血清SOX9蛋白對胃癌的診斷及其與臨床病理特征的相關性

何衛美 謝驍

胃癌是常見的消化道惡性腫瘤之一，具有較高的發病率和死亡率[1-2]。目前，我國早期胃癌的診斷率仍較低，發現時多為進展期，患者5年總生存率低于30%[3]。尋找早期胃癌的診斷標志物對提高胃癌發現率以及延長患者生存期具有重要臨床意義。SOX9（SRYBox 9）是一種核轉錄因子蛋白[4]，在胃癌腫瘤組織中表達異常增加，且與胃癌的增殖及侵襲相關，提示其可能成為胃癌的標志物及潛在治療靶點[5-8]。目前，關于SOX9蛋白在胃癌患者血清中表達水平對胃癌診斷及其臨床病理特征相關報道罕見。該研究通過檢測胃癌、慢性胃炎和健康體檢人群血清SOX9蛋白水平，探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2015年1月至2017年12月湖州市中心醫院收治的胃癌患者85例，作為胃癌組。（1）納入標準：均經內鏡或手術后病理確診為胃癌；尚未接受放、化療。（2）排除標準：合并嚴重肝、腎、心腦血管病；具有其他惡性腫瘤病史；合并免疫系統疾病。其中，符合早期胃癌診斷標準（癌組織浸潤僅限于粘膜層及粘膜下層）患者22例；胃癌分期，I期12例、II期15例、III期32例、IV期26例。另選取同期慢性胃炎患者65例和健康體檢者63例作為對照組。三組一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。見表1。本研究經醫院醫學倫理委員會批準，所有研究對象簽署知情同意書。

表1 三組一般資料比較

1.2 研究方法 （1）采集所有研究對象清晨空腹靜脈血3 mL，以3,000r/min離心10 min，血清分裝并于-70 ℃儲存備用。血清SOX9蛋白水平檢測采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）試劑盒（ELH-SOX9-1，P48436，RayBiotech公司），按照說明書進行操作。在酶標儀（Model 680 Microplate Reader，美國BIO-RAD公司）上以雙波長450 nm/630 nm測定OD值。以標準SOX9蛋白稀釋后濃度為參考標準，標準曲線檢測范圍0～100 ng/mL，根據標準曲線計算樣本血清SOX9濃度，以ng/mL表示。（2）收集所有胃癌患者的臨床病理資料，包括Lauren分型、淋巴結是否轉移、TNM分期、浸潤深度、分化程度等。

1.3 統計學方法 采用SPSS24.0統計軟件。非正態分布的計量資料以 [M（P25，P75）] 表示，兩組比較采用非參數Mann-Whitney U檢驗，多組間比較采用非參數Kruskal-Wallis H檢驗。診斷試驗采用受試者工作特征（ROC） 曲線方法，并計算曲線下面積（AUC）。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同人群血清SOX9蛋白水平比較 胃癌組血清SOX9蛋白水平為76.8（48.1，84.3）ng/mL，慢性胃炎對照組血清SOX9蛋白水平為33.7（27.0，44.0）ng/mL，健康對照組血清SOX9蛋白水平為15.5（9.9，25.9）ng/mL。胃癌組的血清SOX9蛋白水平顯著高于其他兩組，差異有統計血意義（P＜0.05），見圖1。不同分期胃癌患者的血清SOX9蛋白水平比較，隨著胃癌的進展SOX9蛋白水平有逐漸上升的趨勢，見圖2。

圖1 三組的血清SOX9蛋白水平比較

圖2 不同分期胃癌患者血清SOX9蛋白水平

2.2 血清SOX9蛋白水平對胃癌的診斷價值 ROC曲線分析顯示，血清SOX9蛋白水平區分胃癌和慢性胃炎的AUC值為0.845（95% CI：0.780～0.911），見圖3A；區分胃癌和健康體檢者的AUC值為0.951（95% CI：0.920～0.981），圖3B；區分胃癌和非胃癌者的AUC值 為0.897（95% CI：0.851～0.944），圖3C。以 . 清SOX9蛋白水平46.0 ng/mL為診斷界值時，對胃癌診斷的敏感度為81.2%、特異度為88.3%。進一步對早期胃癌的診斷價值分析，AUC值為0.757（95% CI：0.659～0.855），血清SOX9蛋白水平對早期胃癌診斷的敏感度為72.7%，特異度為70.3%，見圖4。

