NGF和PGF2α受體表達(dá)與子宮腺肌病痛經(jīng)的關(guān)系

孫海燕 柴亞娟 張秀艷

子宮腺肌病是常見婦科良性疾病，主要是因?yàn)樽訉m內(nèi)膜的腺體及間質(zhì)侵入子宮肌層而發(fā)病。主要病理表現(xiàn)為異位內(nèi)膜組織在子宮肌層不斷生長(zhǎng)，經(jīng)期出血，導(dǎo)致子宮肌層增厚。臨床上多見于30～50歲的經(jīng)產(chǎn)婦，以經(jīng)量增多、經(jīng)期延長(zhǎng)和逐漸加重的進(jìn)行性痛經(jīng)為主要臨床表現(xiàn)[1]。目前該病缺乏特效藥物，根治該病的主要方法是手術(shù)治療。嚴(yán)重的痛經(jīng)降低患者生活質(zhì)量，影響其日常生活和工作，痛經(jīng)是促使其最終決定手術(shù)切除子宮的主要原因之一。子宮腺肌病患者痛經(jīng)的發(fā)生機(jī)制尚不明確，神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)和前列腺F2α受體(PTGFR)均為疼痛相關(guān)炎性介質(zhì)[2]，本研究觀察NGF和PTGFR在子宮腺肌病患者異位內(nèi)膜組織中的表達(dá)，通過不同痛經(jīng)程度患者兩者的表達(dá)水平，了解NGF和PTGFR與子宮腺肌病痛經(jīng)之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2017年1月至2019年1月收治的因子宮腺肌病行子宮全切或次全切除術(shù)患者40例為試驗(yàn)組，年齡32～53歲，平均年齡(45±3.84)歲；選取同期子宮肌瘤行子宮全切術(shù)或子宮次全切除術(shù)患者40例為對(duì)照組，年齡28～55歲，平均年齡(46±3.21)歲。2組臨床資料完整。術(shù)前通過視覺模擬評(píng)分法(visual analogue scale/score，VAS)對(duì)患者的痛經(jīng)進(jìn)行分級(jí)評(píng)分，試驗(yàn)組：輕度痛經(jīng)(0～3分)14例，中度痛經(jīng)(4～6分)16例，重度痛經(jīng)(7～10分)10例。對(duì)照組均為0～3分。2組患者均未合并子宮內(nèi)膜異位癥及其他內(nèi)分泌、神經(jīng)系統(tǒng)、心腦血管疾病等合并癥。且2組患者術(shù)前6個(gè)月內(nèi)均未使用激素類藥物或放置含孕激素宮內(nèi)節(jié)育器。2組患者一般資料具有均衡性。

1.2 試劑與方法 (1)NGF試劑和PTGF試劑均購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司?？贵w在1∶300濃度下工作。(2)方法：2組患者分別選取異位內(nèi)膜及內(nèi)膜組織石蠟包埋固定。患者石蠟標(biāo)本進(jìn)行4 μm厚連續(xù)切片待用。經(jīng)乙醇和二甲苯脫蠟、脫水、煮沸；再使用3%的過氧化氫水溶液，5～10 min的室溫孵育；3次PBS沖洗；5%～10%山羊血清工作液對(duì)其進(jìn)行封閉，再次對(duì)其進(jìn)行10 min的室溫孵育，然后滴加稀釋的一抗，兔抗人前列腺素F2α受體多克隆抗體、兔抗人神經(jīng)生長(zhǎng)因子單克隆抗體(抗體濃度1∶300)，在4℃下放置12 h。12 h后使用PBS沖洗。滴加二抗孵育20 min。再使用PBS沖洗。顯色劑顯色10 min，最后用純凈水沖洗，再染，脫水透明，封片后觀察。

1.3 陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn) 細(xì)胞胞漿、胞核兩者其一或兩者均出現(xiàn)棕黃色顆粒。陽(yáng)性判斷：將陽(yáng)性細(xì)胞按其顯色強(qiáng)度和染色數(shù)量分為4級(jí)。染色強(qiáng)度按無著色、淺黃色、棕黃色和棕褐色分別計(jì)0、1、2和3分。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<5%，評(píng)0分；染色細(xì)胞5%～25%，評(píng)1分；染色細(xì)胞26%～75%，評(píng)2分；染色細(xì)胞>75%，評(píng)3分。染色強(qiáng)度每張切片計(jì)分=(染色細(xì)胞分?jǐn)?shù)+染色強(qiáng)度分?jǐn)?shù))/2，分?jǐn)?shù)<0.5分為陰性(-)，分?jǐn)?shù)≥0.5分為陽(yáng)性。陽(yáng)性強(qiáng)度根據(jù)所得分值分為3個(gè)等級(jí)：0.6～1.4分為弱陽(yáng)性；1.5～2.4分為中度陽(yáng)性；≥2.5分為強(qiáng)陽(yáng)性。使用100倍光學(xué)顯微鏡，隨機(jī)選取5個(gè)視野對(duì)細(xì)胞進(jìn)行觀察；再使用400倍光學(xué)顯微鏡，隨機(jī)選取5個(gè)視野，對(duì)其進(jìn)行觀察，結(jié)果判定均經(jīng)2名病理醫(yī)師確認(rèn)。

