男性年齡對精子質量影響的初步研究

湯姣，丁旭鋒，孫大林，黃園，史卿菁，馬韋*

(1.宜興市婦幼保健院，江蘇 無錫 214000；2.東南大學附屬中大醫院中西醫結合男科，江蘇 南京 210000)

0 引言

隨著國家三孩政策的落實，社會和家庭比較關注高齡夫妻的生育能力和妊娠過程中的母嬰安全問題。女性高齡是夫妻不易懷孕的獨立因素[1]，同時，男性年齡的增加對其生育能力的影響也是許多家庭和男性的顧慮，多數研究認為精子質量和年齡呈負相關。根據袁人培[2]等研究認為45 歲前隨著年齡的增加，男性精液的濃度無變化，活動精子活力有不同程度下降，但是活動精子的總數變化很小。本研究計劃通過比較分析20～27 歲與35～50歲兩組男性的精液參數變化，分析年齡對男性的生育能力的影響，同時也提醒男性要注意加強保健，關注男性生育力保存。

1 一般資料及方法

1.1 一般資料

本研究選擇2020 年1 月至2021 年11 月在宜興市婦幼保健院生殖健康門診檢查精液的男性，包括不育癥初診患者和孕前檢查的對象，按年齡分成兩組，其中20～27 歲的男性95 例為適齡組，平均年齡25.6 歲，中位數26 歲；35～50 歲的男性36 例為高齡組，平均年齡41.1 歲，中位數39 歲。研究對象的納入標準：有生育意愿的男性，無重要臟器疾病，第二性征明顯，性功能基本正常，有或無生育史。排除標準：不育癥病史超過2 年的初診男性，有明顯心、肝、腎病史的男性，經過藥物治療的不育癥病人，服用對精子有明顯損傷藥物的患者，檢查結果為無精子癥的患者，精子濃度低于5×106/mL，前向運動精子(PR)比率低于5%的患者，禁欲時間不在2～7 天范圍的男性，精神病或惡性腫瘤患者，存在Ⅲ度精索靜脈曲張的患者，存在隱睪或隱睪手術后的患者。

1.2 精液收集

本單位對于欲進行精液檢查的男性進行初步的健康指導，告知手淫取精的注意事項。本研究對象均在本單位生殖門診專門的取精室進行手淫取精，用專門的取精管(深圳市博銳德生物科技有限公司生產，批號：20200101)，取精后送至檢驗科恒溫水浴箱37 攝氏度進行保存，等待精液液化，30～60min 內液化后進行精液分析檢查，本研究精液液化時間均為小于60min。精液分析后取精液約0.7mL 裝入樣本保存管，進行-20℃冷凍保存后冷鏈送至金域檢驗試驗室進行精子DNA 碎片指數(DFI)的檢測。

1.3 精液分析

本單位采用上海北昂醫療技術有限公司生產的半自動精液分析儀，用移液器取精液10uL 滴于精子計數板，任意選取大于5 個高倍鏡視野，觀察精子大于200 條，對每一副圖像進行人工粗略計數，減去非精子的數量，通過動態圖像分析系統，取得精子檢測結果。本單位從事精液檢測的檢驗人員相對固定，均進行了專業的培訓。

1.4 精子DFI 檢測

將冷凍的精液用37℃水浴箱解凍后，根據精子濃度稀釋到標準的濃度，用專門的染色劑進行染色，將染色后的標本置入Sparrow 流式細胞儀，由專門的軟件進行分析得到精子DFI 值。

1.5 統計學方法

按照年齡對精液報告進行分類，人工輸入相關數據，使用SPSS 17.0統計學軟件分析處理相關數據，計量資料用表示，使用t 檢驗驗證差異的統計學意義，計數資料用χ2檢驗，若P＜0.05 表示不同齡組的差異有統計學意義，P＞0.05 表示不同年齡組的差異無統計學意義，即兩組無差別。兩組檢查對象的年齡分布呈現非正態分布，采用均數及中位數表示。

2 結果

2.1 不同年齡組精液主要參數的比較

兩組檢查對象的禁欲時間基本相等，兩組精液的精子濃度和精子活力即包括前向運動精子(PR)和非前向運動精子(NP)的百分率基本接近，差異無統計學意義(P＞0.05)。高齡組的精液量較低齡組低，差異有統計學意義(P＜0.05)。高齡組的DFI較適齡組DFI 有升高，但是兩組差異無統計學意義(P 值為0.14)，詳見表1。

表1 兩組男性精液主要參數的比較

2.2 不同年齡組的精子DFI 狀況比較

根據DFI 的數值分成三組，DFI＜15%表示精子DNA 完整好，DFI 處于15%～30%表示精子DNA 完整性一般，DFI＞30%表示精子DNA 完整性差，分別計數，統計比率。結果顯示：適齡組DFI＜15%的比率明顯高于高齡組，適齡組DFI＞30%的比率明顯低于高齡組，差異均有統計學意義(P＜0.05)，詳見表2。