圖3 血清SOX蛋白水平診斷胃癌的ROC曲線

圖4 血清SOX蛋白水平診斷早期胃癌的ROC曲線

2.3 血清SOX蛋白水平與胃癌臨床病理特征相關性分析 有淋巴結轉移、浸潤肌層、低分化、處于臨床進展期的胃癌患者血清SOX蛋白水平顯著高于無淋巴結轉移、浸潤未及肌層、高分化、臨床分期低的患者，差異有統計學意義（P＜0.05）。不同性別、年齡、Lauren分型分組胃癌患者的血清SOX蛋白水平比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表2。

表2 血清SOX9蛋白水平與胃癌患者臨床病理特征相關性分析

3 討論

胃癌的早期診斷對其治療和患者預后有重要意義，但目前缺乏早期診斷的生物標志物。SOX9是SOX家族成員之一，研究發現其在多種惡性腫瘤中表達增加，具有促進腫瘤惡性生物學表型的作用[9-15]。研究表明，SOX9蛋白在胃癌組織中表達增加，且在胃癌的發生發展中起到促癌作用[5，7-8]，但血清中SOX9蛋白表達水平對胃癌的診斷價值及其與臨床病理特征的相關性尚不清楚。

本研究通過檢測不同人群的血清SOX9蛋白水平，結果顯示胃癌患者血清SOX9蛋白水平顯著高于慢性胃炎患者及健康體檢者，差異有統計學意義（P＜0.05）。應用ROC曲線獲得血清SOX9蛋白水平區分胃癌和非胃癌的AUC值達0.897，診斷胃癌與非胃癌的敏感度和特異度分別為81.2%、88.3%。既往有研究報道，胃癌組織SOX9蛋白表達水平顯著高于癌旁組織[16-18]，但未對其在組織和血液中表達對胃癌診斷的性能進行評價。該研究結果顯示，血清SOX9蛋白水平對胃癌診斷有一定價值，進一步對早期胃癌的亞組分析顯示血清SOX9對早期胃癌具有一定的診斷意義，但敏感度并不是非常高，可能與研究納入的早期胃癌病例數較少有關，所得結論有一定局限性。還有一些胃功能指標應用于胃癌早期診斷的研究，比如胃蛋白酶原Ⅰ（PG）、胃蛋白酶原Ⅱ（PGⅡ）、胃泌素17（G-17）[19]，是否可以聯合SOX9與其他生物標志物以及常規腫瘤標志物（CA199、CA724、CEA）等構建診斷panel以提高胃癌早期診斷能力還有待進一步探討。

本研究中胃癌患者的血清SOX9蛋白水平與淋巴結轉移、分化、浸潤深度、臨床分期顯著相關（P＜0.05），與性別、年齡、Lauren分型等無相關性（P＞0.05）。既往有報道顯示，胃癌組織SOX9蛋白與腫瘤大小、浸潤深度、淋巴結轉移、TNM分期有關，與性別、年齡、腫瘤分化程度無顯著相關性[20]。但邵長明等[16]報道顯示，SOX9蛋白水平與胃癌患者的Lauren分型相關，因此SOX9蛋白與臨床病理特征的相關性值得進一步探討。本研究還顯示，血清SOX9蛋白水平隨著胃癌病情的進展呈現逐步升高趨勢，說明其表達可能與胃癌的進展有關。有多項研究表明，多種分子（miRNA、LncRNA）可以通過調控SOX9蛋白來促進胃癌腫瘤細胞的增殖、遷移、侵襲等惡性表型[21-24]，提示SOX9蛋白與胃癌的惡性生物學行為相關，在胃癌的發生發展中起著重要作用，SOX9可能成為潛在的診斷標志物和胃癌治療新靶點。邵長明等[16]研究還發現，組織高表達SOX9胃癌患者的總生存時間短于SOX9低表達患者，同時組織高表達SOX9胃癌患者的無進展生存時間也短于SOX9低表達胃癌患者[25]，SOX還被認為是胃癌復發的生物標志物[17，26]，以上結果均提示組織SOX9蛋白表達水平可能成為胃癌患者預后的判斷標志。本研究結果也顯示，血清SOX9蛋白水平與胃癌的侵襲、轉移和惡性進展有關，而且在臨床中血清樣本采集更方便、檢測更快捷，還能進行動態監測。

綜上所述，血清SOX9蛋白對胃癌有一定的輔助診斷價值，推測SOX9蛋白水平可能對胃癌的治療療效評估、復發和預后預測具有潛在臨床應用價值，還有待進一步研究驗證。