2 結(jié)果

2.1 2組患者內(nèi)膜組織中NGF表達(dá)情況 試驗(yàn)組子宮內(nèi)膜組織中NGF表達(dá)高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Zc=2.801，P<0.05)。見表1，圖1。

表1 2組患者情況NGF表達(dá) n=40,例

NGF在子宮腺肌病異位內(nèi)膜組織的表達(dá) NGF在子宮肌瘤患者內(nèi)膜組織表達(dá)

2.2 2組患者內(nèi)膜組織中PTGFR表達(dá)情況 試驗(yàn)組內(nèi)膜組織PTGFR表達(dá)高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Zc=2.989，P<0.05)。見表2，圖2。

表2 2組患者PTGFR表達(dá)情況 n=40,例

PTGFR在子宮腺肌病異位內(nèi)膜組織的表達(dá) PTGFR在子宮肌瘤患者內(nèi)膜組織表達(dá)

2.3 NGF表達(dá)強(qiáng)度與痛經(jīng)程度的關(guān)系 試驗(yàn)組患者根據(jù)痛經(jīng)程度分組，痛經(jīng)程度不同的子宮腺肌病患者內(nèi)膜組織中NGF表達(dá)不同，隨痛經(jīng)程度增加，NGF表達(dá)水平增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(H=7.594，P<0.05)。見表3，圖3。

表3 NGF在不同痛經(jīng)程度患者內(nèi)膜組織的表達(dá) 例

圖3 NGF在不同痛經(jīng)程度患者內(nèi)膜組織的表達(dá)

2.4 PTGFR表達(dá)強(qiáng)度與痛經(jīng)程度關(guān)系 試驗(yàn)組患者根據(jù)痛經(jīng)程度分組，痛經(jīng)程度不同的子宮腺肌病患者內(nèi)膜組織中表達(dá)PTGFR不同，隨痛經(jīng)程度增加，PTGFR表達(dá)水平增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(H=9.47，P<0.05)。見表4，圖4。

表4 PTGFR在不同痛經(jīng)程度患者內(nèi)膜組織的表達(dá) 例

圖4 PTGFR在不同痛經(jīng)程度患者內(nèi)膜組織的表達(dá)

3 討論

子宮腺肌病是常見的一種婦科疾病，子宮內(nèi)膜腺體及間質(zhì)侵入子宮肌層是其基本病理特征，發(fā)病率為5%～70%[1]。該病是一種良性疾病，其主要臨床表現(xiàn)為進(jìn)行性加重的痛經(jīng)、月經(jīng)量增多等持續(xù)影響女性的身心健康，越來越引起人們的重視。嚴(yán)重痛經(jīng)影響女性的日常生活，是促使患者行根治性手術(shù)治療的主要原因之一。有研究表明，子宮腺肌病患者痛經(jīng)發(fā)生率為30.0%～77.8%，發(fā)病以>40歲經(jīng)產(chǎn)婦多見，近年來其發(fā)病年齡呈年輕化趨勢(shì)[2]。子宮腺肌病痛經(jīng)發(fā)生機(jī)制目前尚不明確，考慮為多因素共同作用的結(jié)果，這使患者痛經(jīng)治療變成臨床上的一個(gè)難題，目前缺乏根治性藥物。本研究發(fā)現(xiàn)子宮腺肌病異位內(nèi)膜組織中NGF、PTGFR表達(dá)均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在子宮腺肌病異位內(nèi)膜組織中NGF、PTGFR的表達(dá)水平隨痛經(jīng)程度的加重而增加。

NGF在疼痛中起著重要的調(diào)節(jié)作用。有研究認(rèn)為，NGF通過促進(jìn)炎性介質(zhì)的釋放、離子通道的開放、促進(jìn)神經(jīng)纖維的生長(zhǎng)導(dǎo)致疼痛，并與酪氨酸激酶受體結(jié)合調(diào)控離子通道及分子信號(hào)，從而參與疼痛的發(fā)生發(fā)展[3]。前列腺素PG是一大類具有廣泛生理活性的不飽和脂肪酸，是重要的致痛物質(zhì)和炎性介質(zhì)。本研究發(fā)現(xiàn)兩者在子宮腺肌病患者表達(dá)增高，且與痛經(jīng)程度相關(guān)，隨痛經(jīng)程度加重而升高。

