OPN、EGFL7在乳腺癌患者癌組織中的表達及臨床意義

趙帥華，楊敬，董衛紅

（濮陽市安陽地區醫院 病理科，河南 安陽 455000）

乳腺癌主要指發生于乳腺上皮組織的惡性腫瘤，發病早期臨床治愈率較高，而晚期可發生遠處轉移，致使全身多器官病變，病死率高，預后較差。文獻［1］報道，病灶分化程度、淋巴結轉移及分期等臨床病理特征與乳腺癌患者預后密切相關。骨橋蛋白（osteopontin,OPN）主要存在于細胞外基質，是一種磷酸化糖蛋白，與多種惡性腫瘤生長存在密切關系［2］。表皮生長因子樣結構域-7（epithelial growth factor-like domain 7,EGFL7）是一種表皮生長因子，可調控血管的生成、發育及內皮細胞遷移［3-4］。提示OPN、EGFL7 與乳腺癌患者臨床病理特征可能存在聯系。鑒于此，本研究旨在分析OPN、EGFL7 在乳腺癌患者癌組織中的表達及臨床意義，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象

本研究已通過濮陽市安陽地區醫院醫學倫理委員會審批。前瞻性選取2019 年1 月至2020 年12 月期間于濮陽市安陽地區醫院接受診療的82 例乳腺癌患者為研究對象。納入標準：①觀察組符合乳腺癌相關診斷標準［5］；②近3 個月無嚴重外傷史、手術治療史；③簽署知情同意書。排除標準：①接受放射或化學治療；②合并認知障礙或精神疾?。虎酆喜⑵渌麗盒阅[瘤。入選者年齡39～68 歲，平均（52.63±6.15）歲；體質量指數19～26 kg/m2，平均（22.42±1.02）kg/m2；腫瘤直徑1.2～5.4 mm，平均（2.89±0.63）mm。

1.2 方法

1.2.1 乳腺癌組織OPN、EGFL7 檢測 采集所有入選者癌組織標本，固定于10%甲醛溶液，常規脫水、石蠟包埋，連續切片，于80℃下烤片2 h備用，常規脫蠟、乙醇處理；使用磷酸鹽緩沖液沖洗3 次，5 min/次，于95℃下采用乙二胺四乙酸抗原修復15 min，暴露抗原，滴加3%H2O2于37℃下孵育10 min，滴加正常山羊血清封閉15 min，加入一抗（兔抗人多克隆抗體，北京中杉金橋生物技術）150 mL，于4℃下孵育過夜，磷酸鹽緩沖液沖洗3 次，3 min/次；添加二抗（羊抗鼠抗體，美國OriGene 公司），室溫下孵育15 min，磷酸鹽緩沖液沖洗3 次，3 min/次；添加免疫組織化學試劑（北京博奧森生物技術），磷酸鹽緩沖液沖洗3次，3 min/次，二氨基聯苯胺顯色10 min，蘇木精復染，用已知陽性切片作為對照。OPN、EGFL7陽性判定標準：腫瘤細胞的細胞膜或細胞質中出現棕褐色、棕黃色、淺黃色，隨機選擇5 個高倍鏡視野，每個視野腫瘤細胞計數200 個，共1 000個，依據視野中陽性細胞數占腫瘤細胞總數的百分比對其性質進行判斷，陽性：染色細胞數≥10%，陰性：染色細胞數＜10%。

1.2.2 乳腺癌臨床病理特征評估 結合影像學檢查、癌組織活檢結果評估乳腺癌患者臨床病理特征，主要包括TNM 分期（tumor node metastasis classification,TNM）（Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期）、淋巴結轉移（有、無）、腫瘤直徑（≥2 cm、＜2 cm）、分化程度（低分化、中/高分化）等。

1.3 統計學方法

采用SPSS 24.0 軟件進行數據處理，計量資料用均數±標準差（）表示，組間用獨立樣本t檢驗，計數資料用百分率（%）表示，采用χ2檢驗。分析乳腺癌癌組織中OPN、EGFL7 表達評估TNM 分期及淋巴結轉移的風險價值，曲線下面積（AUC）評價：AUC≤0.50，無診斷價值；0.50＜AUC≤0.70，診斷價值較低；0.70＜AUC≤0.9，診斷價值中等；AUC＞0.9，診斷價值較高。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同病理特征乳腺癌患者癌組織中OPN 陽性表達率比較

