切相關(guān)，在不同地區(qū)的人群之間具有遺傳差異性，本研究以痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者為研究對(duì)象，探討 IL-22 基因的多態(tài)性位點(diǎn)rs2227473 的分布特征，研究其與痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎易感性的關(guān)系。

本研究結(jié)果顯示觀察組血清IL-22水平高于對(duì)照組；在rs2227473 基因位點(diǎn)基因型分布與等位基因頻率比較中，觀察組的TT 基因型分布、T 等位基因頻率高于對(duì)照組；不同性別和不同年齡段的觀察組和對(duì)照組研究對(duì)象的rs2227473基因多態(tài)性分布有差異。上述結(jié)果提示IL-22 基因的多態(tài)性位點(diǎn)rs2227473 與痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎易感性相關(guān)，陽(yáng)性位點(diǎn)rs2227473 等位基因TT 為痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的高風(fēng)險(xiǎn)因素，而CC 為低風(fēng)險(xiǎn)因素，對(duì)該位點(diǎn)的等位基因進(jìn)行篩查可用于痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患病風(fēng)險(xiǎn)的監(jiān)測(cè)。