研究表明，子宮內(nèi)膜異位癥和子宮腺肌癥患者的腹膜液和異位病變組織中NGF異常高表達(dá)[3]。也有研究表明痛經(jīng)的子宮腺腺肌病患者在位內(nèi)膜，異位肌層和子宮內(nèi)膜組織中的神經(jīng)纖維密度明顯高于無痛經(jīng)組。此外，異位內(nèi)膜中NGF異常高表達(dá)[4]。許琳娜等[5]研究認(rèn)為子宮腺肌病患者異位內(nèi)膜組織中的NGF異常表達(dá)與痛經(jīng)的嚴(yán)重程度與神經(jīng)纖維植入密度呈正相關(guān)[6]。NGF通過增加病變局部神經(jīng)纖維的密度來參與痛經(jīng)的發(fā)展顯著相關(guān)。前列腺素PG通過與異位內(nèi)膜細(xì)胞表面的受體相互作用活化或敏感化C神經(jīng)纖維末梢，對(duì)疼痛的產(chǎn)生起重要作用[7]。文獻(xiàn)報(bào)道PGF2α與原發(fā)性痛經(jīng)和子宮內(nèi)膜異位癥引起的繼發(fā)性痛經(jīng)密切相關(guān)[8]。PGF2α有可能是通過其作用在子宮螺旋小動(dòng)脈壁上的PGF2α受體(PTGFR)引起子宮平滑肌收縮。其收縮導(dǎo)致局部組織缺血缺氧，從而引發(fā)痛經(jīng)，子宮腺肌病患者的在位內(nèi)膜及異位內(nèi)膜PTGFR表達(dá)均高于正常子宮內(nèi)膜本研究結(jié)果與之相符，且在異位子宮內(nèi)膜組織NGF及PTGFR表達(dá)隨患者痛經(jīng)程度增加而增加。

研究認(rèn)為NGF通過促進(jìn)炎性介質(zhì)的釋放、離子通道的開放、促進(jìn)神經(jīng)纖維的生長(zhǎng)等導(dǎo)致疼痛，NGF本身是一種疼痛介質(zhì)，可以誘導(dǎo)疼痛傳遞過程中有關(guān)SP、CGRP和神經(jīng)因子的表達(dá)[9]。本研究發(fā)現(xiàn)NGF和PTGFR表達(dá)在試驗(yàn)組高于對(duì)照組，且二者的表達(dá)水平都隨痛經(jīng)程度增加而增加，考慮2組在子宮腺肌病痛經(jīng)的發(fā)生發(fā)展過程中可能存在協(xié)同作用。

全子宮切除術(shù)是根治子宮腺肌病的治療方法。隨著科技的發(fā)展和人們生活水平的不斷提高，患者對(duì)于疾病的治療效果也有了更高的要求，其要求在治療疾病的同時(shí)要求盡量保留組織器官，這就要求我們?cè)谥委熂膊r(shí)盡量選擇對(duì)患者生理、心理等因素影響小的治療方案。這也是很多患者不愿意接受手術(shù)治療而首選藥物治療的主要原因。通過藥物治療子宮腺肌病主要用于暫時(shí)緩解疼痛、縮小子宮體積和減少出血量，并非根治性治療方法[10]。目前常用的有促性腺激素釋放激素激動(dòng)劑(GnRH-a)，對(duì)于緩解患者痛經(jīng)及月經(jīng)過多癥狀能取得很好的效果，且可以于放置左炔諾孕酮宮內(nèi)釋放系統(tǒng)放置前或手術(shù)前應(yīng)用3～6個(gè)月，使子宮病灶縮??；左炔諾孕酮宮內(nèi)釋放系統(tǒng)(LNC-IUS)即“曼月樂”適用于沒有生育要求的年輕女性；高效孕激素受體拮抗劑米非司酮，可緩解疼痛，減少出血，甚至可以發(fā)生閉經(jīng)；芳香化酶抑制劑如來曲唑，目前生殖醫(yī)學(xué)科應(yīng)用較多；還有一些中藥如散結(jié)鎮(zhèn)痛膠囊等中成藥、中醫(yī)針灸治療等在緩解痛經(jīng)方面取得較好的效果。選擇藥物治療時(shí)需制定個(gè)體化治療方案，對(duì)于藥效不明顯或不良反應(yīng)較重，或停藥后再次出現(xiàn)癥狀的患者需更改為手術(shù)治療。

對(duì)于藥物治療后復(fù)發(fā)或藥物治療療效欠佳者，保守性手術(shù)治療越來越受到患者的青睞，各種保守性子宮腺肌病病灶切除術(shù)、子宮動(dòng)脈栓塞術(shù)、高頻聚焦超聲治療、保守性手術(shù)聯(lián)合藥物治療等在短期內(nèi)均取得較好的療效。

但因子宮腺肌病發(fā)病機(jī)制為多因素共同作用的結(jié)果，所以其保守治療或保守手術(shù)為主的綜合治療存在廣闊的前景，目前臨床研究發(fā)現(xiàn)各種保守性子宮腺肌病病灶切除術(shù)[11,12]、高頻聚焦超聲治療[13]、子宮動(dòng)脈栓塞術(shù)[14]、保守性手術(shù)聯(lián)合藥物治療、GnRH-a與聚焦超聲治療相結(jié)合的綜合治療也取得了良好的療效[15-17]。藥物治療與保守性手術(shù)治療相結(jié)合的綜合治療已在臨床上廣泛應(yīng)用，在今后的研究中可針對(duì)在痛經(jīng)發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用的NGF及PTGFR，研發(fā)更多可行的治療方法，以達(dá)到保留子宮的同時(shí)解除病痛的目的。