卵巢癌組織lncRNA NEAT1、CtBP2 表達及臨床價值

黃平 鐘細妹 陳光元 張梅芳 劉文毅 劉霄

卵巢癌會威脅到女性身體健康,從而形成惡性腫瘤,于婦科惡性腫瘤中占據第二,死亡率第一。此病發病隱匿,早期不會有顯著癥狀且容易轉移,患者預后不良。當前,卵巢癌病因不夠清楚,所以,卵巢癌的形成原因、惡性進展分子機制為臨床的重要熱度課題［1］。lncRNA 轉錄長度高于200 nt,編碼蛋白質功能不會有DNA 分子,是以RNA 形式存在遺傳、轉錄層面的調控基因表達,繼而加入機體諸多生理與病理環節。近幾年研究發現：lncRNA 在腫瘤發生與發展中發揮作用顯著,容易發展為部分惡性腫瘤比較特異的標志物,治療需用靶向療法［2］。NEAT1 為大小約3.2 kB 的lncRNA,所處位置為細胞核亞結構關鍵的lncRNA。研究發現：lncRNA NEAT1 可參與多種腫瘤的發生、發展過程［3］。CtBP2 為進化上高度保守的輔助轉錄抑制因子,能通過下調特定的腫瘤抑制因子,參與多種惡性腫瘤的發生、發展［3］。但當前lncRNA NEAT1、CtBP2 在卵巢癌形成和惡性進展中發揮的作用尚未有明確定論。本研究主要對卵巢癌組織lncRNA NEAT1、CtBP2 表達與患者臨床病理特征進行剖析。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018 年12 月～2020 年12 月本院收治的卵巢癌患者68 例,患者均經術后組織病理檢查確診,年齡20～68 歲,平均年齡(54.31±7.17)歲。另選取本院同期收治的卵巢良性囊腫患者20 例,年齡21～69 歲,平均年齡(55.20±6.66)歲。兩組患者年齡比較差異無統計學意義(P＞0.05),具有可比性。

1.2 方法 手術切除,剝離卵巢癌組織、卵巢囊腫組織,液氮下碾為粉末,用TRIzol 法提取組織總RNA,使用紫外分光光度計鑒定,OD260/OD280為1.8～2.0,可用于后續實驗。依據Revert AidTMFirst Strand cDNA Synthesis Kit 描述,將提取的總RNA 逆轉錄為cDNA,以cDNA 為模型,按SYBR Green 熒光定量PCR 試劑盒說明進行PCR 擴增。全部引物均由沈陽萬類生物科技有限公司設計合成,引物序列：lncRNA NEAT1上游引物5'-GGGATGAT-GCAAACAATTAC-3',下游引 物5'-TACCATACA-GAGCAACATAC-3'；CtBP2 上游引物5'-ATCCAC-GAGAAGGTTCTAAACG-3',下游引 物5'-CCG-CACGATCACTCTCAGG-3'；GAPDH 上游引物5'-CACCCACTCCTCCACCTTTG-3',下游引物5'-CCAC-CACCCTGTTGCTGTAG-3'。PCR 反應體系共25 μl：2×SYBR Green qPCR Mix 12.5 μl,上下游引物各0.5 μl,模板cDNA 2 μl,去離子水9.5 μl；反應條件：95℃ 15 min、95℃ 15 s、60℃ 40 s 共40 個循環。以GAPDH 為內參,采用2-△△CT法計算目的基因相對表達量。實驗重復3 次,取平均值。術后,電話或門診定期隨訪9～60 個月,平均隨訪33 個月。

1.3 觀察指標 比較卵巢癌組織與卵巢囊腫組織中lncRNA NEAT1、CtBP2 相對表達量,分析卵巢癌組織lncRNA NEAT1、CtBP2 相對表達量與患者臨床病理特征的關系。臨床病理特征包括腫瘤FIGO 分期(1 期、2 期、3～4 期)、淋巴結轉移(有、無)、年齡(≤55 歲、＞55 歲)、腫瘤直徑(≤3 cm、＞3 cm)、病理類型(漿液性、黏液性、其他)。