TNM 分期為Ⅲ～Ⅳ期、發生淋巴結轉移的乳腺癌患者癌組織中OPN 陽性表達率高于TNM 分期為Ⅰ～Ⅱ期、未發生淋巴結轉移的乳腺癌患者，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 不同病理特征乳腺癌患者癌組織中OPN 陽性表達率比較 [n(%)]

2.2 不同病理特征乳腺癌患者癌組織中EGFL7陽性表達率比較

TNM 分期為Ⅲ～Ⅳ期、發生淋巴結轉移的乳腺癌患者癌組織中EGFL7 陽性表達率高于TNM 分期為Ⅰ～Ⅱ期、未發生淋巴結轉移的乳腺癌患者，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 不同病理特征乳腺癌患者癌組織中EGFL7 陽性表達率比較 [n(%)]

2.3 癌組織中OPN、EGFL7 表達評估乳腺癌患者TNM 分期及淋巴結轉移價值分析

將OPN、EGFL7 表達情況作為自變量，將乳腺癌患者TNM 分期、淋巴結轉移情況作為因變量（1=Ⅲ～Ⅳ期間、淋巴結轉移，0=Ⅰ～Ⅲ期間，無淋巴結轉移），繪制ROC 曲線（見圖1、圖2）結果顯示，OPN、EGFL7 表達評估乳腺癌患者TNM 分期、淋巴結轉移的AUC 均＞0.7，具有一定評估價值。見表3。

表3 癌組織中OPN、EGFL7 表達評估乳腺癌患者TNM 分期及淋巴結轉移價值分析

圖1 OPN、EGFL7 對乳腺癌患者TNM 分期評估的ROC 曲線圖

圖2 OPN、EGFL7 對乳腺癌患者淋巴結轉移評估的ROC 曲線圖

3 討論

目前臨床針對乳腺癌主要以手術治療為主，化療為輔的方式，但不同病理特征的乳腺癌患者治療方案存在差異性［6-7］。因此早期評估乳腺癌患者臨床病理特征，在治療方案的選擇、預后評估等方面有重要意義。

有研究指出，腫瘤血管形成在乳腺癌發生、增長、浸潤、侵襲過程中發揮重要作用，一方面腫瘤新生血管細胞間缺少平滑肌的連接，致使血管基膜不完整、血管壁較薄，癌細胞易通過新生血管基底膜向遠處轉移；另一方面腫瘤血管可提供癌細胞生長、增殖所必需的氧及其他營養物質［8-9］。OPN 廣泛存在于細胞外基質中，介導骨基質與骨組織細胞的連接，在骨基質重吸收和礦化過程中起到重要作用［10］。EGFL7 屬分泌蛋白，在血管內皮中呈特異性表達，可調節細胞粘附作用［11］。本研究結果顯示，TNM 分期為Ⅲ～Ⅳ期、發生淋巴結轉移乳腺癌患者癌組織中OPN、EGFL7 陽性表達率高于TNM 分期為Ⅰ～Ⅱ期、未發生淋巴結轉移乳腺癌患者，提示OPN、EGFL7乳腺癌TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期、淋巴結轉移患者癌組織中呈高表達。分析其原因，OPN 在血管再生、信號傳導、細胞粘附、細胞免疫等方面具有多種生物功能，在特定的病理、生理環境下，OPN 可與CD44 蛋白及多種整合素受體相結合，加速腫瘤細胞生成與分裂，對腫瘤細胞的異常增殖產生誘導作用，其在促進腫瘤細胞生長、促進腫瘤血管形成、抑制腫瘤細胞凋亡等多個環節中起到重要作用［12-13］。EGFL7 可對細胞外調節蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases,ERK）信號通路產生調節作用，將信號從表面受體傳導至細胞核，促進內皮細胞遷移［14］。此外，EGFL7 還可調控β-連環蛋白信號通路，對乳腺癌細胞的上皮-間質轉化過程產生促進作用，強化腫瘤細胞侵襲能力，加速疾病進程［15］。繪制ROC 曲線發現OPN、EGFL7 表達評估乳腺癌患者TNM 分期、淋巴結轉移的AUC 均＞0.7，具有一定評估價值。提示乳腺癌患者癌組織中OPN、EGFL7 表達與腫瘤病理特征相關。

綜上所述，OPN、EGFL7 在乳腺癌患者癌組織中陽性表達率較高，與乳腺癌TNM 分期、淋巴結轉移密切相關。