楓香樹不同部位中蘆丁含量的測定及楓香樹葉的生藥學研究

周燕霞，樂志燕

(江西醫學高等專科學校藥學院，江西 上饒 334000)

0 引言

楓香樹系金縷梅科楓香屬植物，因其外形與楓樹極為相似且有芳香味而得名，為1996年版《江西省中藥材標準》收載的中藥品種[1]。主要分布于我國河南、山東、江西、四川、云南等地，多生于平地。具有祛風除濕、利水除濕、解毒止痛、止血生肌等功效，臨床上常用于治療傷暑腹痛、創傷出血、泄瀉咳血等疾病[2]。研究顯示，楓香樹中含有色素、黃酮類、揮發油、酚酸類、環烯醚萜類等成分[3-4]，其中黃酮類化合物是楓香樹藥材中主要活性成分，具有抗炎鎮痛、抗氧化、抗抑郁以及抗腫瘤等多種藥理活性，常作為質量控制指標性成分[5]。據報道，楓香樹全身都是寶，其樹脂能入藥以解毒止痛、止血生肌，根、莖、葉及果實亦可入藥以祛風除濕、通絡活血[6-7]。目前，對于楓香樹不同部位中黃酮類成分的含量測定研究較少，僅有學者對楓香樹葉中黃酮類成分進行了HPLC含量測定研究，根和莖中黃酮類成分的含量測定研究還尚未見相關研究報道。因此，為進一步開發利用楓香樹藥材，本文以蘆丁為指標成分，建立了楓香樹不同藥用部位(根、莖、葉)中蘆丁的HPLC含量測定方法，對其進行性狀、顯微特征研究，以期為楓香樹藥材的資源開發、綜合利用和質量控制研究提供依據、奠定基礎。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1260高效液相色譜儀(安捷倫科技有 限 公 司 )；phenomonex-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱(上海精瑞科學儀器有限公司)；sartorius BS-124S電子天平(德國賽多利斯公司)；PH100-3B41L-IPL顯微鏡(江西鳳凰光學股份有限公司)；XL-02A中藥粉碎機(濟南歐萊博科學儀器有限公司)；檢驗篩(滬江儀器紗篩廠)，酒精燈及其他顯微鑒定為實驗室常用儀器。

1.2 試藥

對照品蘆丁(批號111869-201802，純度99.6%)購自中國藥品生物制品檢定所。楓香樹藥材購買于揭陽中藥市場，經鑒定為楓香屬植物楓香Liquid-ambar formosana Hance的根莖葉；甲醇、磷酸、無水乙醇、水合氯醛、間苯三酚、稀甘油、碘試液等均為分析純，乙腈為色譜純，水為去離子水。

表1 加樣回收率實驗結果(n=6)

2 方法與結果

2.1 不同部位中蘆丁含量的測定

2.1.1 色譜條件

采用phenomonex-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以乙腈(20)-0.1%磷酸水溶液(80)為流動相等度洗脫，檢測波長為 360 nm；流速為 1.0 mL·min-1；柱溫為30 ℃；進樣量10 μL。理論塔板數按蘆丁峰計算，應不得低于3000，結果見圖1。

圖1 HPLC色譜圖

2.1.2 標準品溶液制備

精密稱取蘆丁對照品16.0 mg，至50 mL容量瓶中，加70%乙醇溶解，定容，搖勻，配得質量濃度分別為0.32 mg·mL-1的對照品溶液。

2.1.3 供試品溶液制備

精密稱取干燥粉碎后的楓香樹根、莖、葉各1.0 g，分別置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇10 mL，稱重，超聲提取30 min，冷卻后稱重，用70%乙醇補足失重，得供試品溶液。

2.1.4 線性關系考察

精密吸取“2.2”項下對照品溶液 0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0 mL置 10 mL的容量瓶中，加入甲醇溶液并定容至刻度。按“2.1”項下色譜條件進樣分析，以峰面積Y對進樣濃度X計算得回歸方程Y=206685X+149.51(r=0.999 8)，表明蘆丁在濃度范圍0.008-0.32 mg·mL-1內與峰面積呈良好線性關系。

2.1.5 精密度試驗

取“2.2”項下對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件分析，連續進樣測定6次，計算峰面積。結果蘆丁峰面積RSD為1.73%，表明儀器的精密度良好。