1.4 統計學方法 采用SPSS20.0 統計學軟件進行統計分析。計量資料以均數±標準差()表示,采用t檢驗。P＜0.05 表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 卵巢癌組織與卵巢囊腫組織中lncRNA NEAT1、CtBP2 相對表達量比較 卵巢癌組織中lncRNA NEAT1、CtBP2 相對表達量均明顯高于卵巢囊腫組織,差異具有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 卵巢癌組織與卵巢囊腫組織中lncRNA NEAT1、CtBP2 相對表達量比較()

表1 卵巢癌組織與卵巢囊腫組織中lncRNA NEAT1、CtBP2 相對表達量比較()

注：與卵巢囊腫組織比較,aP＜0.05

2.2 卵巢癌組織lncRNA NEAT1、CtBP2 相對表達量與患者臨床病理特征的關系 卵巢癌組織lncRNA NEAT1、CtBP2 相對表達量與患者腫瘤FIGO 分期、淋巴結轉移情況有關,差異具有統計學意義(P＜0.05)；卵巢癌組織lncRNA NEAT1、CtBP2 相對表達量與患者年齡、腫瘤直徑、病理類型無關,差異無統計學意義(P＞0.05)。見表2。

表2 卵巢癌組織lncRNA NEAT1、CtBP2 相對表達量與患者臨床病理特征的關系()

表2 卵巢癌組織lncRNA NEAT1、CtBP2 相對表達量與患者臨床病理特征的關系()

注：不同腫瘤FIGO 分期及淋巴結轉移情況比較,P＜0.05

3 討論

目前,我國卵巢癌發病率相對較低,但是死亡率一直居高不下,近幾年其5 年生存率僅30%左右,嚴重危害女性的生命健康［4-6］。隨著我國逐漸脫貧致富踏上小康道路,我國人民生活質量與生活水平都得到顯著升高,同時卵巢癌的發病率呈現出上升趨勢,且呈現年輕化趨勢。由于醫學界對卵巢癌的發病病因尚未得出確切結論,因此,探索研究卵巢癌的病因與醫治方式成為當前醫學界臨床研究的重大熱點之一［7,8］。

lncRNA 是一類非編碼的RNA,其廣泛存在于真核生物體內,其序列長、結構復雜。研究發現：lncRNA NEAT1 能夠促進卵巢癌OVCAR-3 細胞的增殖和侵襲,而敲除lncRNA NEAT1 的卵巢癌OVCAR-3 細胞增殖和侵襲明顯受到抑制［9,10］。

CtBP 家族因能夠和不同的氨基酸序列結合,進化上高度保守,是一類輔助轉錄抑制因子,家族有多個亞型,最為重要的當屬CtBP2,基因定位在染色體21q21.3。CtBP2 的中心結構域可與煙酰胺腺嘌呤二核苷酸結合,碳基末端能夠對基因進行翻譯后修飾,氨基末端則可特異性識別并結合特定轉錄抑制因子,三個結構域協同發揮輔助轉錄抑制因子功能［11］。CtBP是一類輔助轉錄抑制因子,可參與多種卵巢癌的發生、發展。研究表明：CtBP2 高表達可引起患者預后不良,因此,CtBP2 有可能成為測定卵巢癌患者預后的指標之一［12］。本研究中,卵巢癌組織lncRNA NEAT1、CtBP2 相對表達量與患者腫瘤FIGO 分期、淋巴結轉移情況有關,差異具有統計學意義(P＜0.05)；卵巢癌組織lncRNA NEAT1、CtBP2 相對表達量與患者年齡、腫瘤直徑、病理類型無關,差異無統計學意義(P＞0.05)。表明lncRNA NEAT1、CtBP2 在卵巢癌組織中呈高表達,參與了卵巢癌的發生和轉移全程。

綜上所述,卵巢癌組織lncRNA NEAT1、CtBP2 表達水平均高,兩者表達變化可能協同促使腫瘤惡性進展,致使患者預后不良。lncRNA NEAT1、CtBP2 有可能成為卵巢癌早期診斷和預后監測的生物標志物。