表2 兩組男性精子DFI 分組情況比較

3 討論

高齡生育問題一直是生殖領域的研究重點[3]。有研究認為女性在26～30 歲時懷孕的不良妊娠結局的風險相對最小[4]，據劉佳等[5]綜述認為女性妊娠的最佳年齡是25～29 歲。女性的生育能力在30 歲以后就逐步下降，35 歲后下降更明顯。高齡男性的生育能力也是社會和家庭關注的問題，特別是我國多年來鼓勵晚婚晚育的政策，以及社會經濟工作壓力的影響，男性的生育年齡逐步推遲。據研究[6]，我國2010 年的人口數據顯示男性平均結婚年齡為26.7 歲，其后的10 年期間結婚年齡推遲了1.5 歲。近年來國家實行二胎及三胎政策，高齡男性生育的比率逐步提升。通常認為男性的最佳生育年齡不宜大于35 歲[7]。隨著男性年齡的升高，生育的風險逐步提高是臨床上基本共識,但是男性高齡生育的年齡界定值目前尚無明確的標準。

據研究[8]，男性50 歲后生育能力出現明顯下降，可能出現睪丸逐漸萎縮，雄性激素不同程度下降，性功能下降，甚至出現男性更年期癥狀，睪丸組織出現變化，生精細胞衰退，生精功能下降，精子的數量質量下降，不僅影響配偶的自然受孕機率，生殖安全性也逐步下降，可表現為配偶胚胎丟失，子代的畸形。隨著年齡的增加女方群體性表現為生育能力下降，而男性生育的衰退在群體表現的基礎上有明顯的個體差異性[9]。在50 歲以上的某個年齡階段部分男性的生育能力可能表現為很正常，高齡男性的生育能力還和國家、種族、遺傳、環境、營養、生活方式等有明顯的相關性。男性生育參數的下降和年齡的相關性也不完全同步。

據楊譯[10]研究認為男性在20～50 歲范圍內年齡與精子的濃度及精子DFI 無相關性，本研究也顯示適齡組和高齡組精子濃度無明顯異常，提示男性的生精功能隨年齡的增加衰退較慢，在50 歲前生精能力下降不明顯。多數研究[11]認為隨著年齡的增加精子活力會降低，本研究發現高齡精子活力(包括前向運動精子和非前向運動精子比率)和適齡組精子活力基本相同，差異無統計學意義。提示本研究中在50歲以前男性的精子活力變化不明顯，本研究結果有別于其他研究，可能和本研究樣本較少相關，也可能和適齡組中不育癥病人較多，導致了適齡組的精子活力下降有關。也可能與高齡組中的年齡結構不成正態分布，35～40 歲的男性偏多，導致高齡組總體樣本精子活力均數偏高。本研究發現男性在20～50 歲之間精子的數量和精子活力無明顯的差異，提示男性的睪丸生精功能在50 歲前維持在較穩定的水平。

傳統的觀念認為衡量精子的質量主要是精子濃度和活力以及精子形態學檢查，近年來研究認為上述檢測不能較好地評價精子的受精能力以及形成優質胚胎的能力，精子DNA 碎片指數是一個重要的評價指標[12]，精子的DNA 是精子參與受精和形成胚胎的關鍵物質，精子DNA 損傷將導致精子細胞核異常，如果損傷程度較嚴重將直接影響精子的功能。精子DNA 損傷的主要機制[13]可能和精子的細胞凋亡異常，精子發育過程中的氧化應激損傷，精子染色質在包裝過程中異常相關，也與感染和放化療的損傷等因素相關。據國外研究[14]，男性年齡大于35 歲，雙鏈DNA 斷裂、DNA 重度損傷的發生率明顯高于35 歲以下的男性，高齡男性精子細胞正常的凋亡機制減弱，DNA 受損的精子不能被有效地清除，也是受損DNA 精子增加的原因。高齡男性的微循環功能相對減弱，導致睪丸組織局部氧化應激損傷增加也易導致精子DNA 損傷。本研究發現高齡組男性的DFI 比適齡組的DFI 有增高趨勢，但是均數差異統計學意義不明顯，可能和高齡組樣本量較小有關。但是，在適齡組DFI＜15%的比率多于高齡組，DFI＞30%的比率低于高齡組，差異有統計學意義，說明了兩組DFI 存在差異，提示高齡男性的受精能力相對減弱，導致流產的風險增加。據報道[15-16]補腎活血中藥方養精膠囊可以降低精子的DFI，提升男性生育力。西藥維生素E、左卡尼汀及硫辛酸等[17-18]對精子DFI 增高的治療效果也較好，提示高齡男性生育有必要進行檢查治療。中醫藥對提高精子濃度及活力，改善男性腎虛乏力癥狀均有較好的療效[19]。

綜上所述，對于不到50 歲有備孕計劃的男性不必過度擔心精子濃度和精子的活力下降，但是隨著年齡增加會出現精液量減少，精子DFI 升高。精液量輕度下降對生育的影響較小，精子DFI 升高對生育的影響較大，因此對備孕期的男性應該進行精子參數的檢測，關注精子DFI，提倡健康的生活方式，必要時及時藥物干預，以提升生育能力。