2.1.6 重復性試驗

取楓香樹莖樣品6份，按“2.3”項下方法制成溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，計算峰面積。結果蘆丁峰面積RSD為1.38%，表明方法的重復性好。

2.1.7 穩定性試驗

取楓香樹莖樣品，分別在 0、2、4、8、12、24 h 下進樣測定分析。結果蘆丁峰面積RSD為2.05%。表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

2.1.8 加樣回收率試驗

取已知含量的楓香樹莖樣品6份，每份約0.5 g，按約1:1的比例加入對照品，按“2.3”項下方法制備成溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定并計算回收率。結果見表2，表明所建立的方法可行。

2.1.9 樣品含量測定

按“2.2”項下方法制備楓香樹根莖葉不同部位的供試品溶液，每批均平行制備3份，按“2.1”項下色譜條件對其進行含量測定，結果楓香樹不同部位中蘆丁的含量分別為：根0.0192 mg/g，莖0.0948 mg/g，葉中未檢測出蘆丁成分。

2.2 楓香樹葉的生藥學研究

2.2.1 原植物形態

為落葉喬木，多生長于山谷、山麓中，常與山毛櫸科、樟科、榆科等樹種混生。可達20-30 m的高度，胸徑最大者可達1m。小枝干后灰色，被柔毛，略有皮孔；芽體卵形，長1.0 cm左右，鱗狀苞片敷有樹脂，干后會呈現棕黑色，并且伴有光澤，具體形態特征如圖2所示。

圖2 楓香樹原植物

2.2.2 性狀鑒定

葉薄革質，其容易破碎，完整的葉片呈闊卵形，掌狀3裂，長大約在5-12 cm，寬大約在7-17 cm，兩側裂片平展；基部心形，邊緣有細鋸齒，干后灰綠色；下面有短柔毛，或變禿凈僅在脈腋間有毛；常狀脈3-5條，在葉下面明顯突起；齒尖有腺狀突；葉柄長大約7-11 cm，基部鞘狀，具體見圖3。

圖3 楓香樹葉藥材圖

2.2.3 顯微特征

藥材粉末灰綠色或淡棕色，非腺毛較多，單細胞，為厚壁非腺毛，細長；表皮細胞表面觀成不規則形，細胞壁彎曲，主為平軸式，副衛細胞大多為四個；導管主要為螺紋導管；草酸鈣方晶較小，分布不均；淀粉粒較小，單粒類球形，臍點明顯，復粒2~3分粒組成，具體見圖4。

圖4 楓香樹葉顯微鑒定圖

3 討論

隨著“健康中國”戰略的實施，大健康產業已得到廣泛認同和快速發展，中醫藥在大健康領域的作用越來越大，中藥材種植生產的規模也在逐步擴大。但中藥材在生產加工過程中，往往取單一部位入藥，剩余部位被廢棄，得不到科學合理的利用，既造成資源浪費，也嚴重污染環境[8]。近年來，隨著中藥被廣泛用于脫貧攻堅和鄉村振興，為使中藥資源利用最大化，很多學者對中藥傳統非藥用部位化學成分、藥理作用以及不同部位之間的藥理活性評價、有效成分比較、活性成分制備等方面開展了深入研究，并取得了豐碩的成果，為中藥非藥用部位的潛在藥用價值和資源開發奠定了基礎。

楓香樹不僅可以藥用，在環保方面也極具價值，既可改善生長地的土地質量、防止水土過度流失、凈化空氣質量、保護生態環境，還因樹葉鮮紅極具觀賞性，常在城市規劃中被用以環境美化[9]。此外，楓香樹作為傳統中藥，其全身是寶，均可藥用，樹脂能入藥以解毒止痛、止血生肌，根、莖、葉及果實亦可入藥以祛風除濕、通絡活血，是極具開發意義和價值的中藥。本研究一方面建立了HPLC法測定楓香樹不同部位中蘆丁含量并比較了含量差異，所建立的方法簡便可行、準確靈敏。另一方面利用現代顯微數碼成相系統及其他影像資料，對楓香樹葉的原植物形態、性狀、粉末的顯微特征進行了系統研究，研究結果清晰直觀、真實的顯示和反映了楓香樹葉藥材的原始形態、細胞特征，闡明了楓香樹葉藥材的鑒別要點，為后期楓香樹葉藥材的生藥學研究、資源開發利用以及質量標準完善提供參考依據。